宮血凈顆粒中藥物薄層色譜法鑒別

劉立軒

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宮血凈顆粒中藥物薄層色譜法鑒別

劉立軒

目的：探討宮血凈顆粒中藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜(TLC)法鑒別宮血凈顆粒中的黃芪、茜草、枳殼、益母草四味中藥。結(jié)果：TLC法可以鑒別出黃芪、茜草、枳殼、益母草的特征斑點(diǎn)，專屬性強(qiáng)。結(jié)論：TLC結(jié)果可靠，簡(jiǎn)便易行，可作為宮血凈顆粒的質(zhì)量控制依據(jù)。

宮血凈顆粒； 薄層色譜法； 黃芪； 茜草； 枳殼； 益母草

宮血凈顆粒為醫(yī)院制劑由北劉寄奴、續(xù)斷、黃芪、益母草、馬齒莧、茜草等九味藥物組成，主要用于月經(jīng)不調(diào)，月經(jīng)過(guò)多。陳梅等[1]曾報(bào)道宮血凈顆粒治療月經(jīng)過(guò)多56例，療效較好。本實(shí)驗(yàn)采用TLC法鑒別宮血凈顆粒中的黃芪、茜草、枳殼、益母草四味中藥，結(jié)果表明該方法操作簡(jiǎn)便易行、重復(fù)性好，可作為宮血凈顆粒質(zhì)量控制的重要依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與材料

CQ-939全自動(dòng)薄層制板機(jī)(北京恒奧德儀器儀表有限公司)；WFH-201紫外投射儀(上海精科)；KZW-G型儀表恒溫不銹鋼水浴鍋(上海)；SB-3200DTS超聲波清洗機(jī)(寧波新芝)；梅特勒電子天平(萬(wàn)分子一)；薄層層析硅膠G(青島裕寶精細(xì)化工有限公司)；大葉茜草素對(duì)照品(批號(hào)為：110884-200604)、黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)為：110781-201314)、茜草對(duì)照藥材(批號(hào)為：1049-200301)、柚皮苷(批號(hào)為：110722-201111)、鹽酸水蘇堿對(duì)照品(批號(hào)為：110712-201111)均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所；水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 黃芪的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒三批各5g，研細(xì)，加50ml水使溶解，用水飽和正丁醇分3次提取，每次30ml，合并3次正丁醇提取液，再用1%氫氧化鈉溶液每次50ml分2次提取，棄去氫氧化鈉提取液，然后再用正丁醇飽和的水每次50ml洗滌2次，棄去水液，將正丁醇液用水浴蒸干，再加甲醇1ml使殘?jiān)芙?，制成供試品溶液?2)對(duì)照品溶液的制備：用甲醇溶解黃芪甲苷對(duì)照品制成1mg/ml的對(duì)照品溶液。(3)陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含黃芪的陰性樣品，以2.1.1方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開(kāi)劑：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(10：20：11：5)10℃以下放置的下層溶液。

2.1.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開(kāi)，取出，涼干，噴以10%硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈(365nm)下檢視，現(xiàn)相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖1。

2.2 茜草的鑒別[2-3](1)供試品溶液、茜草對(duì)照藥材溶液的制備:取宮血凈顆粒3批各10g，研細(xì)，加甲醇40ml，超聲處理30min，濾過(guò)，將濾液蒸干，用1ml甲醇使殘?jiān)芙?，制成供試品溶液。取茜草?duì)照藥材3g，加甲醇20ml，按供試品溶液同法制成對(duì)照藥材溶液。(2)對(duì)照品溶液的制備：用甲醇溶解大葉茜草素對(duì)照品制成2mg/ml的對(duì)照品溶液。(3)陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含茜草的陰性樣品，以2.2.1方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.2.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開(kāi)劑：石油醚(60℃～90℃)-丙酮(4：1)。

2.2.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開(kāi)，取出，涼干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜在與對(duì)照藥材和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖2。

2.3 枳殼的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒3批各10g，研細(xì)，加30ml水使溶解，置分液漏斗中用乙醚萃取2次，每次25ml，棄去乙醚液，水層再用乙酸乙酯每次30ml提取2次，將2次乙酸乙酯提取液合并后置水浴蒸干，加甲醇1ml使殘?jiān)芙猓瞥晒┰嚻啡芤骸?2)對(duì)照品溶液的制備：用甲醇溶解柚皮苷對(duì)照品制成1mg/ml的對(duì)照品溶液。(3)陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含枳殼的陰性樣品，以2.3.1方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.3.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5mm的硅膠G板，于105℃活化30min。展開(kāi)劑：甲苯-乙酸乙酯-丙酮-水-甲酸 (2：2.5：5：0.5：0.5)。

