硝酸酯后處理對(duì)心臟缺血再灌注損傷心肌保護(hù)的效果分析

朱夢(mèng)霞　王芳　楊麒玉　黃靚

[摘要]目的：探討硝酸酯后處理在心臟缺血再灌注損傷中的應(yīng)用價(jià)值及對(duì)心肌的保護(hù)效果。方法選取30只Wistar大鼠，行麻醉處理后，連接并準(zhǔn)確對(duì)II導(dǎo)聯(lián)心電圖記錄，大鼠I/R模型應(yīng)用改良Pferfer MA推管法予以制備。隨機(jī)將動(dòng)物模型分為3組，各10只。即I/R組、IPostC組、PI-PostC組。結(jié)果：IPostC組實(shí)驗(yàn)大鼠和PI-PostC組實(shí)驗(yàn)大鼠心梗面積、心肌細(xì)胞凋死指數(shù)、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組，均呈顯著縮小或降低顯示（P<0.01）。PI-Postc組大鼠相較IPostC組，心肌缺血面積顯著縮小（P<0.01），但心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、血cTnI水平、心梗面積無(wú)差異（P>0.05）。結(jié)論：缺血后處理、硝酸酯后處理，均可發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷作用，且可使心肌缺血面積明顯縮小，其中IPostC縮小幅度更為顯著。

[關(guān)鍵詞]硝酸酯后處理；心臟缺血；再灌注損傷；心肌保護(hù)

研究表示，在心梗發(fā)生后，行積極的再灌注處理可使心肌壞死面積明顯減少，但此項(xiàng)操作具一定損傷性，常造成心肌細(xì)胞壞死和凋亡程度加重。以往動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，采用缺血后處理（IPostC）可促梗死面積縮小，最大程度減輕缺血再灌注（I/R）損傷。但I(xiàn)PostC因具有創(chuàng)性，故應(yīng)用受限，而采用藥物后處理（PI-PostC）可將相關(guān)信號(hào)通路直接激活，或?qū)ψ陨韮?nèi)源性保護(hù)物質(zhì)進(jìn)行模擬，來(lái)發(fā)揮保護(hù)心肌的作用，明顯降低了手術(shù)損傷風(fēng)險(xiǎn)。本次研究就硝酸酯后處理價(jià)值展開(kāi)探討，現(xiàn)回顧結(jié)果如下。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

選取30只Wistar大鼠，行麻醉處理后，連接并準(zhǔn)確對(duì)II導(dǎo)聯(lián)心電圖記錄，大鼠I/R模型應(yīng)用改良PferferMA推管法予以制備。隨機(jī)將動(dòng)物模型分為3組，各10只。

（1）I/R組：在對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后，將其完全開(kāi)放，行180min再灌注操作；

（2）IPostC組：在對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后，于開(kāi)始再灌注缺血前，行三個(gè)連續(xù)的呈循環(huán)狀態(tài)下30s/30s I/R后處理操作，后將左前降支完全開(kāi)放，并行180min的再灌注處理；

（3）PI-PostC組：對(duì)左前降支行結(jié)扎處理40min后，于開(kāi)始再灌注前，經(jīng)左頸總動(dòng)脈，將5mg/kg的硝酸異山梨醇注入，5min后，左前降支再灌注180min，將5mg/kg硝酸異山梨醇持續(xù)注入20min。

1.2方法

（1）測(cè)定心梗面積：采用雙染法進(jìn)行測(cè)定，即氯化三苯四氮唑（TTC）與Evans blue。經(jīng)頸動(dòng)脈，在行再灌注處理3h后，予以取血，后取2%濃度的Evans blue快速經(jīng)頸靜脈進(jìn)行推注，將心臟迅速摘取，自心底向心尖，將左心室垂直心臟縱軸方向切為6片，每片最度在2mm左右。于1%TTC溶液中放置，調(diào)整水浴溫度為37℃，行15min的避光孵育，取出標(biāo)本后，采用10%甲酸溶液行1h固定，于自然光下進(jìn)行拍照。正確記錄染色結(jié)果，即梗死心肌組織經(jīng)觀察表現(xiàn)為白色，正常心肌組織為藍(lán)色，缺血心肌組織為磚紅色。各區(qū)域面積用圖像分析軟件進(jìn)行測(cè)定，得出總面積。其中左心室面積為藍(lán)色、紅色、白色面積之和；梗死面積為白色區(qū)域面積；缺血區(qū)面積為紅色、白色面積之和。

（2）測(cè)定心肌肌鈣蛋白（eTnI）：完成再灌注后，自實(shí)驗(yàn)大鼠右頸動(dòng)脈分別采血1ml，行15min的離心操作，留取上清，保存于-80℃冰箱中，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)eTnI檢測(cè)。

（3）測(cè)定心肌細(xì)胞凋亡：心肌石蠟標(biāo)本常規(guī)制備，應(yīng)用TUNEL法原位檢測(cè)心肌組織切片中表現(xiàn)出的細(xì)胞凋亡情況。光鏡下，細(xì)胞核呈棕黃色或棕褐色顆粒，與凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征符合，即可按凋亡細(xì)胞判定。自每張切片出現(xiàn)凋亡細(xì)胞的區(qū)域，取高倍視野10個(gè)，對(duì)平均每100個(gè)細(xì)胞中含有的凋亡細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)算，調(diào)亡指數(shù)（AD采用百分?jǐn)?shù)（%）表示。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

涉及數(shù)據(jù)均輸入spss13.0，組間計(jì)量資料采用（x+s）表示，行t檢驗(yàn)，P<0.05具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2結(jié)果

IPostC組實(shí)驗(yàn)大鼠和PI-PostC組實(shí)驗(yàn)大鼠心梗面積、心肌細(xì)胞凋死指數(shù)、心肌缺血面積、血cTnI水平相較I/P組，均呈顯著縮小或降低顯示（P<0.01）。PI-PostC組大鼠相較IPostC組，心肌缺血面積顯著縮?。≒<0.05），但心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)、血cTnI水平、心梗面積無(wú)差異（P>0.05）。見(jiàn)表1。

3討論

多項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，再灌注時(shí)取緩激肽、腺苷等應(yīng)用，可經(jīng)不同機(jī)制，促再灌注損傷改善。本次研究中，相較I/R組，PI-PostC組、IPostC組大鼠cTnI水平、缺血及梗死面積均顯著降低或減小顯示（P<0.01）。表明缺血后處理和采用硝酸酯缺血后處理均可使再灌注損傷減輕，心梗面積縮小。而PI-Postc組相較IPostC組，雖心梗面積無(wú)明顯差異，但缺血面積呈更小顯示，表明在保護(hù)缺血再灌注心肌損傷方面，酸硝酯后處理同IPostC效果相同，同時(shí)可使缺血面積有更大幅度的縮小。本次結(jié)果還顯示，在細(xì)胞凋亡指數(shù)方面，PI-PostC組與IPost組均較I/R組低，表明兩種后處理方式均可使心肌缺血細(xì)胞凋亡程度減輕，促再灌注損傷改善。

綜上，缺血后處理、硝酸酯后處理，均可發(fā)揮保護(hù)心肌缺血再灌注損傷作用，且可使心肌缺血面積明顯縮小，其中IPostC縮小幅度更為顯著。

（通訊作者：黃靚）