回族和漢族男性冠心病患者血脂Hcy水平及E-選擇素基因型分布比較

王麗萍， 孫常銘, 于海明, 朱金伶, 李欣欣, 王鵬飛, 華正祥

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德 067000 2.河北省平泉市醫(yī)院， 河北 平泉 067500 3.河北省灤平縣醫(yī)院， 河北 灤平 0682504.河北省寬城滿族自治縣醫(yī)院， 河北 寬城 067605)

回族和漢族男性冠心病患者血脂Hcy水平及E-選擇素基因型分布比較

王麗萍1， 孫常銘1, 于海明2, 朱金伶3, 李欣欣4, 王鵬飛1, 華正祥1

(1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院， 河北 承德0670002.河北省平泉市醫(yī)院， 河北 平泉0675003.河北省灤平縣醫(yī)院， 河北 灤平0682504.河北省寬城滿族自治縣醫(yī)院， 河北 寬城067605)

目的比較回族和漢族男性冠心病患者血脂、Hcy水平及E-選擇素基因型分布的差異。方法選取2015年1月至2017年6月于我院診治的男性冠心病患者共190例，其中回族90例，漢族100例為研究對象，采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性方法(PCR-RFLP)檢測E-選擇素第2外顯因子G98T和第4外顯因子A561C的基因型分布，同時(shí)檢測兩組的血脂及Hcy水平，探討兩民族間的差異。結(jié)果回族、漢族男性冠心病患者年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例高于回族(P<0.05)；漢族男性冠心病患者血清TC、HDL、Glu、Hcy水平明顯高于回族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；漢族AMI組E-selectin水平高于回族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而SAP組和UAP組E-selectin水平兩民族間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；回族AMI組GG與GT、AA與AC基因型分布高于漢族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),兩民族SAP與UAP組間基因型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例及血清TC、HDL、Glu、Hcy水平明顯高于回族患者；E-選擇素第2外顯子G98T、第4外顯子A561C兩個(gè)位點(diǎn)基因型分布在回族、漢族間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回族AMI組GT及AC基因型發(fā)病比例更高。

回 族； 漢 族； 冠心??； E-選擇素； 基因型

冠心病(coronary heart disease，CHD)是嚴(yán)重威脅人類生命健康且發(fā)病率極高的疾病之一，也是目前最為常見的死亡原因[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國城市冠心病發(fā)病率高于農(nóng)村，并且男性發(fā)病率高于女性，這可能與城市與農(nóng)村人群、男性與女性人群的飲食習(xí)慣、生活方式、職業(yè)壓力等密切相關(guān)[2]。有研究表明，冠心病危險(xiǎn)因素在不同民族不同人群存在著明顯差異，而我國是個(gè)多民族國家，各民族間生活環(huán)境、飲食結(jié)構(gòu)及遺傳基因、文化信仰使得不同民族間冠心病發(fā)病規(guī)律及臨床特點(diǎn)也有所不同[3]。2011年美國心臟病相關(guān)數(shù)據(jù)分析顯示，對于男性，任何年齡段心源性死亡都是其主要致死因素，男性冠心病的發(fā)病時(shí)間較女性平均早10年[4]。而本研究對象選取男性，從不同民族出發(fā)，對本地區(qū)回族和漢族男性冠心病患者E-選擇素基因型分布情況進(jìn)行比較，為冠心病研究提供新的依據(jù)。

1 資料與方法

1.1研究對象:本研究中的190例男性冠心病患者，均選自2015年1月至2017年6月于我院心血管內(nèi)科住院患者，其中回族90例，漢族100例，其中急性心肌梗死(AMI)組64例，不穩(wěn)定性心絞痛(UA)組62例，穩(wěn)定性心絞痛(SA)組64例。

1.1.1診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病分會(huì)制定的《冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病診斷標(biāo)準(zhǔn)(2010)》[5]：急性心肌梗死劇烈胸痛持續(xù)時(shí)間>30min以上，心電圖出現(xiàn)明顯的持久的Q波或ST段改變，心肌標(biāo)志物陽性及血清酶學(xué)顯著升高，發(fā)病時(shí)限在24h以內(nèi)；不穩(wěn)定性心絞痛勞累時(shí)發(fā)作次數(shù)增加，時(shí)間延長，胸痛時(shí)間<30min，發(fā)作時(shí)心電圖出現(xiàn)ST段暫時(shí)性壓低>lmm，癥狀緩解后，迅速恢復(fù)或接近正常水平，心肌標(biāo)志物無改變；穩(wěn)定性心絞痛有勞累性心絞痛發(fā)作，其性質(zhì)在2個(gè)月內(nèi)無明顯改變，但運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)呈現(xiàn)陽性。

