• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于智能手機(jī)的麻痹性貝毒現(xiàn)場快速檢測試紙條分析儀*

    2017-12-26 08:27:18鐘隆潔萬梓健蘇凱麒潘宇祥黎洪波
    傳感技術(shù)學(xué)報 2017年12期
    關(guān)鍵詞:檢測

    鐘隆潔,萬梓健,蘇凱麒,潘宇祥,黎洪波,王 平*

    (1.浙江大學(xué)生物傳感器國家專業(yè)實驗室,生物醫(yī)學(xué)工程教育部重點實驗室,生儀學(xué)院,杭州 310027;2.中國科學(xué)院傳感技術(shù)國家重點實驗室,上海 200050)

    基于智能手機(jī)的麻痹性貝毒現(xiàn)場快速檢測試紙條分析儀*

    鐘隆潔1,2,萬梓健1,2,蘇凱麒1,潘宇祥1,黎洪波1,王 平1,2*

    (1.浙江大學(xué)生物傳感器國家專業(yè)實驗室,生物醫(yī)學(xué)工程教育部重點實驗室,生儀學(xué)院,杭州 310027;2.中國科學(xué)院傳感技術(shù)國家重點實驗室,上海 200050)

    石房蛤毒素(STX)是常見的麻痹性貝毒(PSP),通過食物鏈積累在貝類食品中,人類若食用這種有毒的貝類會影響健康,甚至中毒。因此迫切需要一種簡便的方法來檢測這種麻痹性貝毒以避免中毒事件的發(fā)生?;诟偁幮悦庖咴淼脑嚰垪l可以和石房蛤毒素產(chǎn)生特異性顯色反應(yīng),采用研發(fā)的新型手持式分析儀進(jìn)行檢測分析。毒素分析儀采用智能手機(jī)作為光探測器,配合3D打印配件,再通過智能手機(jī)上研發(fā)的用于圖像采集和數(shù)據(jù)處理的應(yīng)用程序,可對顯色后的試紙條進(jìn)行分析處理并得出所測毒素的濃度。這種方法簡單、快速、檢出限低、靈敏度高。目前,本儀器可測得的STX的檢出限:5.2 ng/mL,檢測范圍:5.2 ng/mL~100 ng/mL。實驗表明,本文研制的基于智能手機(jī)系統(tǒng)和免疫分析的手持式試紙條分析儀有望成為對麻痹性貝毒進(jìn)行現(xiàn)場快速檢測的有效工具。

    手持式分析儀;智能手機(jī);試紙條;現(xiàn)場快速檢測;麻痹性貝類毒素

    海洋生物毒素是由海洋中的有毒藻類通過食物鏈傳遞給藻食性的魚、蝦及貝類等生物,并在其體內(nèi)蓄積形成的有毒高分子化合物。海洋毒素種類繁多,其中貝類毒素是危害較大者之一。貝類毒素包括麻痹性貝類毒素(PSP)、腹瀉性貝類毒素(DSP)、神經(jīng)性貝類毒素(NSP)和記憶缺失性貝類毒素(ASP)。其中麻痹性貝類毒素是世界分布最廣、危害最大的一類赤潮藻毒。它是一類擁有胍基的三環(huán)氨基甲酸酯類化合物及其衍生物,包括石房蛤毒素STX(saxitoxin)及其天然衍生物如膝溝藻毒素GTXs(gonyantoxins)、新石房蛤毒素neoSTX(neosaxitoxin)組成,由海洋有毒甲藻代謝產(chǎn)生[1]。人們在食用麻痹性貝毒污染的貝類后,會對人體神經(jīng)肌肉產(chǎn)生麻痹作用,作用機(jī)理主要表現(xiàn)為阻斷神經(jīng)細(xì)胞鈉離子通道,從而造成神經(jīng)系統(tǒng)傳輸障礙[2]。中毒嚴(yán)重時,則會出現(xiàn)呼吸困難,咽喉緊張,隨著肌肉麻痹不斷擴(kuò)展加重,最終導(dǎo)致死亡[3]。麻痹性貝類毒素具有突發(fā)性和廣泛性,其毒性大、反應(yīng)快、無適宜解毒劑的特點,因此開展對麻痹性貝類毒素的現(xiàn)場快速檢測及排除方法的研究對確保水產(chǎn)品及人民生命財產(chǎn)安全具有十分重要的意義。本文主要以麻痹性貝類毒素中的主要成份STX進(jìn)行研究。

