miR-586對骨肉瘤的診斷價值研究

魏冀榮

miR-586對骨肉瘤的診斷價值研究

魏冀榮

目的探討miR-586對骨肉瘤的診斷價值，為該指標在診斷骨肉瘤的應用上提供理論依據(jù)。方法選取接受手術(shù)治療的35例骨肉瘤患者作為病例組，同時選取35例健康人群作為對照組。對比兩組受試者的血清miR-586的檢測結(jié)果；對比病例組患者骨肉瘤瘤體組織和周圍正常骨組織的miR-586的檢測結(jié)果；通過Pearson相關(guān)性分析檢驗骨肉瘤瘤體組織中miR-586表達與血清miR-586表達的相關(guān)性；通過ROC曲線分析兩組受試者的血清miR-586檢測結(jié)果，評估血清miR-586對骨肉瘤的診斷價值。結(jié)果病例組miR-586的檢測結(jié)果為(1.43±0.52)，均顯著高于對照組(P<0.05)；骨肉瘤瘤體組織miR-586的檢測結(jié)果為(5.38±0.31)，顯著高于正常骨組織miR-586的檢測結(jié)果(P<0.05)；Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，骨肉瘤瘤體組織中miR-586表達與血清miR-586表達呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.912，P<0.05)；ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-586診斷骨肉瘤的曲線下面積為0.879，0.952為最佳篩查陽性界值，血清miR診斷骨肉瘤的敏感度和特異度均為85%。結(jié)論骨肉瘤患者血清以及瘤體組織的miR-586水平顯著升高，兩者呈正相關(guān)的關(guān)系。血清miR-586水平的檢測對臨床診斷骨肉瘤有一定的參考價值。

miR-586；骨肉瘤；診斷價值

骨肉瘤是較為常見的惡性骨腫瘤，好發(fā)于20歲以下人群，研究調(diào)查顯示，骨肉瘤的發(fā)病率約0.4‰[1]，且本病的惡性程度高，嚴重威脅患者的健康和生命。目前臨床治療主要以腫瘤組織學分級為根據(jù)，制定針對性的治療方案，以新輔助化療聯(lián)合手術(shù)治療為主[2]。近年來，隨著臨床研究的深入，新輔助化療方案的不斷改進，提高了骨肉瘤的臨床治療效果，改善患者的預后。腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移以及化療抵抗是影響臨床療效和患者預后的重要因素[3]，因此，早期的診斷是提高骨肉瘤臨床治療效果的關(guān)鍵。尋找理想的血清學治療作為骨肉瘤的早期診斷和預后判斷的依據(jù)是目前臨床研究的重要方向。目前已經(jīng)有研究指出microRNAs與骨肉瘤的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)[4]。本研究探討miR-586對骨肉瘤患者的診斷價值，為該指標在診斷骨肉瘤的應用上提供理論依據(jù)，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取自2014年1月到2016年12月期間住院接受手術(shù)治療的骨肉瘤患者35例作為病例組，同時選取同期接受體檢的健康人群35例作為對照組。病例組中，男性19例，女性16例，患者年齡20～45歲，平均年齡為(26.42±7.35)歲；對照組中，男性18例，女性17例，受試者年齡20～47歲，平均年齡為(25.24±6.97)歲。兩組受試者的性別、年齡的對比，差異均沒有統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，具有可比性。本研究所有受試者均簽署知情同意書，同意納入本研究，同時本研究通過醫(yī)院倫理委員會的批準。

1.2 納入和排除標準

參照《SEOM clinical guidelines for the treatment of osteosarcoma in adults》[5]中的標準進行診斷。病例組所有患者均根據(jù)其臨床癥狀、體征、影像學檢查結(jié)果及病理學診斷結(jié)果，明確骨肉瘤的臨床診斷。同時排除術(shù)前已經(jīng)接受化療、放療等其他抗腫瘤治療的患者；排除合并消化道腫瘤、白血病等其他可影響miR-586檢測結(jié)果疾病的患者。