1.1.2納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者在勞累后出現(xiàn)持續(xù)性1～5min的胸后方疼痛，并放射在左上肢和肩部；②發(fā)病心電圖可見暫時(shí)的T波倒置或ST段下移；③經(jīng)冠狀動(dòng)脈造影可見動(dòng)脈狹窄或阻塞程度>50%；④心肌標(biāo)志物結(jié)果陽性。

1.1.3排除標(biāo)準(zhǔn)：①患者之間有親緣關(guān)系；②糖尿病患者；③患者合并嚴(yán)重腎功能不全；④患有免疫系統(tǒng)疾??；⑤患者近期服用激素類藥物；⑥腫瘤患者；⑦甲狀腺患者。

1.2研究方法

1.2.1心血管病相關(guān)指標(biāo)檢測受試者入院后晨起空腹，用肝素抗凝管采集外周靜脈血5mL，檢測總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、血糖(Glu)及同型半胱氨酸(Hcy)水平。

1.2.2E-選擇素血清學(xué)水平測定:采用雙抗體夾心法對E-selectin水平進(jìn)行檢測，按照ELISA試劑盒(北京信科儀器有限公司)的操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2.3基因組DNA提取:受試者空腹，用EDTA抗凝管采集外周靜脈血5mL，用鹽析法提取基因組DNA，置于-20℃冰箱凍存。

1.2.4PCR引物設(shè)計(jì)與合成:用Primer5運(yùn)行設(shè)計(jì)引物，由大連寶生物公司合成。

引物序列如下：用于擴(kuò)增E-selectin第2外顯子G98T的引物：

上游引物5'-TGCCCAAAATCTTAGGATAC-3'；下游引物5'-AAGCCCAGGGAAGAACACAT-3'，

用于擴(kuò)增E-selectin第4外顯子A561C的引物：

上游引物5'-AGTAATAGTCCTCCTCATCATG-3'；下游引物5'-ACCATCTCAAGTGAAGAAAGAG-3'。

1.2.5PCR擴(kuò)增:PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為25ul，其中正、反向引物各2μl，10×PCRbuffer 2ul，基因組DNA 3μl，dNTPs 2μl，Mgcl21μl，TaqDNA聚合酶 0.5μl，雙蒸水12.5μl。置熱循環(huán)儀上：預(yù)變性：95℃ 5min；變性：95℃ 30s；復(fù)性：58℃ 1min；延伸：72℃ 1min。共30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min冷卻到4℃。

1.2.6限制性酶切:取PCR擴(kuò)增15ul，G98T基因擴(kuò)增產(chǎn)物用HphⅠ限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切，A561C基因擴(kuò)增產(chǎn)物用Pstl限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切。37℃孵育3.0h反應(yīng)終止，用3%瓊脂糖凝膠電泳、染色，成像后系統(tǒng)判斷結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1回族、漢族男性冠心病患者基礎(chǔ)資料回族、漢族男性冠心病患者年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，漢族冠心病患者家族史、高血壓病史、吸煙/飲酒史比例顯著高于回族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 回族、漢族男性冠心病患者基礎(chǔ)資料比較

2.2回族、漢族男性冠心病患者血脂及Hcy水平比較漢族男性冠心病患者血脂TC、HDL、Glu、Hcy高于回族患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 回族、漢族男性冠心病患者血脂及Hcy水平比較(mmoL/L)

2.3不同冠心病亞組患者回族、漢族E-selectin水平比較:漢族AMI組E-selectin水平高于回族，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而SAP組和UAP組兩民族間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同冠心病亞組回族、漢族患者E-selectin水平比較(mmoL/L)

2.4回族、漢族男性冠心病患者E-選擇素第2、4外顯子基因型分布的比較:E-選擇素第2外顯子G98T、第4外顯子A561C兩個(gè)位點(diǎn)的基因型分布在回族、漢族男性冠心病患者間的比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表4。

表4 回族、漢族男性冠心病患者基因型的分布n(%)

2.5回族、漢族男性不同冠心病組E-選擇素第2、4外顯子基因型分布的比較:對回族、漢族的不同類型的冠心病患者各位點(diǎn)基因型分布進(jìn)行了進(jìn)一步比較分析：漢族AMI組與UAP、SAP組間GG與GT、AA與AC基因型的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),回族AMI組GT基因型及AC基因型發(fā)病比例更高,兩民族SAP與UAP組分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表5、表6。

表5 回族、漢族冠心病患者G98T位點(diǎn)基因型分布的比較n(%)

表6 回族、漢族冠心病患者A561C位點(diǎn)基因型分布的比較n(%)

