基于紋黨參鮮藥材的產(chǎn)地加工炮制一體化技術研究

強思思，高霞，馬玉玲，鄭曉萍，胡芳弟，，李應東

1.蘭州大學藥學院，甘肅 蘭州 730000；2.北京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.甘肅中醫(yī)藥大學，甘肅 蘭州 730000

論著·中藥研究與開發(fā)

基于紋黨參鮮藥材的產(chǎn)地加工炮制一體化技術研究

強思思1，2，高霞1，馬玉玲1，鄭曉萍1，胡芳弟1，3，李應東3

1.蘭州大學藥學院，甘肅 蘭州 730000；2.北京中醫(yī)藥大學第三附屬醫(yī)院，北京 100029；3.甘肅中醫(yī)藥大學，甘肅 蘭州 730000

目的 研究不同干燥過程對紋黨參飲片有效成分的影響，確定最佳的基于紋黨參鮮藥材的產(chǎn)地初加工與炮制一體化工藝。方法 對采收期的紋黨參鮮藥材分別采用3種加工炮制方法：①烘箱80 ℃烘至含水量為藥材原始含水量不同百分比（30%～100%）時，分別取出切片，50 ℃烘干，制得8個飲片樣品（XⅠYP1～8）。②鮮紋黨參直接在不同溫度（50～120 ℃）分別烘至含水量為藥材原始含水量的50%時，取出切片，50 ℃烘干，制得8個飲片樣品（XⅡYP1～8）。③紋黨參干藥材，悶潤，切片，自然晾干，制得傳統(tǒng)飲片。采用HPLC測定各樣品中黨參炔苷和蒼術內(nèi)酯Ⅲ，苯酚-硫酸法和比色法分別測定多糖及總黃酮含量，并同時測定醇浸出物、水浸出物含量。結果 飲片XⅠYP3的醇浸出物（55.36%）、水浸出物（54.91%）和蒼術內(nèi)酯Ⅲ（10.95 μg/g）含量均高于其他飲片。結論 優(yōu)選的工藝為：80 ℃烘至含水量50%，切片，干燥。獲得的一體化加工工藝較傳統(tǒng)方法省時、省力。制得的飲片活性成分含量高。

鮮紋黨參；產(chǎn)地加工；炮制；一體化

中藥飲片的質(zhì)量優(yōu)劣直接影響著中藥材資源的科學應用及臨床用藥的安全性和有效性。當前中藥飲片生產(chǎn)企業(yè)開始提倡飲片生產(chǎn)的規(guī)范化，以減少飲片污染，從而全面提升飲片質(zhì)量，減少對藥材資源的浪費，推動中藥飲片向品牌化、標準化、產(chǎn)業(yè)化方向發(fā)展[1]。中藥產(chǎn)地加工炮制一體化是將藥材產(chǎn)地初加工與炮制結合在一起的加工技術，可縮短加工時間、能耗，減少內(nèi)在成分的流失，并能加快飲片上市時間，具有良好的產(chǎn)業(yè)化前景[2]。

紋黨參（素花黨參）Codonopsis pilosula Nannf. var.modesta（Nannf.）L.T.Shen主產(chǎn)于甘肅文縣，根條粗實，具獅子盤頭、皮松肉甜等特點，斷面有細橫紋，通身有“螺紋”[3-4]。紋黨參產(chǎn)地初加工程序如下：藥材原料→淘洗→上串→晾曬→揉搓→發(fā)汗→揉搓→清洗→整形（修枝）→晾曬至干燥成品[5]。飲片的制備過程需要二次悶潤[6]。整個產(chǎn)地初加工＋炮制過程費時、耗力[7]，且天氣等情況對飲片品質(zhì)的影響也比較大[8]，揉搓過程中稍有不慎，可能出現(xiàn)出油現(xiàn)象（油條）[9]。研究一種簡單可行的基于紋黨參鮮藥材產(chǎn)地加工一體化的飲片加工技術，是提高和改善黨參飲片品質(zhì)迫切需要解決的問題。