2.3.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各15μl，取對(duì)照品溶液10μl，于同一硅膠G薄層板上點(diǎn)樣，待充分展開(kāi)后，取出，涼干，噴以2%三氯化鋁甲醇溶液，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。見(jiàn)圖3。

2.4 益母草的鑒別[2-3](1)供試品溶液的制備：取宮血凈顆粒3批各15g，研細(xì)，加50ml水使溶解，用2mol/l鹽酸調(diào)節(jié)pH值至1～2，酸液通過(guò)已處理好的強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(內(nèi)徑10mmm，柱高20cm)，先以水洗脫至流出液近無(wú)色，棄去水洗液，再以100ml乙醇-氨水(8：2)混合溶液洗脫，收集洗脫液，將洗脫液用水浴蒸干，加乙醇1ml使殘?jiān)芙猓瞥晒┰嚻啡芤骸?2)對(duì)照品溶液的制備：用甲醇溶解鹽酸水蘇堿對(duì)照品制成5mg/ml的對(duì)照品溶液。(3)陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例以宮血凈顆粒制備工藝制成不含益母草的陰性樣品，以2.4.1方法制成陰性對(duì)照溶液。

2.4.1 色譜條件 薄層板：以0.3%羧甲基纖維素鈉為黏合劑制備厚度0.5m的硅膠G板，于105℃活化30min。展開(kāi)劑：丙酮-無(wú)水乙醇-鹽酸(10：6：1)。

2.4.2 鑒別方法 照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2010版一部附錄VIB)試驗(yàn)，取供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各20μl，取對(duì)照品溶液10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，展開(kāi)，取出，涼干，噴以稀碘化鉍鉀試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。見(jiàn)圖4。

1、2、3為樣品，4 黃芪甲苷對(duì)照品，5 陰性對(duì)照 1、2、3為樣品，4茜草對(duì)照藥材，5大葉茜草素對(duì)照品，6陰性對(duì)照

1 、2、3為樣品，4柚皮苷對(duì)照品，5陰性對(duì)照 1、2、3樣品，4鹽酸水蘇堿對(duì)照品，5陰性對(duì)照

3 討論

宮血凈顆粒由北劉寄奴、續(xù)斷、黃芪、益母草、馬齒莧、茜草等九味藥物組成，方中北劉寄奴活血止血為君藥，益母草活血養(yǎng)血祛瘀，馬齒莧涼血散熱，貫眾炭涼血止血，黃芪補(bǔ)中益氣，川續(xù)斷補(bǔ)血生血。諸藥合用，共奏清熱涼血，化瘀止血，益氣扶正的作用。本品組方是在傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，根據(jù)“宮血”的發(fā)病機(jī)制及演變規(guī)律，既能快速止血以治標(biāo)，又能益氣扶正、固沖攝血以治本，從而有效的改善機(jī)體狀態(tài)，增強(qiáng)了機(jī)體的抵抗力，使臟腑功能得到有效調(diào)節(jié)，本固血充則月經(jīng)自調(diào)，使瘀血去，新血生而歸經(jīng)，以達(dá)止血之目的。

根據(jù)方中各藥材有效成分及制備工藝，結(jié)合查閱相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI薄層色譜法，對(duì)宮血凈顆粒進(jìn)行了薄層鑒別研究。經(jīng)過(guò)鑒別研究，結(jié)果表明，黃芪、茜草、枳殼、益母草采用TLC法專屬性、重復(fù)性良好，方法簡(jiǎn)便可行,可以作為宮血精顆粒質(zhì)量控制的指標(biāo)。另外，對(duì)方中北劉寄奴、馬齒莧、綿馬貫眾、仙鶴草也按藥典方法進(jìn)行了薄層鑒別的研究[2]，但經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，分離情況均不太理想，不能有效展開(kāi)，Rf值偏小，重現(xiàn)性、專屬性較差，還需進(jìn)一步研究，暫時(shí)不適合作為該制劑質(zhì)量控制的指標(biāo)。

[1] 陳梅，楊援朝，鄭敏沛.宮血凈顆粒治療月經(jīng)過(guò)多56例[J].陜西中醫(yī)，2009,30(7)：775.

[2] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S]．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

[3] 呂武清，龍新華．中成藥中的藥材薄層色譜鑒別[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：36.

寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物與制藥系，寧夏 銀川 750021

劉立軒(1978-)，男，講師，大學(xué)。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.01.038

R 917

A

1008-7044(2017)01-0088-03

2016-07-28)