DcR3基因?qū)σ认侔┞闶笠浦擦龌熋舾行缘挠绊?

肖華平 ，謝輝 ，羅春陽 ，李慶 ，方玉江

（1.湘南學院附屬醫(yī)院腫瘤防治中心，湖南 郴州 423000；2.美國密蘇里大學醫(yī)學院Ellis Fischel腫瘤中心，密蘇里州 哥倫比亞 65212）

基礎研究·論著

DcR3基因?qū)σ认侔┞闶笠浦擦龌熋舾行缘挠绊?

肖華平 1，謝輝 1，羅春陽 1，李慶 1，方玉江 2

（1.湘南學院附屬醫(yī)院腫瘤防治中心，湖南 郴州 423000；2.美國密蘇里大學醫(yī)學院Ellis Fischel腫瘤中心，密蘇里州 哥倫比亞 65212）

目的探討RNA干擾沉默誘騙受體-3（DcR3）對人胰腺癌細胞裸鼠移植瘤化療敏感性的影響及其可能機制。方法取對數(shù)生長期的AsPC-1細胞1×106個/ml，接種于5周齡裸鼠右后肢腹股溝，當皮下腫瘤直徑為8 mm左右，隨機分為4組（n=10）：對照組、化療組、陰性質(zhì)粒+化療組、DcR3 siRNA+化療組。觀察DcR3 siRNA聯(lián)合化療藥物對人胰腺癌AsPC-1細胞裸鼠移植瘤的治療效果。應用ELISA和Western blot檢測DcR3蛋白的變化；TUNEL分析腫瘤細胞凋亡；Western blot和RT-PCR檢測FasL、Caspase-8和Caspase-3等凋亡因子的表達。結(jié)果化療組、陰性質(zhì)粒+化療及DcR3 siRNA+化療組均可抑制移植瘤的生長，與對照組比較，3組抑瘤率平均值分別為（35.87±4.58）%、（40.68±4.16）%和（90.25±2.53）%，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=47.736，P=0.000），DcR3 siRNA+化療組抑瘤率較化療組增加；對照組、化療組、陰性質(zhì)粒+化療以及 DcR3 siRNA+ 化療組移植瘤重量平均值分別為（0.95±0.03）、（0.63±0.04）、（0.67±0.02）和（0.17±0.06）g，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=85.531，P=0.000），DcR3 siRNA+化療組瘤重較化療組減輕；對照組、化療組、陰性質(zhì)粒+化療組、DcR3 siRNA+化療組凋亡率平均值分別為（6.3±2.21）%、（14.8±2.65）%、（14.5±3.06）%和（54.6±3.23）%，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=104.225，P=0.000），DcR3 siRNA+化療組凋亡率較化療組增加；DcR3 siRNA+化療組的FasL、Caspase-8和Caspase-3蛋白表達較其他各組上升（P=0.000）。結(jié)論沉默DcR3可激活FasL/Caspase凋亡途徑，促進細胞凋亡，增加胰腺癌細胞移植瘤對化療的敏感性。

胰腺癌；誘騙受體-3；RNA干擾；凋亡；化療敏感性

胰腺癌（pancreatic cancer，PC）由于具有癥狀隱匿、侵襲性強等特點，因此明確診斷較晚，手術(shù)切除率低及術(shù)后存活率低，化療是其重要的治療方法，然而至今單純的化療也不能延長患者的存活率。更為遺憾的是，至今還未找到在胰腺癌對化療藥物耐受機制中起重要作用的耐受基因。因此，研究如何增強胰腺癌對化療的敏感性以及提高胰腺癌治療效果有重要的臨床意義。

本實驗運用RNA干擾沉默誘騙受體-3（decoy receptor 3，DcR3），觀察 DcR3siRNA對人胰腺癌AsPC-1細胞裸鼠移植瘤化療增敏的效果，并探討其相關機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 細胞系及培養(yǎng)人胰腺癌細胞株AsPC-1（美國密蘇里大學Ellis Fischel cancer center Dr.Fang惠贈）培養(yǎng)條件為：含10%小牛血清PRMI 1640培養(yǎng)基，恒溫37℃，5%二氧化碳CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.1.2 DcR3 siRNA質(zhì)粒的構(gòu)建應用篩選siRNA的軟件，選取DcR3靶序列：5'-CGCUGCAGCCUCUU GAUGGAGAUGUCC-3'，由上海生物工程股份有限公司合成DcR3特異性siRNA序列：正向：5'-ACAC CCACCUACCCCUGGCDTDT-3'；反向：5'-GCCAGGG GUAGGUGGGUGUDTDT-3'。同時將上述寡核苷酸序列打亂重新組合，設計5'-GACACACCACCUCCC CUGCDTDT-3'和5'-GGCGACGGGUGUGAGGUGU DTDT-3'作為陰性對照組。