黨參多糖、黨參總黃酮、水浸出物、醇浸出物具有顯著的生理活性?，F(xiàn)代藥理學研究表明，黨參水提或醇提液具有降壓作用，黨參水浸液對化學藥品誘導的小鼠學習記憶障礙有明顯改善作用[10]，并具有減輕應激性潰瘍大鼠胃黏膜潰瘍指數(shù)[11]和增加血漿中皮質(zhì)酮含量以及抗高溫作用[12]。黨參多糖具有抗氧化[13]、增強免疫[14-15]、抗腫瘤[16-17]、抗疲勞[18]及改善學習記憶[19-20]等作用。黨參黃酮類化合物具有明顯的抗疲勞功效[11]。另外黨參炔苷顯示抗胃潰瘍活性[10-11]，黨參中的蒼術內(nèi)酯Ⅲ具有明顯的抗炎活性[10]。

2015年版《中華人民共和國藥典》關于黨參的定量評價僅有醇浸出物的含量一項指標[6]，顯然存在著一定的局限性。為了建立一種簡單、可行的能夠全面改善黨參飲片質(zhì)量標準的產(chǎn)地加工炮制一體化工藝，本研究從紋黨參鮮藥材入手，以飲片醇浸出物含量、水浸出物含量及多糖、總黃酮、黨參炔苷和蒼術內(nèi)酯Ⅲ含量為指標，綜合優(yōu)選紋黨參飲片的產(chǎn)地加工炮制一體化工藝。

1 儀器與試藥

Waters e2695系列高效液相色譜儀，配備Waters 2998二極管陣列檢測器及Empower 3色譜管理軟件；紫外分光光度計（UV-1700，Shimadzu）；電熱鼓風干燥箱（DHG 9070A，上海一恒科學儀器有限公司）；多功能粉碎機（750T，上海市浦恒信息科技有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-2，常州國華電器有限公司）；分析天平（CPA225D，賽多利斯科學儀器）；旋轉蒸發(fā)儀（Eyela OSB-2100，日本）；超聲波清洗儀（KQ-400KDE，常州諾基儀器有限公司）。

對照品黨參炔苷（批號MUST-11111901）、蒼術內(nèi)酯Ⅲ（批號MUST-11122211）、葡萄糖（批號130407）、蘆丁（批號05-1001）均由上海中藥標準化研究中心提供，純度均為98%；甲醇、乙腈為色譜純，乙醇為分析純，水為重蒸餾去離子水。

紋黨參藥材采自甘肅省文縣中寨鎮(zhèn)大海村，經(jīng)蘭州大學藥學院周印所教授鑒定為紋黨參Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta（Nannf.）L.T. Shen的根。

2 方法與結果

2.1 加工炮制方法

2.1.1 新工藝Ⅰ飲片（XⅠYP）的制備 取同一批大小均勻的鮮紋黨參，均分為8份，每份2.0 kg，在80 ℃條件下分別烘至含水量為藥材原始含水量的30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%時，取出切片（厚度為3.0 mm），50 ℃烘干，制得8個飲片樣品（XⅠYP1～XⅠYP8）。每個樣品平行做3份。加工特征描述及所需時間見表1。

2.1.2 新工藝Ⅱ飲片（XⅡYP）的制備 取同一批大小均勻的鮮紋黨參，均分為8份，分別在50、60、70、80、90、100、110、120 ℃條件下烘至含水量為藥材原始含水量的50%，取出切片（厚度為3.0 mm），50 ℃烘至干燥，制得8個飲片樣品（XⅡYP1～XⅡYP8）。每個樣品平行做3份。加工特征描述及所需時間見表1。其中新工藝Ⅱ中XⅡYP4的加工方法與新工藝Ⅰ中XⅠYP3相同。

2.1.3 傳統(tǒng)紋黨參飲片（TDYP）的制備 取同一批紋黨參鮮藥材20 kg，按藥材原料→淘洗→上串→晾曬→揉搓→發(fā)汗→揉搓→清洗→整形（修枝）→晾曬至干燥→悶潤→切厚片（3.0～5.0 mm）→干燥的傳統(tǒng)工藝制備飲片[6]。加工特征描述及所需時間見表1。