    在PSP毒性的評估方法中,作為標(biāo)準(zhǔn)方法的是動物實驗,如小鼠生物測定法(MBA)。小鼠生物學(xué)測定方法在1978年由Yasumoto建立,是許多國家普遍采用的檢測貝毒的方法[4]。具體步驟是將貝類樣品的酸性提取液在小鼠腹腔注射,記錄小鼠的死亡時間。該方法使用“鼠單位”(Mu)來表達(dá),美國公職分析化學(xué)家協(xié)會(AOAC)定義一個鼠單位為一只 20 g重的小白鼠在腹腔注射后15 min內(nèi)死亡的毒素最小劑量。小鼠生物測試法的優(yōu)點是檢測技術(shù)簡單、方法易掌握、儀器簡易,不需要精密的高端儀器和專門的操作人員。該方法雖然容易掌握,不需要使用專門儀器,缺點是不具有特異性,不能確定樣品中毒素成分和結(jié)構(gòu),不同品系、不同批次的小鼠對毒素的敏感性差異較大,并且小鼠死亡時間的判斷受主觀因素、實驗室飼養(yǎng)條件以及實驗人員操作手法影響,樣品中生物基質(zhì)成分復(fù)雜、干擾程度比較大,特別是游離脂肪酸對小鼠毒性影響很大,常常造成假陽性[5-6]。高效液相色譜法(HPLC)是目前較為常用的檢測貝類毒素的理化分析方法,常見貝類毒素均能使用HPLC進(jìn)行檢測,靈敏度和準(zhǔn)確性高,是比較成熟的理化分析技術(shù)[7]。HPLC方法利用毒素分子上的羧基官能團(tuán)與熒光物質(zhì)反應(yīng),生成的熒光性物質(zhì)經(jīng)反相色譜分離后在檢測器上響應(yīng)。HPLC的靈敏度和準(zhǔn)確性高,同時還能確定毒素種類,但其熒光標(biāo)記試劑極不穩(wěn)定,且設(shè)備精密復(fù)雜,檢測用時長。而免疫方法檢測是利用抗原-抗體反應(yīng)確定毒素的類型及含量,包括酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA),放射免疫反應(yīng)(RIA),競爭性酶免疫分析(EIA)等方法。ELISA技術(shù)檢測貝類毒素具有檢測下限低,檢測范圍廣,同時具有特異性高、儀器設(shè)備投資少、檢測成本低、樣品前處理簡便及陽性結(jié)果與其他方法相一致等優(yōu)點,非常適合于對貝類毒素進(jìn)行快速篩選檢測[8-9]。而免疫方法在針對有些貝類毒素的檢測時,如麻痹性毒素STX,可能存在與其他毒素之間的交叉反應(yīng);在檢測過程中,還有可能出現(xiàn)假陽性的情況[10-12]。

    目前實驗室檢測麻痹性貝類毒素的方法中,小鼠法和HPLC由于儀器設(shè)備龐大,專業(yè)性強等原因無法發(fā)展成現(xiàn)場的快速檢測方法[13];免疫方法則較為適合發(fā)展成現(xiàn)場檢測的方法。但由于常規(guī)酶標(biāo)儀的體積較大,不適合在現(xiàn)場環(huán)境下使用。為了能夠適應(yīng)貝類毒素的現(xiàn)場快速檢測,本文研究了一種基于試紙條的現(xiàn)場快速檢測麻痹性貝類毒素的手持式分析儀。所使用的試紙條采用競爭免疫分析方法檢測,可以快速測量海洋毒素。新型手持式試紙條毒素分析儀使用低成本智能手機(jī)和3d打印配件組成。圖像采集和數(shù)據(jù)處理都是采用自制的iOS應(yīng)用程序iStrip完成的。該手持式試紙條毒素分析系統(tǒng)有望成為一個現(xiàn)場毒素快速測量的平臺。

    1 材料與方法

    1.1 試劑和儀器

    石房蛤毒素(STX)購自美國Calbiochem;貝肉樣品取自深圳大亞灣水產(chǎn)區(qū);金標(biāo)免疫分析儀購自杭州奧唯生物技術(shù)有限公司;甲醇、純水、鹽酸、PBS、0.45 μm濾膜,便攜式離心機(jī),手持式均質(zhì)器,移液槍,振蕩器,手持式試紙條毒素分析儀。

    圖1 試紙條檢測原理圖

    1.2 試紙條檢測原理

    利用試紙條來檢測海洋毒素是采用競爭性免疫分析原理。滴加在加樣槽上的溶液在硝酸纖維素膜的毛細(xì)管作用下發(fā)生了顯色變化。這是由于測試樣品與分析物受體進(jìn)行了免疫反應(yīng),在樣品通過特定區(qū)域時,免疫復(fù)合物被固定,因此實驗結(jié)果是在試紙條上會出現(xiàn)肉眼可辨別的顏色變化的條帶。如圖1所示,Au-Ab1是抗體Ab1耦合膠體金而形成的抗體標(biāo)記物,固定在共軛層上。檢測線固定了抗原或抗原的類似物,質(zhì)控線固定了另一種抗體Ab2。在加樣槽中滴加樣品溶液時,測試樣品中的抗原會先與抗體標(biāo)記物形成Au-Ab1-Ag復(fù)合物,在毛細(xì)管作用下,樣品溶液進(jìn)行流動到質(zhì)控線與Ab2結(jié)合,形成Au-Ab1-Ag-Ab2復(fù)合物以確定試紙條的可用性[14]。

    1.3 標(biāo)準(zhǔn)品及實際樣品的配制

    為了建立STX標(biāo)準(zhǔn)曲線,用HCl(pH=3.0)配制6.25 ng/mL~100 ng/mL的STX標(biāo)準(zhǔn)溶液,本文采用的STX標(biāo)準(zhǔn)品濃度分別是6.25 g/mL,12.5 ng/mL,25 ng/mL,50 ng/mL,100 ng/mL。在實際樣品貝肉中用0.1M鹽酸提取,將貝肉攪碎后加入萃取液后,充分振蕩,水浴加熱5 min,離心10 min,使用0.45 μm濾膜過濾后收集上清液即可。

