化學(xué)發(fā)光免疫法在甲胎蛋白患者中的檢測(cè)效果及對(duì)結(jié)果的影響研究

鐘燕

（上海市普陀區(qū)曹楊街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，上海 200062）

化學(xué)發(fā)光免疫法在甲胎蛋白患者中的檢測(cè)效果及對(duì)結(jié)果的影響研究

鐘燕

（上海市普陀區(qū)曹楊街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心檢驗(yàn)科，上海 200062）

目的探究化學(xué)發(fā)光免疫法在甲胎蛋白患者中的檢測(cè)效果及對(duì)結(jié)果的影響。方法使用化學(xué)免疫自動(dòng)分析儀器對(duì)含有甲胎蛋白的血清進(jìn)行檢測(cè)，此過(guò)程中要開(kāi)展測(cè)量范圍驗(yàn)證與最大可允許稀釋度兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)，建立科學(xué)的可報(bào)告范圍，服務(wù)于臨床檢測(cè)工作。結(jié)果測(cè)量范圍為每毫升0.00 mg-912 mg，最大允許稀釋度為1:50，實(shí)驗(yàn)測(cè)量值均值基本上符合分析儀靈敏度說(shuō)明的數(shù)據(jù)。結(jié)論臨床檢驗(yàn)醫(yī)師采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)甲胎蛋白，可準(zhǔn)確測(cè)定甲胎蛋白的測(cè)定范圍及最大可允許的稀釋度，為建立臨床報(bào)告范圍提供參考。

化學(xué)發(fā)光免疫法；甲胎蛋白；檢測(cè)效果

近幾年化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)飛速發(fā)展，因其簡(jiǎn)便、快速、無(wú)污染、自動(dòng)化水平高等特點(diǎn)被廣泛應(yīng)用于社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心。腫瘤標(biāo)志物的最小濃度具有十分重要的意義，嚴(yán)重影響著臨床病情的判斷[1]，本文以甲胎蛋白為例，以社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心的就診患者的具體情況對(duì)化學(xué)發(fā)光免疫法在甲胎蛋白（AFP）患者中的檢測(cè)效果及對(duì)結(jié)果的影響進(jìn)行研究分析，對(duì)廠家聲明的全自動(dòng)發(fā)光儀的檢驗(yàn)底限（LLD），進(jìn)行驗(yàn)證并建立對(duì)定量報(bào)告具有重要意義的生物檢測(cè)（BLD）及功能靈敏度（FS），現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 該實(shí)驗(yàn)研究所用的檢驗(yàn)儀器為貝克曼ACCESS II全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，此外還包括配套校準(zhǔn)物質(zhì)、AFP試劑和質(zhì)控產(chǎn)品。將AFP配套稀釋液作為空白樣品，低濃度校準(zhǔn)品作為原始樣品。用空白樣品對(duì)原始樣品做系列稀釋（濃度依次為1.06 ng/mL、1.32 ng/mL、1.76 ng/mL、2.65 ng/mL、3.53 ng/mL、5.29 ng/mL），若檢測(cè)結(jié)果顯示低濃度樣品比預(yù)期檢測(cè)限度低，則將這些系列樣品做為檢測(cè)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀靈敏度的實(shí)驗(yàn)樣品。

1.2 方法 實(shí)驗(yàn)操作前先按作業(yè)指示書(shū)對(duì)儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)、校檢和質(zhì)量監(jiān)控。并完成樣品準(zhǔn)備，空白樣品批內(nèi)重復(fù)測(cè)定10次；稀釋后的系列濃度實(shí)驗(yàn)樣品日間重復(fù)測(cè)定10次。