1.1.3 實驗試劑ELISA檢測試劑盒（購自美國Bio-Techne 公司），F(xiàn)asL、Caspase-8、Caspase-3、β-action和DcR3抗體（購自美國Cell Signaling Technology公司），Alkaline phosph-atase結(jié)合抗-兔 /鼠 IgG二抗（購自美國Sigma公司），核蛋白提取試劑盒（購自美國Pierce公司），Trizol（購自美國Gibco公司），逆轉(zhuǎn)錄 RCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）試劑盒（美國Thermo Fisher Scientific公司產(chǎn)品），TUNEL凋亡檢測試劑盒（購自美國Promega公司）。

1.1.4 實驗動物4～6周齡BALB/c nu/nu雄性裸小鼠，體重18～22 g，共40只，均購自中南大學動物學部[動物合格證號：SCXK（湘）2015-0006]。

1.2 方法

1.2.1 人胰腺癌裸鼠移植瘤動物模型的復制及動物實驗將AsPC-1細胞按1×106個/ml每只分別接種于5周齡裸鼠右后肢腹股溝，以瘤體直徑4 mm為成瘤標準，當裸鼠皮下腫瘤平均長徑為8～10 mm。將移植瘤裸鼠隨機分為4組（n=10）。第1組對照組，第8天后裸鼠皮下瘤內(nèi)多點注射劑量100 μl的生理鹽水，1次/2 d，共7次；第2組化療組，8 d后腹腔注射吉西他濱100 mg/kg，1次/2 d，共7次；第3組陰性對照+化療組，8d后腹腔注射吉西他濱100mg/kg，同時裸鼠皮下瘤內(nèi)多點注射0.5 ml按10 μg/kg的陰性質(zhì)粒和脂質(zhì)體配成的復合物，1次/2 d，共7次；第4組DcR3 siRNA+化療組，即8 d后裸鼠皮下瘤內(nèi)多點注射0.5ml按10μg/kg的重組質(zhì)粒DcR3 siRNA和脂質(zhì)體配成的復合物，并予腹腔注射吉西他濱100 mg/kg，1次/2 d，共7次。開始治療后，每間隔4天測量并計算腫瘤體積，以每次腫瘤體積的均數(shù)繪制生長曲線，腫瘤體積的計算公式為VT（mm3）=ab2/2，a和b分別為長徑和短徑。荷瘤28 d后脫頸處死裸鼠，剝離腫瘤，稱重。并計算抑瘤率（inhibitory rate，IR），抑瘤率（IR）（%）=[（VA-VB）/VA]×100%，A和B分別為對照組和實驗組。

1.2.2 ELISA法檢測實驗各組移植瘤中DcR3的蛋白量應用Pierce公司試劑盒提取細胞蛋白，進行ELISA實驗。首先用濃度100μl/孔的抗DcR3 mAb包被ELISA板，置37℃，4h；再用5%小牛血清置37℃封閉40 min，封閉時將封閉液加滿各反應孔，封閉結(jié)束后用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3 min；將稀釋好DcR3純標品和待測樣品加入酶標反應孔中，每樣品至少加雙孔，每孔 100 μl，置于 37℃，40～60 min，用洗滌液滿孔洗滌3遍，每遍3 min；最后將生物素標記的抗DcR3抗體加入板中，室溫孵育1 h，每孔加入底物TMB 100 μl的置37℃避光放置10 min，加入終止液顯色，A492下讀數(shù)。