    圖3 研制的軟件iStrip操作流程圖

    1.4 手持式試紙條毒素分析系統(tǒng)設(shè)計

    1.4.1 手持式試紙條毒素分析系統(tǒng)硬件設(shè)計

    手持式分析儀包括兩大部分,一是智能手機(jī),一個是3d配件(如圖2(a)所示)。手持式分析儀配件是用Solidworks設(shè)計,采用ABS(acrylonitrile butadiene styrene)塑料進(jìn)行3D打印。整個配件的尺寸為97 mm×58mm×39 mm,可使手機(jī)及試紙條固定在同一直線上方便進(jìn)行檢測,如圖2(b)。配件主要有手機(jī)定位槽和試紙條定位槽兩個部分,手機(jī)定位槽上的孔洞是為了配合手機(jī)上的按鈕以防止機(jī)械觸碰影響手機(jī)操作。智能手機(jī)上的攝像頭為35 mm的焦距,這個焦距成像距離短不足以滿足實驗的需要,因此我們在檢測儀上外加了一個11 mm的微焦鏡頭,它的成像距離為25 mm剛好可以連接手機(jī)鏡頭和匹配分析儀的后端。

    圖2 手持式分析儀結(jié)構(gòu)圖和實物圖

    1.4.2 手持式試紙條毒素分析系統(tǒng)軟件設(shè)計

    海洋毒素的濃度主要是通過檢測線的的顏色強度來確定的。智能手機(jī)通過拍攝試紙條圖像,采用自制軟件iStrip進(jìn)行分析,軟件流程圖如圖3所示,提取子圖像特征值,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。實際樣品的濃度便可根據(jù)已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線來計算得到。iStrip的工作流程包括校準(zhǔn),樣品測量和數(shù)據(jù)共享。在校準(zhǔn)過程中,iStrip進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)定并建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,在界面中對標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)實驗中數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)重復(fù)數(shù)組進(jìn)行設(shè)置。當(dāng)所有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)實驗組的圖像采集完畢時,系統(tǒng)內(nèi)部將進(jìn)行分析,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,并將校準(zhǔn)參數(shù)寫入校準(zhǔn)文件及更新內(nèi)置運算單元參數(shù)。使用iStrip采集未知樣品的圖像,然后利用線性相關(guān)性計算樣品濃度。在這些過程中,校準(zhǔn)和測量階段的數(shù)據(jù)都能以txt格式存在智能手機(jī)中。

    1.4.3 手持式檢測儀用于STX的檢測

    進(jìn)行STX實際樣品的檢測時,需先用手持式分析儀確定STX的標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖4)。將準(zhǔn)備好的各5種不同濃度的STX標(biāo)準(zhǔn)溶液(本文采用的濃度梯度為6.25 ng/mL,12.5 ng/mL,25 ng/mL,50 ng/mL和100 ng/mL)分別吸取50 μL滴加到試紙條的加樣槽中,等待15 min左右,試紙條上的檢測線和質(zhì)控線顏色發(fā)生變化,便可用檢測儀對試紙條進(jìn)行采集分析,提取試紙條中心的G分量曲線。對每個樣品的G分量曲線進(jìn)行去基線,排除光源強度不穩(wěn)定,試紙條暈染過程不均勻等因素干擾。再對G分量曲線進(jìn)行濾波算法,去除試紙條或溶液中雜質(zhì)的帶來的尖刺影響,使曲線光滑,利于后續(xù)分析。最終把G分量曲線上T檢測線的谷值作為標(biāo)準(zhǔn)曲線的特征值。在一定的檢測范圍內(nèi),每個濃度與之相對應(yīng)的谷值相對應(yīng)(在本文中標(biāo)準(zhǔn)品濃度以10為底的對數(shù)與各濃度對應(yīng)圖像的特征值成線性關(guān)系),即可得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。得出加標(biāo)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線后,可以直接檢測未知濃度樣品,并且通過分析儀的軟件界面上讀取樣品中所含毒素的濃度。

    圖4 用手持式分析儀檢測樣品流程圖

    圖5 快速檢測系統(tǒng)標(biāo)定曲線

    2 結(jié)果與討論

    2.1 手持式試紙條毒素分析儀性能測試

    使用濃度分別為6.25 ng/mL,12.5 ng/mL,25 ng/mL,50 ng/mL和100 ng/mL的STX標(biāo)準(zhǔn)品制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,用手持式檢測儀逐個采集試紙條上的圖像,如圖5(a)所示,五條試紙條的質(zhì)控線是一致的,均為有效,檢測線隨著濃度的增大而顏色變淺。在整個軟件分析過程中,我們使用的是RGB顏色通道中的G通道值進(jìn)行像素值的獲取;在圖像采集中,iStrip會掃描整個試紙條來獲取到每個試紙條上相應(yīng)位置的G通道值,因此掃描軟件上會出現(xiàn)整條G通道分量的掃譜線(如圖5(b))。用自制的軟件iStrip進(jìn)行分析,可以檢測到每條試紙條上的像素出現(xiàn)兩個波谷,一個為質(zhì)控線,一個為檢測線,質(zhì)控線的像素點值基本一致,而檢測線的像素點值隨著濃度的增大而變大,因此濃度越高,顏色越淺,像素值越大,相對應(yīng)的特征值,也就是檢測線T線的谷值越大,依據(jù)這個規(guī)律可建立起STX的標(biāo)準(zhǔn)曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果如圖5(c)。其中,橫坐標(biāo)為各個STX標(biāo)準(zhǔn)品濃度以10為底的對數(shù),縱坐標(biāo)為各濃度對應(yīng)圖像的特征值,各濃度采用6個重復(fù)組,標(biāo)定曲線斜率為-36.624,截距為145.122,線性度為0.967 2。)

    使用手持式試紙條毒素分析儀對濃度分別為40×10-9,80×10-9的STX進(jìn)行檢測,每種濃度將測得的結(jié)果與已知濃度數(shù)值相對比,測試裝置的準(zhǔn)確度。在此標(biāo)定曲線的基礎(chǔ)上,對已知濃度STX標(biāo)準(zhǔn)品的測試結(jié)果如表1所示。