表1 鮮紋黨參產(chǎn)地加工炮制一體化工藝試驗特征描述

2.2 指標成分測定

2.2.1 醇浸出物和水浸出物含量測定 按2015年版《中華人民共和國藥典》附錄方法分別測定樣品中醇浸出物和水浸出物的含量。

2.2.2 多糖含量測定

2.2.2.1 樣品溶液的制備 精密稱取2 g紋黨參飲片粉末（過40目篩），脫脂（95%乙醇加熱回流2次，每次1 h）；棄去醇提液，藥渣干燥后，加12、10、8倍量水煎煮，煎煮3次，每次40 min。合并提取液，濃縮至干，加水定容至10 mL，過濾，得樣品溶液，于4 ℃放置，備用。

2.2.2.2 標準曲線的制備 精密稱取葡萄糖對照品1 mg，置10 mL容量瓶中，加水定容至刻度，配成濃度為0.1 g/L的葡萄糖對照品貯備液。精密移取0.00、0.20、0.40、0.80、1.00 mL對照品貯備液于試管中，用蒸餾水補足至2 mL，加入5%苯酚溶液1 mL，搖勻，迅速加入濃硫酸5 mL，搖勻，放置10 min。于40 ℃水浴中保溫15 min，取出，冷卻至室溫，490 nm處測吸光度。平行測定3次。以質(zhì)量濃度為橫坐標，平均吸光度（A）為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y＝3.974 4X－0.001 3，r＝0.995 6。表明在0.000～0.051 mg范圍內(nèi)有良好的線性關系。

2.2.2.3 樣品測定 精密量取“2.2.2.1”項下樣品溶液25 μL，蒸餾水定容至10 mL。每個樣品移取150 μL，加水補足至2.0 mL，后續(xù)步驟同“2.2.2.2”項。分別測定3次，計算平均吸光度，根據(jù)標準曲線計算樣品中多糖的含量[21]。

2.2.3 總黃酮含量測定

2.2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品5 mg，置25 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解，并以甲醇定容至刻度，搖勻，得蘆丁標準品儲備液，于4 ℃放置，備用。

2.2.3.2 供試品溶液的制備 精密稱取2 g樣品粉末（過40目篩），置圓底燒瓶中，加10、8倍量甲醇，回流提取2次，每次40 min，過濾，濾液濃縮，再定容至10 mL。

2.2.3.3 標準曲線的制備 精密量取蘆丁對照品0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL置于25 mL容量瓶中，各加水至6.0 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁1 mL，搖勻，再放置6 min，加4%氫氧化鈉溶液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。以無蘆丁對照品溶液的陰性試劑為空白，于波長505 nm處測定吸光度，平行測定3次。以平均吸光度（A）為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y＝3.172 5X＋0.002 3，r＝0.996 7。表明在0.002 5～0.100 0 g/L范圍內(nèi)有良好的線性關系[22]。

2.2.3.4 樣品測定 精密移取“2.2.3.2”項下供試品溶液1 mL，蒸干，加2 mL蒸餾水復溶，精密移取0.5 mL，置25 mL容量瓶中，后續(xù)步驟同“2.2.3.3”項，測定3次，計算平均吸光度，根據(jù)標準曲線計算各樣品中總黃酮的含量。

2.2.4 黨參炔苷含量測定

2.2.4.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（26∶74）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：267 nm；進樣量：10 μL。

2.2.4.2 標準曲線的建立 精密稱取黨參炔苷對照品1.18 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解并定容至刻度，配成濃度為0.590 g/L的黨參炔苷對照品貯備液。貯備液以甲醇稀釋，配制濃度為0.004 6、0.009 2、0.018 4、0.036 9、0.073 8、0.147 5、0.295 0、0.590 0 g/L的標準溶液，按“2.2.4.1”項下色譜條件測定。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y＝9 337 428.638 9X＋36 628.162 9，r＝0.999 5。表明在0.004 6～0.590 0 g/L范圍內(nèi)有良好的線性關系[23-24]。

