海口市泌尿生殖道感染患者生殖支原體的檢測

肖敬川 王順蘭 曹 卉

·論著·

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肖敬川 王順蘭 曹 卉

目的檢測?？诘貐^(qū)泌尿生殖道感染患者生殖支原體(Mg)的感染率并分析危險(xiǎn)因素。方法實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)檢測618例(男255例,女363例)泌尿生殖道感染患者分泌物棉拭子(178份)和尿液標(biāo)本(440份)。結(jié)果618例患者M(jìn)g總陽性率為3.23%，尿液和拭子標(biāo)本陽性率分別為3.64%和2.25%，無顯著性差異(P>0.05)；男性患者陽性率為2.35%，女性為3.86%，無顯著性差異(P>0.05)；不同年齡組之間陽性率也沒有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論尿液和拭子標(biāo)本的選擇、性別和年齡不是Mg陽性率的關(guān)鍵影響因素。

生殖支原體； 實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

生殖支原體(Mycoplasmagenitalium, Mg)由Tully等于1981年從男性非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分離出來，迄今為止發(fā)現(xiàn)的能夠自我復(fù)制的最小原核細(xì)胞型微生物[1]。Mg分類學(xué)上屬于柔膜綱支原體目，主要特點(diǎn)是缺乏細(xì)胞壁，能獨(dú)立復(fù)制，寄生于人和其他靈長類動(dòng)物的泌尿生殖道、呼吸道和關(guān)節(jié)腔滑液中[2]。研究表明，生殖支原體是男性非淋菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis, NGU)的病原體之一，在男性NGU患者中的感染率可達(dá)21.9%～45%[3]。在女性中，Mg可能是黏液膿性宮頸炎(Mucopurulent cervicitis, MPC)的重要病原體，在盆腔炎和輸卵管性不孕患者中的感染率達(dá)13%～17%[4]?？梢?，Mg是繼淋球菌和沙眼衣原體之后引起泌尿生殖道感染的重要病原體，為了研究門診患者M(jìn)g的感染情況，進(jìn)一步提高對Mg的認(rèn)識(shí)和重視，我們對就診于海口市人民醫(yī)院婦科和泌尿外科門診的泌尿生殖道感染的患者進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(simultaneous amplification and testing, SAT)檢測。

目前對于Mg的檢測主要有分離培養(yǎng)法，血清學(xué)方法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法等，分離培養(yǎng)法耗時(shí)長，陽性率低，血清學(xué)方法有交叉反應(yīng)，特異性差，此兩者缺點(diǎn)明顯，已趨于淘汰。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法快速、敏感性和特異性好，臨床應(yīng)用廣泛[5]。SAT技術(shù)是將核酸恒溫?cái)U(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光檢測結(jié)合的核酸檢測技術(shù)，該技術(shù)具有敏感性、特異性高和反應(yīng)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)[6]，在生殖道、呼吸道病原體及腸道病毒檢測的應(yīng)用非常廣泛。

1 資料與方法

1.1 研究對象 海口市人民醫(yī)院2015年8月至2016年5月婦科門診和泌尿外科門診泌尿生殖道感染患者618例，其中男255例，女363例，年齡15～84歲，平均(36.07±11.09)歲。所有患者均表現(xiàn)出一種或多種泌尿道感染癥狀，如尿頻、尿急、尿道刺痛、分泌物增多、排尿困難、灼熱感等。

1.2 儀器與試劑 瑞士Roche公司LightCycler 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，Mg-RNA試劑(批號(hào)：20150301,20150718,20151001,20160301)來自上海仁度生物科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集 尿液樣本：取清晨首次尿或者長時(shí)間(至少1個(gè)小時(shí))不排尿的首段尿500 μL，與500 μL尿液保存液(仁度試劑盒提供)混合。拭子標(biāo)本：采用醫(yī)用棉拭子伸入男性尿道口、女性宮頸口或陰道約1～2 cm，旋轉(zhuǎn)1周，停留10 s后取出，將棉拭子頭放入1 mL生理鹽水浸泡貼壁擠干，取500 μL加入500 μL尿液保存液混合，即刻送檢，即為待測樣本。