    表1 STX加標(biāo)檢測結(jié)果

    相對標(biāo)準(zhǔn)偏差體現(xiàn)了手持式試紙條分析儀對毒素檢測的重復(fù)性。表中可以看出,分析儀對于毒素濃度的濃度有著較高的平均回收率(>80%),且儀器相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%,說明本儀器對樣品中STX毒素的濃度進(jìn)行檢測是可靠和穩(wěn)定的,所設(shè)計的現(xiàn)場快速檢測麻痹性貝毒STX的儀器性能可滿足現(xiàn)場檢測的需求。對于商用試紙條分析儀而言,主要通過檢測照射在試紙條后的反射光強來計算吸光度。在入射光的光強確定的情況下,假如試紙條顯色區(qū)域較薄而且均勻,即反射的光程保持一樣,則反射光的光強只和試紙條上的待測物濃度成單值函數(shù)。而試紙條分析儀采集的試紙條圖像的有效區(qū)域為紅色,使用互補色G分量進(jìn)行分析,實驗證明與濃度成線性關(guān)系,符合朗伯-比爾定律。兩者都是使用了綠光通道上的吸光度來檢測濃度,原理上是互通的。使用手持式試紙條毒素分析儀和商用的金標(biāo)免疫分析儀分別對6.25 ng/mL~80 ng/mL的16個加標(biāo)樣品進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果如圖5(d),圖為兩種檢測方法的Bland-Altman圖,橫坐標(biāo)為同一樣品兩種測量方法的測量均值,縱坐標(biāo)為其同一樣品測量結(jié)果比值。從圖中可以看出,13.5%(2/16)的點(圖中實心圓圈代表的點)在95%一致性界限以外;在一致性界限范圍內(nèi),比值的最大值為1.12,最小值為0.81。也就是手持式毒素分析儀的測量值是商用讀卡器的0.81到1.12倍,即對于大多數(shù)樣品來說,手持式毒素分析儀的測量值與商用讀卡器測量結(jié)果相差12%到19%。在STX毒素檢測的實際應(yīng)用中,這種差異是可接受的,因此這兩種儀器具有較好的一致性。

    2.2 手持式試紙條毒素分析儀重現(xiàn)性與檢測下限測試

    使用加標(biāo)40 ppb的STX加標(biāo)樣品進(jìn)行實驗,在2 h每間隔5 min記錄測量儀器的特征值,共24組記錄值,測定其變異系數(shù),通過變異系數(shù)反應(yīng)手持式毒素分析儀的重現(xiàn)性,實驗結(jié)果如圖6所示。在標(biāo)定曲線的濃度范圍內(nèi),變異系數(shù)為1.6%,小于10%,重現(xiàn)性較好。

    圖6 手持式毒素分析儀檢測特征值2 h變化圖

    使用空白樣品檢測結(jié)果計算快速檢測裝置的檢測下限。測定一定數(shù)量的空白樣品試紙條,通過毒素分析儀計算得出對應(yīng)數(shù)值,如表2所示。

    表2 空白樣品檢測結(jié)果 單位:μg/kg

    表1中,C0為空白樣品的實際檢測值,AVG為空白樣品實際檢測值的平均值,SD為測量值的標(biāo)準(zhǔn)差,LOD為檢測下限。其中檢測下限的計算方法如下:

    LOD=AVG+3SD

    由計算結(jié)果可知,分析儀檢測下限約為5.19 ppb,當(dāng)樣品中STX濃度小于檢測下限時,系統(tǒng)檢測誤差較大。在實際應(yīng)用中,應(yīng)選擇合理的稀釋或濃縮倍數(shù)對樣品進(jìn)行處理。

    2.3 手持式試紙條毒素分析儀特異性測試

    使用50×10-9的標(biāo)準(zhǔn)品和50×10-9的膝溝藻毒素(GTX-2,3)、短裸甲藻毒素(PbTx-2)、大田軟海綿酸(OA)標(biāo)準(zhǔn)品對手持式試紙條毒素分析儀的特異性進(jìn)行實驗。其中GTX-2,3、PbTx-2與STX同屬于麻痹性的貝類毒素,而OA屬于腹瀉性貝類毒素??傻孟到y(tǒng)的響應(yīng)曲線如圖7所示。

    圖7 毒素分析儀特異性響應(yīng)

    圖7中,橫坐標(biāo)為毒素標(biāo)準(zhǔn)品濃度以10為底的對數(shù),縱坐標(biāo)為檢測系統(tǒng)得出的毒素濃度特異性結(jié)果。STX毒素濃度檢測特異性為95.2%,由于GTX-2,3與STX具有類似的分子結(jié)構(gòu),因此手持式試紙條毒素分析儀對GTX-2,3有較高的交叉反應(yīng)率(15.0%),而對于PbTx-2和OA的交叉反應(yīng)率較低(<15.0%)。由實驗結(jié)果可知,手持式試紙條毒素分析儀對STX有著良好的特異性。