2.2.4.3 樣品測定 取“2.2.3.2”項下制備的供試品溶液，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾后，取續(xù)濾液進樣，根據(jù)色譜峰面積，代入回歸方程計算。

2.2.5 蒼術內(nèi)酯Ⅲ含量測定

2.2.5.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（71∶29）；流速：1 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：220 nm；進樣量：10 μL。

2.2.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取蒼術內(nèi)酯Ⅲ對照品1.97 mg，置2 mL容量中瓶，加甲醇超聲溶解并定容至刻度，配成濃度為0.985 g/L的蒼術內(nèi)酯Ⅲ對照品貯備液。貯備液以甲醇稀釋，配制濃度為0.000 2、0.000 5、0.001 0、0.001 9、0.003 8、0.007 7、0.015 4、0.030 8 g/L的標準溶液，按“2.2.5.1”項下色譜條件測定。以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程Y＝51 897 794.508 3X－2413.159 3，r＝0.999 6。表明在0.000 2～0.030 8 g/L范圍內(nèi)有良好的線性關系[25]。

2.2.5.3 樣品測定 取“2.2.3.2”項下供試品溶液，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進樣，根據(jù)色譜峰面積，代入回歸方程計算。

2.2.6 樣品含量測定結果 各樣品中指標成分含量測定結果見表2。飲片XⅠYP3的醇浸出物（55.36%）、水浸出物（54.91%）、多糖（27.29%）、總黃酮（1.58 mg/g）、黨參炔苷（1.90 mg/g）和蒼術內(nèi)酯Ⅲ（10.95 μg/g）的含量均高于傳統(tǒng)工藝制得的飲片，同時XⅠYP3的醇浸出物、水浸出物、蒼術內(nèi)酯Ⅲ的含量也高于其他工藝。因此，優(yōu)選的工藝為：80 ℃烘至含水量為藥材原始含水量的50%時切片。

表2 不同加工炮制方式的各樣品指標成分含量測定結果（±s，n＝3）

表2 不同加工炮制方式的各樣品指標成分含量測定結果（±s，n＝3）

樣品 醇浸出物/% 水浸出物/% 多糖/% 總黃酮/（mg/g）黨參炔苷/（mg/g） 蒼術內(nèi)酯Ⅲ/（μg/g）XⅠYP1 44.05±0.04 46.31±0.20 28.93±0.35 1.76±0.04 1.11±0.04 3.70±0.11 XⅠYP2 49.35±0.04 50.57±0.54 25.59±0.00 1.67±0.30 1.38±0.05 10.88±0.70 XⅠYP3 55.36±2.12 54.91±1.91 27.29±0.42 1.58±0.06 1.90±0.04 10.95±0.66 XⅠYP4 47.09±1.05 45.62±0.37 31.50±0.00 1.54±0.12 0.82±0.04 9.14±0.18 XⅠYP5 38.37±0.42 41.78±1.46 25.11±0.31 1.60±0.16 1.01±0.04 10.64±0.47 XⅠYP6 43.21±0.17 47.10±0.20 30.59±0.53 1.18±0.04 0.91±0.04 4.27±0.13 XⅠYP7 46.31±0.20 46.70±0.09 31.64±0.35 1.60±0.21 1.04±0.03 6.66±0.03 XⅠYP8 36.82±2.69 44.26±2.56 29.90±0.57 1.54±0.06 1.27±0.01 5.44±0.06 XⅡYP1 52.59±3.18 53.74±1.63 32.70±0.48 1.51±0.02 0.67±0.04 2.10±0.07 XⅡYP2 49.45±1.25 50.49±0.15 26.50±0.48 1.27±0.06 0.95±0.03 9.20±0.06 XⅡYP3 44.15±0.04 44.29±0.13 25.04±0.64 1.64±0.04 1.59±0.02 8.23±0.07 XⅡYP4 55.36±2.12 54.91±1.91 27.29±0.42 1.58±0.06 1.90±0.04 10.95±0.66 XⅡYP5 50.41±0.42 50.22±0.00 28.58±0.48 1.44±0.08 2.01±0.04 4.21±0.07 XⅡYP6 49.52±3.15 47.56±0.33 30.22±0.96 1.63±0.06 1.94±0.04 3.89±0.01 XⅡYP7 41.14±0.95 44.57±0.07 21.75±2.07 1.32±0.00 1.86±0.02 3.98±0.13 XⅡYP8 45.69±0.39 45.96±0.12 23.45±0.00 1.36±0.06 1.49±0.04 4.55±0.11 TDYP 46.35±1.99 47.61±0.36 21.40±0.23 1.41±0.01 1.42±0.02 3.57±0.08