1.2.3 TUNEL檢測實驗各組腫瘤細胞的凋亡將腫瘤組織連續(xù)切片，置45～50℃孵育箱內(nèi)48 h，用4%多聚甲醛固定細胞40min后PBS沖洗1次。加入含0.1%Triton X-100的PBS，冰浴孵育3 min，PBS沖洗1次。然后用100μl 20 μg/ml Proteinase K溶液在室溫下處理20 min，增加細胞膜的通透性后，用PBS沖洗3次；制備50μl的TUNEL反應混合液：用2 μl TdT酶+48 μl生物素標記的Biotin-dUPT。加50 μl TUNEL反應混合液于玻片上，在暗濕盒中反應37℃×1h。PBS沖洗3次，用抗熒光淬火封片液封片后熒光顯微鏡下觀察。使用的激光波長范圍為450nm，發(fā)射波長范圍為515nm（綠色熒光）。陽性細胞的細胞核發(fā)綠光，觀察10個200倍鏡下視野，每個視野計數(shù)200個細胞，計數(shù)其中陽性細胞數(shù)，取其平均數(shù)為凋亡指數(shù)。

1.2.4 Western blot檢測實驗各組FasL、Caspase-8和Caspase-3的蛋白表達腫瘤組織加入細胞裂解RiPA緩沖液裂解細胞，提取總蛋白。測定濃度后各取100 μg蛋白樣本進行電泳，通過電轉(zhuǎn)印法將蛋白從聚丙烯酰胺凝膠上轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素濾膜（PVDF）上，5%脫脂奶常溫封閉1 h，加入一抗（FasL、β-action:1∶1 000；Caspase-8和 Caspase-3:1∶500），于4℃過夜，TBST洗膜后加入相應的二抗（1∶1 000）常溫孵育1 h，最后NBT/BCIP顯色，相對蛋白的表達量=目的蛋白灰度值/β-action灰度值。

1.2.5 RT-PCR檢測實驗各組DcR3、FasL、Caspase-8和Caspase-3的基因表達將液氮凍存的腫瘤組織放入EP管中，用Trizol提取各組細胞的總RNA，各取1 μg RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，取2 μl cDNA以FasL、Caspase-8和 Caspase-3的引物（FasL引物：正向 5'-GGTTGCCTTGGTAGGATTGG-3'，反向 5'-CCT TGAGTTGGACTTGCCTGTT-3'，產(chǎn)物長度 196 bp；Caspase-8引物：正向5'-TACTACCGAAACTTGGAC C-3'，反向 5'-GTGAAAGTAGGTTGTGGC-3'，產(chǎn)物長度為515 bp；Caspase-3引物：正向5'-ATGGAGAAC AATAAAACCT-3'，反向 5'-CTAGTGATAAAAGTAG AGTTC-3'產(chǎn)物長度為834bp）以及GAPDH的引物（正向 5'-TGACTTCAACAGCGACACCCAC-3'，反向5'-AACTGTGAGGAGGGGAGATTC-3'，產(chǎn)物長度為277bp）進行PCR擴增，分別檢測各組中的FasL、Caspase-8、Caspase-3和內(nèi)參GAPDH的mRNA表達水平。PCR 反應條件為：94℃變性 45 s；60℃（FasL）、50.6℃（Caspase-8）、50℃（Caspase-3） 退火 60 s，進行30個循環(huán)，72℃延伸5 min。最后取擴增產(chǎn)物在1.5%瓊脂糖凝膠上電泳，產(chǎn)物條帶用凝膠成像系統(tǒng)照相并進行灰度分析，目的片段的相對表達量=目的基因的灰度值/GAPDH的灰度值。

1.3 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組間比較采用方差分析或重復測量設計的方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t檢驗，兩組間比較用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 胰腺癌AsPC-1細胞裸鼠移植瘤的生長以及抑制率

根據(jù)所測得的移植瘤長短徑，計算出移植瘤的體積，從而得到4組移植瘤生長曲線，結(jié)果顯示，與對照組比較，化療組、陰性質(zhì)粒+化療組、DcR03 siRNA+化療組都能夠抑制腫瘤生長，3種治療方法的抑瘤率平均值分別為（35.87±4.58）%、（40.68±4.16）%和（90.25±2.53）%，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=47.736，P=0.000），DcR3 siRNA+ 化療組抑瘤率較化療組增加（見圖1A）。

DcR3 siRNA+化療組與化療組治療后第4、8、12、16及20天的移植瘤體積比較，采用重復測量設計的方差分析，結(jié)果：①不同時間的腫瘤體積有差異（F=64.631，P=0.000）；②DcR3 siRNA+ 化療組與化療組的腫瘤體積有差異（F=81.632，P=0.000），與化療組比較，DcR3 siRNA+化療組腫瘤體積較小，相對抑制腫瘤效果較好；③DcR3 siRNA+化療組與化療組的腫瘤體積變化趨勢有差異（F=23.585，P=0.016）。見附表和圖1A。