1.3 研究方案

病例組患者在術(shù)前新輔助化療前，對照組在體檢時，在清晨空腹狀態(tài)下，采用肝素抗凝管采集外周靜脈血2 ml后，立即送至醫(yī)院檢驗科。將200 μl全血分裝于內(nèi)含研磨珠和Trizol的凍存管中，經(jīng)過充分震蕩后，將檢測標本置于-80 ℃的環(huán)境內(nèi)保存待測。收集患者手術(shù)切除的骨肉瘤瘤體組織標本及其周圍正常骨組織標本，將上述組織標本保存于液氮內(nèi)。根據(jù)RNA提取試劑盒說明書的要求操作，提取總RNA?？俁NA的濃度和純度采用紫外線分光光度計進行測定，總RNA的完整性采用電泳進行檢測并將其保存在-80 ℃的環(huán)境中。根據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書的要求進行操作，配制逆轉(zhuǎn)錄反應體系。由1 μL的總RNA，4 μL的反轉(zhuǎn)錄緩沖液(5×)，1 μL的反轉(zhuǎn)錄酶，以及14 μL的Rnase Free水共同組成20 μL的逆轉(zhuǎn)錄反應體系。在37 ℃ 1 h，95 ℃ 5 min的反應條件下，將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。實時熒光定量聚合酶鏈式反應采用miScript SYBR Green PCR kit進行檢測，根據(jù)其說明書的要求進行操作，配制反應體系。以95 ℃ 5 min預變性，變性和延伸95 ℃ 10 s，60 ℃ 20 s，72 ℃ 20 s，共40個循環(huán)，熒光收集78 ℃ 20 s作為反應條件。內(nèi)參采用管家基因U6，miR-586相對表達量的計算根據(jù)相對定量法計算得出。以5’-CGCGGATCCGTA-AGAAGAAATCTGAATGCTTTTGT-3’作為miR-586的引物。

1.4 觀察指標

對比兩組受試者的血清miR-586的檢測結(jié)果；對比病例組患者骨肉瘤瘤體組織和周圍正常骨組織的miR-586的檢測結(jié)果；通過Pearson相關(guān)性分析檢驗骨肉瘤瘤體組織的miR-586表達與血清miR-586表達的相關(guān)性；通過ROC曲線分析兩組受試者的血清miR-586檢測結(jié)果，評估血清miR-586診斷骨肉瘤的價值。

1.5 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者血清miR-586檢測結(jié)果對比

病例組miR-586的檢測結(jié)果為(1.43±0.52)，均顯著高于對照組(P<0.05)，見表1。

表1 兩組受試者血清miR-586檢測結(jié)果的對比

注：與對照組對比，a為P<0.05。

2.2 病例組骨肉瘤瘤體組織和周圍正常骨組織miR-586檢測結(jié)果的對比

骨肉瘤瘤體組織miR-586的檢測結(jié)果為(5.38±0.31)，顯著高于正常骨組織miR-586的檢測結(jié)果(P<0.05)。見表2。

表2 病例組骨肉瘤瘤體組織和周圍正常骨組織miR-586檢測結(jié)果的對比

注：與正常骨組織對比，a為P<0.05。

2.3 miR-586在骨肉瘤瘤體組織和血清中表達的Pearson相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，骨肉瘤瘤體組織miR-586表達與血清miR-586表達呈正相關(guān)關(guān)系(γ=0.912，P<0.05)。見圖1。

圖1 miR-586在骨肉瘤瘤體組織和血清中表達的Pearson相關(guān)性分析

2.4 血清miR-586對骨肉瘤的診斷價值分析

ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清miR-586診斷骨肉瘤的曲線下面積為0.879(95%可信區(qū)間分別為0.769，0.985，P均<0.05)。在0.952的最佳篩查陽性界值(cut-off值)時，血清miR診斷骨肉瘤的敏感度和特異度均為85%。見圖2。

圖2 血清miR-586診斷骨肉瘤的ROC曲線分析

3 討論

骨肉瘤是較為常見的惡性骨腫瘤，青少年及兒童是本病的高發(fā)人群。骨肉瘤的惡性程度較高，可在較短時間內(nèi)發(fā)生肺轉(zhuǎn)移等遠處轉(zhuǎn)移，臨床的治療難度大，患者的預后較差[6]。早期的診斷和治療是提高本病臨床療效，改善患者預后的關(guān)鍵。骨肉瘤的發(fā)病機制目前尚不明確，可能與遺傳因素、病毒感染、放射性損傷、慢性炎癥刺激等有關(guān)[7]。骨肉瘤的臨床診斷目前主要依據(jù)為患者的臨床診斷、影像學資料以及病理檢查結(jié)果[8]。尋找可靠的血清學指標可為臨床早期診斷骨肉瘤提供診斷依據(jù)。