    2.4 實際樣品測試

    聯(lián)合國衛(wèi)生組織規(guī)定100 g貝類可食部分的PSP限量為80 μg STX eq/100 g,毒素試紙條分析儀的檢測范圍是5.2 ng/mL~100 ng/mL,因此在檢測實際樣品時需要對樣品中的毒素進(jìn)行提取和稀釋以盡量保證在分析儀的檢測范圍之內(nèi)。若樣品超出檢測范圍,可對待測溶液進(jìn)一步稀釋后,即可使用手持式試紙條毒素分析儀對實際貝肉樣品中的毒素含量進(jìn)行測定。表3為9個實際樣品的檢測結(jié)果,其中第1、2、3號為在貝肉基質(zhì)中加標(biāo)1 000 ppb的樣品,超出系統(tǒng)檢測范圍,均檢出濃度>100 ppb。第7、8、9是貝肉基質(zhì)空白樣品,系統(tǒng)均檢出小于檢測下限。對于4,、5、6號加標(biāo)80×10-9的貝肉樣品,本系統(tǒng)檢測濃度有較高的準(zhǔn)確率。

    表3 STX樣品檢測結(jié)果

    在實驗室環(huán)境下使用手持式試紙條毒素分析儀完成1個實際樣品檢測的用時為20 min,而且操作簡便,適用于批量檢測,樣品數(shù)量越多能夠節(jié)省的時間越多。由實驗結(jié)果可知,所設(shè)計的手持式試紙條毒素分析儀能夠滿足現(xiàn)場快速檢測的需求。

    表4 快速檢測裝置與其他方法的比較

    由表4可知而對于手持式試紙條毒素分析儀和主流的小鼠法,質(zhì)譜法的比較可知,所設(shè)計的手持式試紙條毒素分析儀具有檢測時間短,一致性好,檢測限低,操作難度低等優(yōu)點,體現(xiàn)了儀器方法的優(yōu)越性。

    3 結(jié)論

    本論文采用手持式試紙條分析儀以現(xiàn)場和快速為目的對海洋毒素濃度定量化水平分析。這種方法是用基于試紙條并配合智能手機(jī)和相關(guān)電路實現(xiàn)的,由于傳統(tǒng)檢測方法(如小鼠生物法)存在著一些不足,不能滿足現(xiàn)場的快速檢測,因而采用試紙條及其檢測設(shè)備,可以更快速更方便的滿足檢測的需要。研制的軟件iStrip操作方便,只需幾個按鈕便能完成操作,而且還能對檢測的海洋毒素進(jìn)行定量化分析??傊?由于智能手機(jī)的普及和便攜式儀器的高適應(yīng)、高集成和容易操作的特點,可將此儀器廣泛推廣和應(yīng)用。對比現(xiàn)有的商用儀器對STX的檢測,可證明此檢測儀器可定性和定量化檢測實際樣品的毒素濃度。因此,手持式試紙條毒素分析儀在海洋環(huán)境監(jiān)測應(yīng)用和食品分析領(lǐng)域中將有很好的應(yīng)用前景。

    [1] 杜偉,陸斗定. 有毒赤潮藻及其毒素的危害與檢測[J]. 海洋學(xué)研究,2008,26(2):89-94.

    [2] Baden D G. Marine Toxins[J]. Handbook of Clinical Neurology,1995,21(65):141.

    [3] 蔣幼民,張連生,趙文彬. 麻痹性貝類毒素中毒的流行病學(xué)特征[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué),2004,31(5):711-712.

    [4] Hummert C,Shen J,Luckas B. Automatic High-Performance Liquid Chromatographic Method for the Determination of Diarrhetic Shellfish Poison[J]. Journal of Chromatography A,1996,729(1):387-392.

    [5] Ben-Gigirey B,Rodríguez-Velasco M,Otero A,et al. A Comparative Study for PSP Toxins Quantification by Using MBA and HPLC Official Methods in Shellfish[J]. Toxicon,2012,60(5):864-873.

    [6] 曹際娟,衛(wèi)鋒,馬惠蕊,等. 貝類毒素檢測技術(shù)及研究進(jìn)展[J]. 檢驗檢疫科學(xué),2004,14(1):53-56.

    [7] Carmichael W,Evans W,Yin Q,et al. Evidence for Paralytic Shellfish Poisons in the Freshwater Cyanobacterium Lyngbya Wollei(Farlow ex Gomont)comb. Nov[J]. Applied and Environmental Microbiology,1997,63(8):3104-3110.

    [8] 于兵,曹際娟,尤永莉,等. ELISA與小白鼠生物法檢測貝類中麻痹性貝毒的比較[J]. 檢疫檢疫科學(xué),2005,15(1):34-35.

    [9] 王峰,劉飛,孟令花,等. 基于抗體包被金磁納米微粒修飾的磁性安培免疫傳感器研制及對人血清癌抗原19-9的檢測[J]. 傳感技術(shù)學(xué)報,2009(9):1232-1238.

    [10] Usleber E,Dietrich R,Bürk C,et al. Immunoassay Methods for Paralytic Shellfish Poisoning Toxins[J]. Journal of AOAC International,2001,84(5):1649-1656.

    [11] Qi-fang L. Detection of Paralytic Shellfish Poisoning(PSP),Diarrhetic Shellfish Poison(DSP),Neurotoxic Shellfish Poison(NSP)by ELISA[J]. China Tropical Medicine,2012,11:38.

    [12] 蘇凱麒,鄒玲,王琴,等. 基于細(xì)胞阻抗傳感器的腹瀉性毒素檢測系統(tǒng)設(shè)計與實現(xiàn)[J]. 傳感技術(shù)學(xué)報,2014,27(3):283-288.

    [13] 謝東華,干寧,王峰,等. 魚肉中氯霉素檢測用抗體包被金磁納米微粒修飾安培免疫傳感器[J]. 傳感技術(shù)學(xué)報,2009,22(10):1371-1377.