2.3 驗證試驗

取同一批大小均勻的鮮紋黨參，精密稱取1.0 kg。按優(yōu)選的工藝，即鮮紋黨參藥材80 ℃烘至含水量為藥材原始含水量的50%，取出切片（厚度為3.0 mm），50 ℃烘干得飲片，平行制備3份。按“2.2”項下各指標成分含量測定方法進行測定，結果見表3。按優(yōu)選工藝制備的飲片中各成分含量與方法學研究時的飲片XⅠYP3及XⅡYP4結果基本一致。與傳統(tǒng)工藝相比，各指標成分含量均有所增加，指標變化率見表3。變化率（%）＝（新工藝飲片中含量－傳統(tǒng)飲片中含量）÷傳統(tǒng)飲片中含量×100%。

表3 驗證試驗結果

3 討論

本試驗首先考察了80 ℃烘至含水量為藥材原始含水量的不同百分比時切片對紋黨參飲片中指標成分含量的影響（新工藝Ⅰ），由表2可以看出，XⅠYP2、XⅠYP3、XⅠYP4和XⅠYP7的醇浸出物含量與TDYP相比均有不同程度的提高。由圖1可見，含水量為藥材原始含水量的50%時切片，制得的飲片XⅠYP3 的醇浸出物和水浸出物含量均最高，分別為55.36%和54.91%，與TDYP相比分別提高15.33%和19.44%。新工藝Ⅰ的加工條件下，各飲片多糖含量隨含水量的變化呈先降后增的變化趨勢，但總體較傳統(tǒng)工藝制備的飲片均有提高，最高變化率達47.85%。飲片中總黃酮的含量與加工時飲片的含水量無關。黨參炔苷和蒼術內(nèi)酯Ⅲ的含量都會因處理方式的差異而變化，當80 ℃烘至含水量達藥材原始含水量的50%時制得的飲片（XⅠYP3）黨參炔苷和蒼術內(nèi)酯Ⅲ的含量均最高，分別為1.90 mg/g和10.95 μg/g，與TDYP相比，分別提高了33.80%和206.72%。綜上，優(yōu)選的工藝為：新鮮紋黨參藥材80 ℃烘至含水量為藥材原始含水量的50%時切厚片，50 ℃干燥。

其次，本試驗新工藝Ⅱ考察了不同溫度（50～120 ℃）烘至含水量為藥材原始含水量的50%時切片對紋黨參飲片中指標成分含量的影響。由表2可見，XⅡYP1、XⅡYP2、XⅡYP4、XⅡYP5、XⅡYP6的醇浸出物高于TDYP。XⅡYP2、XⅡYP4、XⅡYP5的水浸出物含量高于TDYP。由圖2可見，當80 ℃烘至含水量為為藥材原始含水量的50%時切片，制得的飲片XⅡYP4的醇浸出物含量（55.36%）和水浸出物含量（54.91%）均最高。該加工條件下，各飲片樣品中多糖含量隨溫度的增加呈先增后降的變化趨勢，但總體較傳統(tǒng)工藝制備的飲片均有所提高，最高變化率可達52.80%。XⅡYP2、XⅡYP7、XⅡYP8的總黃酮含量稍低于TDYP，其他樣品均有不同程度提高（2.13%～16.31%）。飲片中黨參炔苷的含量隨溫度的升高先升后降，90 ℃時最高，之后又逐漸降低。蒼術內(nèi)酯Ⅲ的含量因處理方式的差異而變化。綜合分析可見，新工藝Ⅱ中XⅡYP4的加工方式與新工藝Ⅰ中XⅠYP3的加工方式完全相同，而且各指標成分均較TDYP有所改善。