1.3.2 樣本檢測 按照試劑盒說明，設(shè)置陰性、陽性和內(nèi)標(biāo)對照，在仁度生物MgX全自動(dòng)核酸提取儀上完成核酸提取步驟，獲得30 μL核酸提取液，然后60℃ 10 min，42℃ 5 min后加入10 μL 42℃預(yù)熱的SAT酶液配制成40 μL PCR反應(yīng)體系，在LightCycler 480II實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀設(shè)定程序反應(yīng)條件：42℃ 1 min，40個(gè)循環(huán)，熒光素通道設(shè)定為F1(FAM)和F2(HEX)，熒光信號(hào)采集每分鐘進(jìn)行一次，啟動(dòng)反應(yīng)程序。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。陽性率的比較分別采用四格表資料和行×列表資料的χ2檢驗(yàn)，曲線擬合采用雙變量回歸分析，模型依次選擇直線、對數(shù)和指數(shù)選項(xiàng)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同類型標(biāo)本Mg陽性率的對比分析 在618例患者采集標(biāo)本中，尿液標(biāo)本440例，占總數(shù)比例近2/3，分泌物拭子標(biāo)本178例，占總數(shù)比例近1/3，卡方檢驗(yàn)的結(jié)果是與尿液標(biāo)本相比，分泌物拭子標(biāo)本陽性率沒有顯著性差異(χ2=0.781，P=0.271)。見表1。

表1 Mg在不同類型標(biāo)本之間的陽性率 例(%)

2.2 不同性別之間Mg的感染情況 618例泌尿生殖道感染患者中，總體陽性率為3.23%，其中，255例男性患者中Mg陽性6例，陽性率為2.35%，363例女性患者中Mg陽性14例，陽性率為3.86%，卡方檢驗(yàn)的結(jié)果是與男性組相比，女性組陽性率沒有顯著高于男性組(χ2=1.082，P=0.211)。見表2。

2.3 不同年齡組Mg陽性率的情況 618例泌尿生殖道感染患者中，≤20歲組陽性率最高，為10.34%，其次為21～30歲組，為4.18%，≥51歲組最低，為0。各年齡組患者M(jìn)g具體陽性率情況見表3。對各年齡組Mg的陽性率卡方檢驗(yàn)的結(jié)果是不同年齡組間沒有顯著性差異(χ2= 8.218,P=0.084)。

表2 Mg在不同性別之間的陽性率 例(%)

表3 Mg在不同年齡組之間的陽性情況 例(%)

2.4 不同年齡段Mg陽性率曲線擬合 我們?nèi)〔煌挲g段內(nèi)的年齡平均值，與各年齡段內(nèi)的Mg陽性率做了三種曲線擬合，分別是直線，對數(shù)和指數(shù)，三者擬合數(shù)據(jù)見表4。

表4 三種曲線擬合的數(shù)據(jù)

從表4中看出，對數(shù)擬合的決定系數(shù)R2最大，標(biāo)準(zhǔn)誤差中等，再結(jié)合圖1中曲線與已觀測點(diǎn)分布情況考慮，認(rèn)定對數(shù)模型的擬合效果最好，擬合方程為Y=29.55-7.45ln(X)，其中Y代表陽性率，X代表年齡。

圖1 陽性率與年齡的曲線擬合圖

3 討論

檢驗(yàn)前的標(biāo)本采集類型是影響檢測結(jié)果的重要因素，本實(shí)驗(yàn)中選取了尿液和分泌物拭子兩種不同的類型的標(biāo)本，從統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的結(jié)果看，兩種類型的采集方式檢測結(jié)果的陽性率沒有顯著性差異，可認(rèn)為這兩種采集方式都可以應(yīng)用于門診Mg的標(biāo)本取樣進(jìn)行SAT方法檢測，以便臨床醫(yī)生靈活選擇，滿足不同患者的要求。