    [14] 劉仁沿,梁玉波,陳冰君,等. 膠體金免疫層析方法快速檢測腹瀉性貝毒軟海綿酸的初步研究[J]. 分析試驗室,2008,27(7):27-28.

    NewHandheldStripAnalyzerforOn-SiteRapidDetectionofParalyticShellfishPoisoningBasedonaSmartphone*

    ZHONGLongjie1,2,WANZijian1,2,SUKaiqi1,PANYuxiang1,LIHongbo1,WANGPing1,2*

    (1.Biosensor National Special Laboratory,Key Laboratory for Biomedical Engineering of Education Ministry,Department of Biomedical Engineering,Zhejiang University,Hangzhou 310027,China;2.State Key Laboratory of Transducer Technology,Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200050,China)

    Saxitoxin(STX)are common marine toxins which can affect human health through food chain by accumulating in shellfishes. It is urgently required to have a convenient method for on-site detection of marine toxins to avoid the poisoning incidents that have occurred frequently. In this work,a handheld analysis meter system cooperating with competitive immunoassay strips is designed for rapid detection of STX. The smartphone is used as light detector,for image acquisition and data processing by a specific application. The 3D-printed portable accessory of smartphone is fixed for test strip. The method is simple and fast,with a detection limit of STX of 5.2 ng/mL,respectively. It can provide quantitative analysis of STX in the range of 5.2 ng/mL~100 ng/mL. Based on the smartphone system and biochemical analysis,it will be promising tool for on-site rapid detection for paralytic shellfish poisoning.

    handheld analyzer;mobile terminal;test strip;on-site rapid detection;paralytic shellfish poisoning

    10.3969/j.issn.1004-1699.2017.12.002

    項目來源:國家海洋公益專項項目(201305010)

    2017-05-10修改日期2017-07-18

    R318

    A

    1004-1699(2017)12-1787-07

    鐘隆潔(1994-),男,浙江大學(xué)生物醫(yī)學(xué)工程2016級碩士研究生,從事生物醫(yī)學(xué)工程與生物醫(yī)學(xué)傳感器研究,21615047@zju.edu.cn;

    王平(1962-),男,浙江大學(xué),教授,博士生導(dǎo)師,主要研究方向為傳感器與檢測技術(shù)、生物芯片與生物電子學(xué)、人工嗅覺與人工味覺等,cnpwang@zju.edu.cn。