圖1 DcR3 siRNA聯(lián)合化療對AsPC-1細胞裸鼠移植瘤的生長抑制作用

附表 治療后各組荷瘤小鼠的平均腫瘤體積的比較 （n=10，±s）

附表 治療后各組荷瘤小鼠的平均腫瘤體積的比較 （n=10，±s）

對照組 926.5±285.3 2 256.5±358.4 4 031.5±506.8 6 174.5±912.6 9 593.8±986.9化療組 508.4±146.2 1 305.7±279.5 2 570.5±612.3 4 185.3±835.6 5 894.5±715.2陰性質(zhì)粒+化療組 485.5±137.8 980.4±215.3 2 265.8±346.1 3 859.4±868.2 5 269.7±654.4 DcR3 siRNA+ 化療組 243.7±48.3 316.4±115.2 425.8±215.5 935.7±479.5 1 375.8±132.1

處死裸鼠后對照組、化療組、陰性質(zhì)粒+化療組以及DcR3 siRNA+化療組腫瘤重量分別為（0.95±0.03）、（0.63±0.04）、（0.67±0.02）和（0.17±0.06）g，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=85.531，P=0.000），DcR3 siRNA+化療組瘤重較化療組減輕（見圖1B）。

2.2 DcR3在胰腺癌AsPC-1細胞裸鼠移植瘤中的表達

DcR3 siRNA+化療組DcR3蛋白量少于其他各組，與單獨化療組比較，兩者間DcR3的蛋白量差異有統(tǒng)計學意義（F=96.478，P=0.000）（見圖 2A）；Western blot檢測各組DcR3蛋白的表達進一步證實，在AsPC-1細胞裸鼠移植瘤中注射DcR3 siRNA能降低DcR3蛋白表達（見圖2B）。

圖2 DcR3蛋白在AsPC-1細胞裸鼠皮下移植瘤中的表達

2.3 腫瘤細胞凋亡情況

對照組、化療組、陰性質(zhì)粒+化療組、DcR3 siRNA+化療組凋亡率平均值分別為（6.3±2.21）%、（14.8±2.65）%、（14.5±3.06）%和（54.6±3.23）%，4組間差異有統(tǒng)計學意義（F=104.225，P=0.000），DcR3 siRNA+化療組凋亡率較化療組增加（見圖3）。

圖3 各組移植瘤組織中腫瘤細胞凋亡變化

2.4 FasL、Caspase-8和Caspase-3凋亡因子的表達

Western blot顯示，DcR3 siRNA+化療組的FasL、Caspase-8和Caspase-3蛋白表達水平平均值均高于其他各組，4組間差異有統(tǒng)計學意義（FFasL=61.652，P=0.000；FCaspase-8=79.378，P=0.000；FCaspase-3=68.849，P=0.000），DcR3 siRNA+ 化療組 FasL、Caspase-8和Caspase-3蛋白表達水平較化療組增加（見圖4A～C）。RT-PCR進一步證實沉默DcR3后可以上調(diào)FasL、Caspase-8和Caspase-3的表達，其上調(diào)的效應與Western blot結(jié)果一致（見圖4D～F）。

圖4 FasL、Caspase-8及Caspase-3在AsPC-1細胞裸鼠皮下移植瘤中的表達

3 討論

DcR3是PITTI等[1]在1998年發(fā)現(xiàn)的腫瘤壞死因子受體（tumor necrosis factor receptor，TNFR）超家族成員，是一種分泌型的可溶性的蛋白分子，在它的氨基酸序列中缺少明顯的跨膜結(jié)構(gòu)，其配體包括FasL、LIGHT和LTβR。研究發(fā)現(xiàn)，DcR3通過競爭性抑制Fas和FasL的結(jié)合，以及阻斷LIGHT和LTβR及HVEM/TR2的相互作作用，從而阻斷FasL和LIGHT介導產(chǎn)生的細胞凋亡，被認為與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及免疫逃逸密切相關[2-4]。ZHOU等[5]報道DcR3在胰腺癌中呈高表達，并通過競爭FasL與Fas的結(jié)合在胰腺癌耐受化療的特性中扮演著重要的角色；CHEN等[6]報道，DcR3能夠阻擋FasL誘導的抑制胰腺癌細胞生長的作用，也提示胰腺癌細胞的DcR3表達高并且遠高于結(jié)腸癌中DcR3的表達。提示胰腺癌對化療藥物耐受是否與其的DcR3蛋白過度表達存在著聯(lián)系。因此，大家也許能夠運用基因敲除的方法減少胰腺癌細胞上DcR3的表達從而增加FasL與Fas的結(jié)合，使死亡信號順利傳遞以達到提高化療藥物對胰腺治療效果的目的。