3 討 論

冠狀動(dòng)脈因管腔狹窄、阻塞或其功能異常變化，導(dǎo)致心肌細(xì)胞缺血、缺氧甚至壞死而引起的心臟病被統(tǒng)稱為冠狀動(dòng)脈性心臟病(Coronary heart disease，CHD)[6]。據(jù)衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)，我國心血管疾病的患病率和病死率逐年增高，不同民族，冠心病的發(fā)病率及病死率也存在差異[7]。黑種人與白種人相比，冠心病發(fā)病率、病死率均居于高水平，其發(fā)展為心腦血管卒中的危險(xiǎn)率是白種人的2～4倍[8]。在加拿大，土著血統(tǒng)的加拿大人較歐洲血統(tǒng)的加拿大人心血管患病率高2.5倍。美國多種族動(dòng)脈粥樣硬化研究發(fā)現(xiàn)白種人、黑種人、西班牙裔和華裔美國人中動(dòng)脈鈣化率為44%、36%、35%和42%，該數(shù)據(jù)體現(xiàn)了不同種族冠脈硬化率的差異[9]?；?、漢民族男性冠心病人群因種族及風(fēng)俗習(xí)慣不同，其發(fā)病特點(diǎn)、危險(xiǎn)因素、遺傳基因等方面都有一定的差異性。有研究表明男性冠心病的患病率高于女性，說明這與男性好吸煙、酗酒、高膽固醇飲食，不愛運(yùn)動(dòng)等習(xí)慣有關(guān)。

E-選擇素(E-selectin)是選擇素家族中的一員，是近幾年來發(fā)現(xiàn)的一種炎癥細(xì)胞因子，炎性因子反應(yīng)既可促進(jìn)冠心病的發(fā)生，也可以用于識別不穩(wěn)定斑塊的變化。在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過程中，需要許多細(xì)胞因子參與，表現(xiàn)為大動(dòng)脈、中動(dòng)脈壁出現(xiàn)一個(gè)或多個(gè)特征性斑塊，在鏡下可見斑塊中含有大量基質(zhì)和病理性泡沫細(xì)胞。E-selectin可以參與多種白細(xì)胞的黏附和聚集，同時(shí)還參與脂類代謝，影響膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的水平。它在動(dòng)脈粥樣硬化及血栓形成、腦卒中等病理過程中起著重要的作用。

流行病學(xué)調(diào)查顯示：血脂異常、高血壓、吸煙、基因突變等許多因素與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展呈現(xiàn)相關(guān)性，這些因素被視為動(dòng)脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因子。國外學(xué)者Gupta A[10]、Iversen B等[11]分別研究了可溶性E-selectin血清學(xué)水平與血脂代謝的相關(guān)性，認(rèn)為LDL-C誘導(dǎo)、刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)E-selectin，與E-selectin血清學(xué)水平顯著相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)回族、漢族人群基本資料有所不同，這是由于回族和漢族之間宗教信仰、飲食習(xí)慣、遺傳基因不同，所以導(dǎo)致冠心病的危險(xiǎn)因素也不同。眾多因素中，吸煙作為冠心病的高危因素，增加了冠心病的發(fā)病率和死亡率，漢族人群吸煙比例高于回族。長期吸煙患者血液中的C反應(yīng)蛋白、白介素6等炎性因子水平增高，這是加速動(dòng)脈粥樣硬化的原因之一。另外回族人群飲食習(xí)慣與漢族人群大不相同，漢族人群以食豬肉為主增加了患高血脂的風(fēng)險(xiǎn)，而回族人群以牛羊肉高蛋白飲食為主，但是回族人群喜糖茶，所以血糖水平高于漢族人群，高血糖狀態(tài)刺激冠狀動(dòng)脈平滑肌過度增生，促進(jìn)炎性反應(yīng)，加速冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展。

許多研究已證明，冠心病患者體內(nèi)都會(huì)有多種臨床指標(biāo)改變，包括：尿酸、同型半胱氨酸(Hcy)、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、纖維蛋白原(Fib)、D-二聚體(D-D)等，這些指標(biāo)的變化影響著冠心病的發(fā)生發(fā)展，也成為近幾年來的研究熱點(diǎn)。Hcy可通過自身氧化產(chǎn)生大量自由基、從而介導(dǎo)血管內(nèi)皮破壞，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的形成和管腔狹窄變形，而纖維蛋白原水平升高可加速機(jī)體高凝狀態(tài)，引發(fā)血栓形成。Park[12]等研究了6371例參與者，測定的指標(biāo)包括CRP、Fib、D-D、Hcy、白細(xì)胞、血小板，并對其進(jìn)行了為期十年的隨訪，結(jié)果表明炎癥反應(yīng)程度和以上指標(biāo)變化密切相關(guān)，同時(shí)增加了疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，這與我們的研究結(jié)果一致。