本實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用SAT技術(shù)檢測Mg的總體陽性率為3.23%，低于曾成龍等報(bào)道的7.23%[2]和路麒等報(bào)道的9.9%[7]。不同研究人員對于Mg檢測結(jié)果的報(bào)道存在一定的差異，陽性率不一致的原因之一可能是主要與選取的患者對象差異有關(guān)，曾成龍和路麒選擇的患者均來自皮膚性病門診，我們選取的對象為泌尿外科和婦科門診患者，且不同的實(shí)驗(yàn)室室間準(zhǔn)確度水平并不完全一致，從而導(dǎo)致檢測報(bào)道的Mg陽性率的不同。另外可能是由于地域氣候的差異，導(dǎo)致不同地區(qū)的人對生殖支原體易感性的差異。

由于女性生殖道的解剖構(gòu)造、生理、性活動(dòng)、分娩和衛(wèi)生習(xí)慣等因素，比男性更容易發(fā)生泌尿生殖道感染[8]，所以目前解脲脲原體(Ureaplasma urealyticum,UU)和沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,CT)常見泌尿生殖道感染患者中，女性的陽性率顯著高于男性[8,9]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，女性感染Mg陽性率均值雖然高于男性，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著性差異，提示Mg在不同性別之間的發(fā)病特點(diǎn)可能與常見泌尿生殖道感染的UU、CT不同。已有研究發(fā)現(xiàn)，生殖支原體存在一個(gè)含大量脯氨酸的特殊頂端結(jié)構(gòu)，通過此特殊的頂端結(jié)構(gòu)黏附于上皮細(xì)胞表面[10]，可能此頂端結(jié)構(gòu)的存在導(dǎo)致了Mg在泌尿生殖道上皮細(xì)胞的定植與UU、CT的不同，這可以作為進(jìn)一步研究Mg致病機(jī)制的切入點(diǎn)之一。

從不同年齡組泌尿生殖道感染患者M(jìn)g陽性率可以看出，隨著年齡增加，陽性率整體呈現(xiàn)下降的趨勢，很大程度上是成年以后隨著年齡增加，人群的性活躍程度也是呈下降趨勢，而泌尿生殖道感染類疾病的傳播又與性活躍程度密切相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，各年齡組之間Mg陽性率沒有顯著性差異，欒瑞玲曾報(bào)道UU和人型支原體(MH)各年齡組之間也沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[11]?？梢?，Mg與UU和MH在流行病學(xué)上年齡這一因素影響的相似性，年齡是影響Mg陽性率的因素，但可能不是決定性的因素。

本實(shí)驗(yàn)中各年齡組之間Mg陽性率沒有顯著性差異，但在Zheng等一項(xiàng)流行病學(xué)研究[12]中指出年輕化與Mg的感染顯著性相關(guān)聯(lián)，為了探討Mg陽性率與年齡的關(guān)聯(lián)度，用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行了兩者的曲線擬合，通過對擬合的各方面因素綜合考慮，選定了對數(shù)擬合，其P<0.05表明擬合的曲線方程有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過對數(shù)方程可以相對準(zhǔn)確的推算某一年齡的Mg陽性率，對于Mg的臨床檢驗(yàn)和預(yù)防工作具有一定的參考意義。

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DetectionofMycoplasmagenitaliuminthepatientswithurogenitaltractinfectioninHaikoucity

XIAOJingchuan,WANGShunlan,CAOHui.

TheCentalLaboratoryofHaikouPeople'sHospital,Haikou570208,China

CAOHui,E-mail: 13876002987@163.com

Objective: To detectMycoplasmagenitalium(Mg) in the patients with urogenital tract infection in Haikou city.MethodsFour hundred and forty secretion swabs and 178 urine specimens from 618 patients (255 males and 363 females) with urogenital tract infection were detected by simultaneous amplification and testing (SAT).ResultsMg total positivity rate was 3.23% in 618 patients. Mg positivity rates of urine and secretion swabs were 3.64% and 2.25%, with no significant difference (P>0.05). Mg positivity rates in males and females were 2.35% and 3.86%, with no significant difference (P>0.05). There was no significant difference of Mg positivity rate between different age groups (P>0.05).ConclusionSecretion swabs and urine specimen , gender and age may be not the key factors of Mg positivity rate.

Mycoplasmagenitalium; simultaneous amplification and testing

?？谑腥嗣襻t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，海南?？?，570208

曹卉，E-mail: 13876002987@163.com

(收稿：2017-07-05 修回：2017-08-21)