研究證明，凋亡與腫瘤細胞的化療敏感性有關，誘導腫瘤細胞凋亡是放療和化療的主要目的之一，凋亡指數(shù)低的細胞對化療藥物耐受性高、化療效果差，因此誘導腫瘤凋亡已作為提高惡性腫瘤化療敏感性的重要方面。DcR3是TNFR超家族成員，DcR3通過與不同的凋亡配體相互作用調(diào)節(jié)細胞凋亡。LIANG等[7]對肝癌細胞研究發(fā)現(xiàn)，當沉默DcR3后，可以增加TRAIL誘導的腫瘤細胞凋亡，從而增加肝癌細胞的化療敏感性；ZHANG等[8]研究提示，采用siRNA沉默膠質(zhì)瘤中DcR3高表達，可以抑制膠質(zhì)瘤細胞的生長和增加膠質(zhì)瘤細胞的凋亡。在本實驗中DcR3 siRNA+化療組FasL的蛋白表達較其他各組上升。說明沉默DcR3表達后能增加FasL表達。TUNEL分析結(jié)果顯示，DcR3siRNA+化療組的腫瘤細胞凋亡數(shù)目高于其他組。以上結(jié)果說明，沉默DcR3表達后可以通過增加FasL與Fas的結(jié)合，使死亡信號順利傳遞來提高胰腺癌的化療敏感性。

DcR3調(diào)節(jié)細胞的凋亡是通過與FasL競爭性的結(jié)合而阻斷凋亡信息傳導來實現(xiàn)的[9]。FasL凋亡信號傳導與Caspase的激活密切相關，本實驗發(fā)現(xiàn)，DcR3 siRNA+化療組中的Caspases-8和Caspases-3都存在上調(diào)現(xiàn)象。Caspases-8是FasL途徑凋亡通路的啟動基因，其下游就是Caspases-3，Caspases-3被認為是線粒體凋亡途徑的最終執(zhí)行者[10]。本實驗結(jié)果提示，沉默DcR3增加化療誘導的細胞凋亡可能是通過激活FasL/Caspase途徑來實現(xiàn)。

總之，在體內(nèi)沉默DcR3基因的表達能提高人胰腺癌細胞的化療藥物治療效果。其機制可能為沉默DcR3基因可激活FasL/Caspase凋亡途徑，促進細胞凋亡所致。提示DcR3→FasL→Caspases通路在人胰腺癌細胞對化療敏感性起著至關重要的作用，有望成為人胰腺癌細胞基因治療新的靶點之一。

[1]PITTI R M,MARSTERS S A,LAWRENCE D A,et al.Genomic amplification of a decoy receptor for Fas ligand in lung and colon cancer[J].Nature,1998,396(6712):699-703.

[2]XIU Z,SHEN H,TIAN Y,et al.Serum and synovial fluid lev-els of tumor necrosis factor-like ligand 1A and decoy receptor 3 in rheumatoid arthritis[J].Cytokine,2015,72(2):185-189.

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[5]ZHOU J,SONG S,LI D,et al.Decoy receptor 3 (DcR3)overexpression predicts the prognosis and pN2 in pancreatic head carcinoma[J].World J Surg Oncol,2014,12:52.

[6]CHEN J,GUO X Z,LI H Y,et al.Dendritic cells engineered to secrete anti-DcR3 antibody augment cytotoxic T lymphocyte response against pancreatic cancer in vitro[J].World J Gastroenterol,2017,23(5):817-829.

[7]LIANG C,XU Y,LI G,et al.Downregulation of DcR3 sensitizes hepatocellularcarcinoma cellsto TRAIL-induced apoptosis[J].Onco Targets Ther,2017,10(2):417-428.