冠心病患者外周血中血清E-se1ectin的水平升高,其升高水平與冠狀動(dòng)脈病變程度密切相關(guān)。曲凌光[13]等學(xué)者研究多民族間冠心病患者E-se1ectin水平發(fā)現(xiàn)升高程度可作為胸痛患者可疑冠心病的早期輔助鑒別手段。國外學(xué)者Blann[14]等研究發(fā)現(xiàn)局部缺血性心臟病發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化時(shí)可溶性E-se1ectin水平增高是其標(biāo)志之一,兩者的研究指向一致。本研究結(jié)果顯示：漢族AMI組血清E-selectin水平顯著高于回族，而SAP組和UAP組兩民族間無差異，這說明盡管AMI和UA的病情嚴(yán)重程度不同,但兩者冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的激活程度是相當(dāng)?shù)摹鴥?nèi)學(xué)者裴曉黎[15]在研究喀什地區(qū)民族冠心病血脂時(shí)發(fā)現(xiàn)名族間血脂水平存在差異，羅仁[16]研究了多民族間不同年齡不同性別冠狀動(dòng)脈粥樣硬化程度發(fā)現(xiàn)男性發(fā)病率高，且少數(shù)民族發(fā)病率更早,這與我們的研究與相似之處。

CHD患者E-selectin水平的升高標(biāo)志著缺血心肌發(fā)生了急性炎癥反應(yīng)，E-selectin水平對于評價(jià)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性是一個(gè)較好的指標(biāo)。不同人群的E-selectin基因型分布呈現(xiàn)不同的生物學(xué)效應(yīng)，也會(huì)影響著該人群不同個(gè)體對相關(guān)疾病的易感性。為了進(jìn)一步研究E-selectin基因型與回族、漢族CHD嚴(yán)重程度的差異，我們對CHD組進(jìn)行了分組研究，結(jié)果顯示：漢族冠心病患者AMI組與UAP、SAP組間GG與GT、AA與AC基因型的分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，兩民族間SAP與UAP組分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這說明回族男性冠心病患者AMI組的遺傳易感性更強(qiáng)，可做為臨床診斷的參考，同時(shí)也表明冠心病的嚴(yán)重程度與E-selectin基因型的分布密切相關(guān)，在不同民族不同人群遺傳基因不同。總之，漢族冠心病患者較回族發(fā)生冠心病的危險(xiǎn)因素較多，但是回族冠心病患者病變程度更重，這與我國其他民族與漢族冠心病危險(xiǎn)因素的比較報(bào)道基本一致。由于本研究樣本比較局限，可進(jìn)一步擴(kuò)大樣本進(jìn)行多民族的比較研究，為我國冠心病的發(fā)病特點(diǎn)尋找更充足的依據(jù)。

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ComparisonofBloodLipid,HcylevelsandE-selectinGenotypeDistributioninmalepatientswithCoronaryHeartDisease

WANGLiping,SUNChangming,YUHaiming,etal

(TheAffiliatedHospitalofChengdeMedicalUniversity,HebeiChengde067000,China)

Objective: To compare the blood lipid and Hcy levels and E-selectin genotype distribution in male patients with coronary heart disease.MethodsA total of 190 patients with coronary heart disease were selected from our hospital from Jan. 2015 to Jun. 2017, including Hui 90cases, 100 cases of Han nationality as the research object, using restriction fragment length polymorphism analysis of polymerase chain reaction (PCR-RFLP) gene polymorphism detection of E selectin in the second exon of G89T and the fourth exon of A561C, and serological detection levels in the two groups,to explore the differences between the two peoples.ResultsThere was no significant difference between Hui and Han population in age, while the Han family history, hypertension, smoking/drinking history was significantly higher than the proportion of Hui population (P<0.05);Group of coronary heart disease in Han population of HDL, Glu, serum TC, Hcy levels were significantly higher than that of Hui population, the difference was statistically significant (P<0.05);Han AMI group serum E-selectin level was significantly higher than that of the Hui, the difference was statistically significant (P<0.05),SAP group and UAP group had no significant difference between the two ethnic groups (P>0.05);Group GG and GT, the distribution of AMI AA and AC genotype was significantly higher than that of Han and Hui, there was a significant difference (P<0.05),the national SAP and UAP distribution between groups were not significantly different (P>0.05).ConclusionsHan nationality patients with coronary heart disease in the family history, history of hypertension, smoking/drinking history and the ratio of serum TC, HDL, Glu, Hcy levels Was higher than that of Hui population; E-selectin Exon 2 G98T and Exon 4 A561C two gene polymorphism in Hui and Han nationality coronary heart disease have significant difference, Hui AMI group GT and AC genotype were higher incidence.

Hui nationality; Han nationality; Coronary heart disease; E-selectin; Genotype

1006-6233(2017)12-2000-06

承德市科技計(jì)劃項(xiàng)目，(編號201701A048)

華正祥

A

10.3969/j.issn.1006-6233.2017.12.019