圖1 新工藝Ⅰ中含水量變化對紋黨參飲片中指標成分的影響

圖2 新工藝Ⅱ中溫度變化對紋黨參飲片中指標成分的影響

4 結論

藥材加工過程受多種因素的影響，往往會因錯誤的處理過程而造成活性成分或一些指標成分含量的損失，從而使藥材的品質(zhì)發(fā)生改變。因此，應該將鮮藥材進行科學的前處理加工干燥，最大化地保留藥材中的有效成分，而非隨意采用曬干、陰干等粗放方式干燥鮮藥材。

“新鮮紋黨參藥材80 ℃烘至含水量50%時切厚片，干燥”的產(chǎn)地加工一體化技術，一方面使紋黨參飲片的制備時間大大縮短，且50%含水量切片時不滲汁、無掉渣，斷面平整，切片較為容易，干燥后的飲片外形美觀；另一方面，與傳統(tǒng)飲片加工方法相比，因避免了藥材干燥后二次悶潤的過程，極大程度地保留了紋黨參中的活性成分。驗證試驗進一步說明所建立的一體化加工工藝穩(wěn)定可行。

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Study on Producing and Preparing Integration Process based on Fresh Codonopsis pilosula Nannf.var.modesta (Nannf.) L.T.Shen

QIANG Si-si1,2, GAO Xia1, MA Yu-ling1, ZHENG Xiao-ping1,

HU Fang-di1,3, LI Ying-dong3(1. School of Pharmacy, Lanzhou University, Lanzhou 730000, China; 2. Third Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029, China; 3. Gansu University of Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China)

Objective To study the effects of different drying processes on the effective constituents in Wen Codonopsis pilosula (WPP) Decoction Pieces; To develop the optimized producing and preparing integration process based on fresh WPP. Methods Fresh WPP in harvest period was prepared respectively as follows: ① Fresh WPP was dried to different percentage (30%–100%) of original moisture contents of crude drugs at 80 ℃ in oven, then sliced and dried at 50 ℃ to obtain eight decoction pieces of WPP (XⅠYP1–8). ② The fresh WPP was baked to 50% of water content of crude drug under different temperatures (50–120 ℃), respectively, then sliced and dried at 50 ℃to obtain eight decoction pieces of WPP (XⅡYP1–8). ③ Dried WPP was moistened, sliced and naturally dried, then were renamed as traditional decoction pieces. The contents of lobetyolin and atractylenolide Ⅲ was determined by HPLC. The phenol-sulfuric acid and colorimetric method were applied respectively to detect contents of polysaccharide and total flavonoids. The contents of aqueous and alcoholic extracts were determined simultaneously. Results The contents of alcoholic extracts (55.36%), aqueous extracts (54.91%) and atractylenolide Ⅲ (10.95 μg/g) in XⅠYP3 pieces were higher than other decoction pieces. Conclusion The optimized process was that fresh WPP was baked to water content of 50% at 80 ℃, then sliced and dried. Compared with conventional preparing methods,the integration process was time-saving and effort-saving. Meanwhile, the prepared pieces have higher content of active ingredients.

fresh Wen Codonopsis pilosula; processing in producing areas; preparing; integration

10.3969/j.issn.1005-5304.2017.01.018

R282.4

A

1005-5304(2017)01-0071-06

2016-01-30）

（

2016-04-28；編輯：陳靜）

甘肅省科技支撐計劃-社會發(fā)展類（1504FKCA010）；甘肅中醫(yī)藥管理局科研課題（GZK-2014-13，GZK-2015-19）；蘭州市科技計劃項目（2013-4-75、2014-2-30）

胡芳弟，E-mail：hufd@lzu.edu.cn