[8]ZHANG Y,HUANG S,LENG Y,et al.Effect of DcR3-specific siRNA on cell growth suppression and apoptosis induction in glioma cells via affecting ERK and AKT[J].Onco Targets Ther,2016,9(10):5195-5202.

[9]LIU W,RAMAGOPAL U,CHENG H,et al.Crystal structure of the complex of human FasL and its decoy receptor DcR3[J].Structure,2016,24(11):2016-2023.

[10]YUAN J,NAJAFOV A,PY B F.Roles of caspases in necrotic cell death[J].Cell,2016,167(7):1693-1704.

Effect of Decoy receptor 3 on chemosensitivity in nude mice model of pancreatic cancer*

Hua-ping Xiao1,Hui Xie1,Chun-yang Luo1,Qing Li1,Yu-jiang Fang2
(1.Cancer Center,the Affiliated Hospital of Xiangnan University,Chenzhou,Hunan 423000,China;2.Ellis Fischel Cancer Center,University of Missouri School of Medicine,Columbia,Missouri 65212,USA)

ObjectiveTo investigate the effect of Decoy receptor 3 (DcR3)on chemosensitivity of human pancreatic cancer cells and potential mechanisms.MethodsPancreatic cancer AsPC-1 cells in log-growth phase (1×106cells)were subcutaneously injected in nude mice.Expression of DcR3 was blocked through small interfering ribonucleic acid (siRNA).Seven days post injection,tumor-bearing mice were then randomly divided into 4 groups (n=10 group):control group,chemotherapy group,sham siRNA+chemotherapy group and DcR3 siRNA+chemotherapy.Xenograft of human pancreatic cancer AsPC-1 cells was measured among the groups.Expression level of DcR3 was determined by ELISA and Western blot.Apoptosis rate was detected by TUNEL analysis.Expression levels of FasL protein,Caspase-8,and Caspase-3 were measured by Western blot and RT-PCR.ResultsTumor weight(gram)in chemotherapy group,sham siRNA+chemotherapy group and DcR3 siRNA+chemotherapy group was significantly decreased when compared with control group(0.63± 0.04 vs 0.95±0.03,P=0.000,0.67±0.02 vs 0.95±0.03,P=0.000,0.17±0.06 vs 0.95±0.03,P=0.000),respectively.Silencing of DcR3 expression dramatically reduced weight of tumor when compared with sham siRNA+chemotherapy group (0.17±0.06 vs 0.67±0.02 vs 0.95±0.03,P=0.000).Inhibitory rate of tumor growth in chemotherapy group,sham siRNA+chemotherapy group and DcR3 siRNA+chemotherapy group increased when compared with control group [(35.87±4.58)%vs (0.00±0.00)%,P=0.000,(40.68±4.16)%vs(0.00±0.00)%,P=0.000,(90.25±2.53)%vs(0.00±0.00)%,P=0.000],respectively.Silencing of DcR3 expression dramatically increased inhibitory rate of tumor growth when compared with sham siRNA+chemotherapy group [(90.25±2.53)%vs(0.67±0.02)%vs(40.68±4.16)%,P=0.000].Apoptosis rate in chemotherapy group,sham siRNA+chemotherapy group and DcR3 siRNA +chemotherapy group were significantly increased when compared with control group[(14.8±2.65)%vs(6.3±2.21)%,P=0.000,(14.5±3.06)%vs(6.3±2.21)%,P=0.000,(54.6±3.23)%vs (6.3±2.21)%,P=0.000],respectively.Silencing of DcR3 expression dramatically reduced weight of tumor when compared with sham siRNA+chemotherapy group[(54.6±3.23)%vs(14.5±3.06)%,P=0.000].The expression levels of FasL,Caspase-8,and Caspase-3 in DcR3 siRNA+chemotherapy group were downregulated when compared with the remaining 3 groups(P=0.000).ConclusionSilencing of DcR3 gene can increase the chemosensitivity of human pancreatic cancer by promoting FasL/Caspase-mediated cells apoptosis.

pancreatic cancer;DcR3;small interfering ribonucleic acid;apoptosis;chemosensitivity

R735.9

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.30.001

1005-8982（2017）30-0001-07

2017-05-04

湖南省自然科學基金（No：14JJ3136）；郴州市科技局科研基金（No：CZ2013096）

李慶，E-mail：liqing0685@163.com

（王榮兵 編輯）