近年來，臨床上miR-586的相關(guān)研究主要關(guān)注其在肝癌、白血病等消化系統(tǒng)級血液系統(tǒng)疾病的應用價值上。羅耀玲等[9]的研究顯示，miR-586可能通過Bcl-2通路對肝癌HepG2細胞的增殖和凋亡發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。Wang等[10]的研究顯示，異基因造血肝細胞移植后miR-586可能可成為急性移植物對抗宿主疾病的預測因子，并據(jù)此提出可將miR-586作為治療靶點。目前，關(guān)于miR-586與骨肉瘤關(guān)系的研究較少，有研究通過體外細胞實驗，證實骨肉瘤細胞的分化、侵襲、凋亡等均與miR-586有關(guān)，miR-586表達的下調(diào)有助于抑制骨肉瘤細胞的分化和侵襲，并可加速其凋亡[11]。在本研究中，病例組患者骨肉瘤瘤體組織的miR-586的檢測結(jié)果顯著高于周圍正常骨組織的miR-586檢測結(jié)果，這與魏任雄等[12]的研究結(jié)果基本一致。

在本研究中，病例組患者的血清miR-586檢測結(jié)果顯著高于對照組受試者的血清miR-586檢測結(jié)果。這說明血清miR-586水平的上升對骨肉瘤的診斷有一定的提示意義。同時，血清miR-586的水平和骨肉瘤瘤體組織miR-586水平呈正相關(guān)關(guān)系，這說明血清miR-586的水平顯著升高可提示miR-586在骨肉瘤瘤體組織內(nèi)的高表達狀態(tài)。根據(jù)目前的文獻研究資料，結(jié)合本次研究的結(jié)果，miR-586參與了骨肉瘤的發(fā)病以及腫瘤病情的進展，miR-586可能是作為信號分子促進骨肉瘤細胞的增殖。ROC曲線分析結(jié)果顯示，miR-586診斷骨肉瘤的最佳篩查陽性界值為0.952，其診斷敏感度和特異度均為85%，具有良好的診斷價值。因此，這可說明miR-586對骨肉瘤的診斷上有一定的應用價值，有助于早期發(fā)現(xiàn)骨肉瘤，可作為骨肉瘤診斷的一項血清學指標。下來的進一步研究可通過動態(tài)檢測患者治療過程中的miR-586水平的變化，揭示miR-586與骨肉瘤病情變化的相關(guān)性。

綜上，骨肉瘤患者血清以及瘤體組織的miR-586水平顯著升高，兩者呈正相關(guān)的關(guān)系。血清miR-586水平的檢測對臨床診斷骨肉瘤有一定的參考價值。

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DiagnosticValueofmiR-586inOsteosarcoma

WEIJirong.

GuangzhouMilitaryRegionGeneralHospital,Guangzhou,510100

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of miR-586 in osteosarcoma,and to provide a theoretical basis for the diagnosis of osteosarcoma.Methods35 patients with osteosarcoma were selected as the study group.35 healthy patients were selected as the control group.The miR-586 test results were compared between the 2 groups.The miR-586 test results were compared between the osteosarcoma tumor tissues and the surrounding normal bone tissues in the study group.The Pearson correlation analysis was used to examine the correlation between miR -586 expression and serum miR-586.The serum miR-586 test was analyzed by ROC curve to evaluate the value of serum miR-586 in the diagnosis of osteosarcoma.ResultsThe results of miR-586 in patients group were (1.43±0.52),which were significantly higher than those of the control group (P<0.05).The results of miR-586 in the osteosarcoma tumor tissue were (5.38±0.31),which was significantly higher than that of the normal bone tissue miR-586 (P<0.05).Pearson correlation analysis showed that the expression of miR-586 in osteosarcoma tumor tissue was positively correlated with the expression of serum miR-586 (γ= 0.912,P<0.05).ROC curve analysis showed that the area under the curve of serum miR-586 diagnosed osteosarcoma was 0.879,0.952 was the best screening positive margin.Sensitivity and specificity of serum miR diagnosis for osteosarcoma both were 85%.ConclusionThe serum and tumor tissue miR-586 levels in patients with osteosarcoma are significantly higher than those of the control group.Detection of serum miR-586 level has a certain reference value for clinical diagnosis of osteosarcoma.

miR-586;Osteosarcoma;Diagnostic value

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:1756～1758)

510100 廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.11.005

R738.1

A

1001-5930(2017)11-1756-03

2017-04-13

2017-08-02)

(編輯：吳小紅)