    猜你喜歡
    檢測
    QC 檢測
    “不等式”檢測題
    “一元一次不等式”檢測題
    “一元一次不等式組”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    “角”檢測題
    “有理數(shù)的乘除法”檢測題
    “有理數(shù)”檢測題
    “角”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    欧美日本中文国产一区发布| netflix在线观看网站| 亚洲 国产 在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 宅男免费午夜| 中文字幕制服av| 国产高清国产精品国产三级| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲美女黄片视频| 久久精品国产综合久久久| 大香蕉久久成人网| 午夜福利,免费看| 精品高清国产在线一区| 中文字幕人妻熟女乱码| 欧美黄色片欧美黄色片| 少妇 在线观看| 女人精品久久久久毛片| 国产一区二区三区综合在线观看| 日本黄色视频三级网站网址 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 人人妻人人澡人人看| 国产不卡av网站在线观看| 久久久精品区二区三区| 人人澡人人妻人| 欧美乱妇无乱码| 精品乱码久久久久久99久播| 在线 av 中文字幕| 热99re8久久精品国产| 成在线人永久免费视频| 亚洲精品国产区一区二| 成人影院久久| 黄片大片在线免费观看| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 老司机福利观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 国产在线一区二区三区精| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲黑人精品在线| 免费在线观看完整版高清| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 超色免费av| 成人免费观看视频高清| 国产野战对白在线观看| 在线观看66精品国产| 色综合欧美亚洲国产小说| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品粉嫩美女一区| 一个人免费看片子| 黄色成人免费大全| 免费av中文字幕在线| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲精品在线观看二区| 午夜激情av网站| 中文字幕av电影在线播放| 一级片'在线观看视频| 制服诱惑二区| 精品免费久久久久久久清纯 | 亚洲 欧美一区二区三区| bbb黄色大片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 精品乱码久久久久久99久播| 国产一区有黄有色的免费视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 嫩草影视91久久| 伦理电影免费视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 成人三级做爰电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大香蕉久久网| 午夜福利乱码中文字幕| 国产成人系列免费观看| 国产亚洲一区二区精品| 一本大道久久a久久精品| 看免费av毛片| 高清av免费在线| 最黄视频免费看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 日韩三级视频一区二区三区| 日韩欧美国产一区二区入口| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲av片天天在线观看| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲成a人片在线一区二区| 超色免费av| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 又紧又爽又黄一区二区| 男女高潮啪啪啪动态图| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 男女午夜视频在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲午夜理论影院| 91大片在线观看| 日韩大片免费观看网站| 国产麻豆69| 18在线观看网站| 国产男女超爽视频在线观看| 一区二区日韩欧美中文字幕| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 手机成人av网站| 9191精品国产免费久久| 久久午夜综合久久蜜桃| 2018国产大陆天天弄谢| 三级毛片av免费| 日韩大码丰满熟妇| 黄频高清免费视频| 国产欧美亚洲国产| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲三区欧美一区| 国产精品久久久久成人av| 最新美女视频免费是黄的| 亚洲免费av在线视频| 久久午夜亚洲精品久久| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 成年人午夜在线观看视频| 国产成人av激情在线播放| 精品久久蜜臀av无| 男女免费视频国产| 亚洲精品在线美女| 好男人电影高清在线观看| 亚洲国产欧美网| 一级毛片精品| 视频区图区小说| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产日韩欧美亚洲二区| 麻豆成人av在线观看| 精品卡一卡二卡四卡免费| 色综合婷婷激情| 国产成人av激情在线播放| 免费在线观看日本一区| 中文字幕av电影在线播放| 精品久久久精品久久久| www日本在线高清视频| 国产精品久久久久久精品电影小说| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产1区2区3区精品| 我的亚洲天堂| 制服人妻中文乱码| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 中文字幕色久视频| 成人18禁在线播放| 国产男女内射视频| 精品国产一区二区久久| 老司机福利观看| 交换朋友夫妻互换小说| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 欧美激情高清一区二区三区| www.999成人在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 天天影视国产精品| 日韩成人在线观看一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 国产亚洲av高清不卡| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲欧美一区二区三区久久| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 日本一区二区免费在线视频| 桃红色精品国产亚洲av| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久精品人人爽人人爽视色| 久久中文看片网| 午夜福利一区二区在线看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美在线黄色| 自线自在国产av| 大型黄色视频在线免费观看| 天堂俺去俺来也www色官网| www日本在线高清视频| netflix在线观看网站| 丁香六月欧美| 精品少妇久久久久久888优播| 国产亚洲欧美精品永久| 免费不卡黄色视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 免费看十八禁软件| 一级片免费观看大全| 亚洲黑人精品在线| 午夜福利在线观看吧| 国产一区二区三区综合在线观看| 捣出白浆h1v1| videosex国产| 99精品欧美一区二区三区四区| 成年动漫av网址| 免费少妇av软件| 国产不卡一卡二| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲精品在线美女| 亚洲熟女毛片儿| 丝袜在线中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费少妇av软件| 日本五十路高清| 在线 av 中文字幕| netflix在线观看网站| 国产av国产精品国产| 窝窝影院91人妻| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美国产精品一级二级三级| √禁漫天堂资源中文www| 波多野结衣一区麻豆| 69精品国产乱码久久久| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 又大又爽又粗| 久久人妻熟女aⅴ| 日本a在线网址| 国产伦人伦偷精品视频| 99在线人妻在线中文字幕 | 午夜福利在线免费观看网站| 精品一品国产午夜福利视频| 国产精品一区二区在线不卡| 大香蕉久久成人网| 一个人免费在线观看的高清视频| 午夜福利免费观看在线| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品国产av在线观看| 国产精品二区激情视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 一进一出抽搐动态| 青青草视频在线视频观看| 美女国产高潮福利片在线看| 美女午夜性视频免费| 日韩人妻精品一区2区三区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 大型黄色视频在线免费观看| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美精品一区二区大全| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 老熟女久久久| 午夜福利在线免费观看网站| 国产熟女午夜一区二区三区| svipshipincom国产片| 久久久久网色| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲精品自拍成人| 最近最新中文字幕大全电影3 | 无限看片的www在线观看| 99re在线观看精品视频| 国产黄色免费在线视频| 久久热在线av| 丝袜在线中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99| 色婷婷av一区二区三区视频| 在线 av 中文字幕| 日韩欧美三级三区| 99香蕉大伊视频| 美国免费a级毛片| 免费少妇av软件| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 下体分泌物呈黄色| 亚洲中文av在线| 国产男女内射视频| 老司机靠b影院| 99国产综合亚洲精品| 高清av免费在线| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲人成电影观看| 国产精品1区2区在线观看. | 成人黄色视频免费在线看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲av第一区精品v没综合| 一级毛片精品| 啦啦啦 在线观看视频| 国产人伦9x9x在线观看| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲成国产人片在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩有码中文字幕| 老熟妇仑乱视频hdxx| 久久精品91无色码中文字幕| 水蜜桃什么品种好| 在线看a的网站| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲av电影在线进入| 看免费av毛片| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 国产成人免费观看mmmm| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲天堂av无毛| 国产精品亚洲一级av第二区| 黄频高清免费视频| 国产精品久久久久成人av| 久久久国产精品麻豆| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 夫妻午夜视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 99国产精品一区二区三区| 午夜福利在线免费观看网站| 黄片播放在线免费| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 99精品久久久久人妻精品| 中文字幕高清在线视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产精品一区二区免费欧美| 日本欧美视频一区| 一个人免费看片子| 日韩欧美免费精品| 成人三级做爰电影| 欧美日韩亚洲高清精品| 大型av网站在线播放| 国产精品成人在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲色图综合在线观看| av天堂在线播放| 久久精品国产亚洲av高清一级| 久久久精品94久久精品| 飞空精品影院首页| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 一级毛片电影观看| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 久久久久久久精品吃奶| 国产在视频线精品| 亚洲第一青青草原| 欧美黑人精品巨大| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 午夜福利视频精品| 好男人电影高清在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美一级毛片孕妇| 97在线人人人人妻| 国产黄色免费在线视频| 99国产精品99久久久久| av视频免费观看在线观看| 女人久久www免费人成看片| 男女下面插进去视频免费观看| 伦理电影免费视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| av超薄肉色丝袜交足视频| 免费在线观看日本一区| 在线观看免费视频网站a站| 99热网站在线观看| 一级黄色大片毛片| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 久久影院123| 日韩精品免费视频一区二区三区| a在线观看视频网站| 中文字幕av电影在线播放| 欧美在线黄色| 国产精品av久久久久免费| 久久 成人 亚洲| 国产高清激情床上av| 日韩大码丰满熟妇| 男男h啪啪无遮挡| 啦啦啦免费观看视频1| 首页视频小说图片口味搜索| 一区二区三区激情视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品熟女少妇八av免费久了| 麻豆成人av在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 老司机福利观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品免费久久久久久久清纯 | 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 99精品久久久久人妻精品| 欧美精品啪啪一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 老司机午夜福利在线观看视频 | 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久久精品94久久精品| 久久人人97超碰香蕉20202| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久人妻av系列| 美女视频免费永久观看网站| 一区二区三区精品91| 欧美日韩av久久| 成人免费观看视频高清| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 无遮挡黄片免费观看| 久久免费观看电影| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 中文字幕最新亚洲高清| 91成人精品电影| 在线观看免费日韩欧美大片| 高清欧美精品videossex| 成人亚洲精品一区在线观看| 在线播放国产精品三级| 亚洲伊人色综图| 国产黄频视频在线观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 国产一区二区三区综合在线观看| 国产精品 欧美亚洲| tube8黄色片| 视频区图区小说| 999久久久精品免费观看国产| 最近最新中文字幕大全免费视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 丁香欧美五月| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 国产av精品麻豆| 男女高潮啪啪啪动态图| 国产不卡一卡二| av福利片在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 深夜精品福利| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 一区福利在线观看| 国产97色在线日韩免费| 麻豆乱淫一区二区| 在线看a的网站| 精品卡一卡二卡四卡免费| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美国产精品一级二级三级| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99国产极品粉嫩在线观看| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 丁香六月欧美| av欧美777| 桃花免费在线播放| 男人舔女人的私密视频| 亚洲五月婷婷丁香| 色老头精品视频在线观看| 亚洲九九香蕉| 热re99久久国产66热| kizo精华| 色综合欧美亚洲国产小说| 中文字幕制服av| 久久人妻熟女aⅴ| 国产成+人综合+亚洲专区| 岛国毛片在线播放| 久久热在线av| 亚洲第一av免费看| 亚洲熟女精品中文字幕| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲综合色网址| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品熟女久久久久浪| 91av网站免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久久精品免费免费高清| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品久久电影中文字幕 | 一区福利在线观看| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品亚洲成国产av| 女性被躁到高潮视频| 捣出白浆h1v1| 大片电影免费在线观看免费| 蜜桃在线观看..| 国产av国产精品国产| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 精品亚洲成国产av| 一级毛片电影观看| 大香蕉久久网| 老司机亚洲免费影院| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 自线自在国产av| 色综合欧美亚洲国产小说| 亚洲精品一二三| 久久国产亚洲av麻豆专区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久国产精品影院| 视频区图区小说| 精品一区二区三卡| www.精华液| av视频免费观看在线观看| 免费av中文字幕在线| 国产真人三级小视频在线观看| 国产一区二区在线观看av| 午夜视频精品福利| 一区在线观看完整版| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产老妇伦熟女老妇高清| 黄频高清免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 9色porny在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲欧洲日产国产| 久热这里只有精品99| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 99久久精品国产亚洲精品| 午夜免费成人在线视频| 日本vs欧美在线观看视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 黄色 视频免费看| 久久国产精品大桥未久av| 色综合婷婷激情| 亚洲第一青青草原| 国产99久久九九免费精品| 免费高清在线观看日韩| 99国产精品99久久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 搡老乐熟女国产| 久久亚洲精品不卡| 一进一出好大好爽视频| 多毛熟女@视频| 人妻 亚洲 视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 色视频在线一区二区三区| 欧美午夜高清在线| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 考比视频在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 午夜福利一区二区在线看| 99国产精品99久久久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久精品国产a三级三级三级| 国产精品 欧美亚洲| 性高湖久久久久久久久免费观看| 亚洲一区中文字幕在线| 操出白浆在线播放| 精品国产一区二区三区四区第35| 国精品久久久久久国模美| 69av精品久久久久久 | 日韩中文字幕视频在线看片| 99re6热这里在线精品视频| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲美女黄片视频| 亚洲综合色网址| 国产av一区二区精品久久| 老司机福利观看| 久久狼人影院| 国产精品 欧美亚洲| 国产欧美日韩一区二区三| 黄色丝袜av网址大全| 午夜福利,免费看| 精品国内亚洲2022精品成人 | 大型av网站在线播放| 久久久久久久大尺度免费视频| 欧美另类亚洲清纯唯美| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品成人av观看孕妇| 操美女的视频在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 久久香蕉激情| 人妻 亚洲 视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费黄频网站在线观看国产| 精品少妇久久久久久888优播| 69av精品久久久久久 | 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 一级黄色大片毛片| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 女性被躁到高潮视频| 日本一区二区免费在线视频| 国产精品国产av在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美成狂野欧美在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 91精品国产国语对白视频| 视频在线观看一区二区三区| 免费黄频网站在线观看国产| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产成人精品无人区| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 男女高潮啪啪啪动态图| 丝袜美腿诱惑在线| 精品国产亚洲在线| 高清av免费在线| 精品久久久久久久毛片微露脸| 国产视频一区二区在线看| 一区二区av电影网| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产精品国产高清国产av | 热re99久久国产66热| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 天天影视国产精品| 色视频在线一区二区三区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 97在线人人人人妻| 亚洲精品久久午夜乱码| 男女边摸边吃奶| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲情色 制服丝袜| 国产成人精品无人区| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久ye,这里只有精品| 亚洲精品中文字幕一二三四区 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 捣出白浆h1v1| 少妇 在线观看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产免费现黄频在线看| 热re99久久精品国产66热6| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 午夜福利在线免费观看网站| 欧美日韩黄片免|