開(kāi)展測(cè)量范圍驗(yàn)證時(shí)，首先將制備好的空白樣品置于發(fā)光儀上，實(shí)施測(cè)定并重復(fù)4次，確保每一次的實(shí)際測(cè)得值都能被準(zhǔn)確讀取并記錄，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將其與預(yù)期值進(jìn)行比較，分析測(cè)量范圍[2]。在測(cè)量最大稀釋度時(shí)，將預(yù)先準(zhǔn)備好的實(shí)驗(yàn)樣品置于發(fā)光儀上進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)時(shí)記錄監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，并將其與稀釋后的預(yù)期值比較。

1.3 觀察指標(biāo) LDL是指樣品單次檢測(cè)達(dá)標(biāo)時(shí)對(duì)映的分析物量。按照國(guó)際純粹和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)的規(guī)定，測(cè)量值平均水平為99.7%時(shí)，可按照規(guī)定的公式計(jì)算其檢測(cè)底限。BLD確定所采用的方式為L(zhǎng)DL加3倍檢測(cè)底限樣本標(biāo)準(zhǔn)差，確定檢測(cè)系統(tǒng)可定量報(bào)告分析物的最低濃度。在系列的濃度測(cè)定時(shí)，以AFP、LLD的光強(qiáng)度值（RLUs）為界，將某濃度下所測(cè)的光強(qiáng)度值均值減去三倍，并將樣品標(biāo)準(zhǔn)差的光強(qiáng)度值仍然大于并和LLD的光量值最接近的對(duì)應(yīng)濃度定為該濃度的BLD。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

測(cè)量范圍為每毫升0.00 mg-912 mg，最大允許稀釋度為1:50，實(shí)驗(yàn)測(cè)量值均值臨床醫(yī)師可以此為根據(jù)設(shè)置AFP的報(bào)告范圍。基本上符合分析儀靈敏度說(shuō)明的數(shù)據(jù)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 AFP定量分析靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

AFP屬于糖蛋白，主要在卵黃囊、胚胎肝、胎兒胃腸道等部位合成。它在血漿蛋白總量中占據(jù)比例會(huì)在胎兒發(fā)育到13周時(shí)達(dá)到1/3，在妊娠30周時(shí)達(dá)到最大值，此后呈逐漸降低趨勢(shì)，周歲時(shí)即可達(dá)到成人的水平。化學(xué)發(fā)光的原理是激發(fā)態(tài)分子恢復(fù)到基態(tài)時(shí)，以光的形式釋放而產(chǎn)生的發(fā)光現(xiàn)象[3]。用發(fā)光劑直接標(biāo)記抗體的免疫分析法的主要操作是利用化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)作為抗原抗體反應(yīng)的指示系統(tǒng)，標(biāo)記所選用的試劑具有穩(wěn)定和無(wú)毒性的特點(diǎn)，不僅不會(huì)污染環(huán)境，也不會(huì)損害到工作人員的身體健康。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，可以直接處理并檢測(cè)樣品，檢驗(yàn)不受時(shí)間、空間的限制，出結(jié)果所需的時(shí)間大大縮短，顯著提高了工作效率，能充分滿足臨床的需求[4]。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法靈敏度高，有效期長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境和工作人員負(fù)面影響十分輕微。臨床檢驗(yàn)醫(yī)師采用化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP，可準(zhǔn)確測(cè)定AFP的測(cè)定范圍及最大可允許的稀釋度，為建立臨床報(bào)告范圍提供參考，臨床推廣運(yùn)用是大勢(shì)所趨。

[1] 廖妮. 基于自增強(qiáng)Ru(II)復(fù)合物構(gòu)建的新型電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器檢測(cè)甲胎蛋白[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2016, 35(7):832-838.

[2] 郭俊美. 磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法測(cè)定甲胎蛋白[J]. 科研, 2016(5):00269.

[3] 鈔雪鵬, 袁姍. 不同免疫分析法檢測(cè)甲胎蛋白在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床意義分析[J]. 醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐, 2017, 30(5):742-743.

[4] 肖俐霞, 林冠峰, 陳少瑯, 等. 人附睪分泌蛋白4光激化學(xué)發(fā)光免疫分析法的建立[J]. 熱帶醫(yī)學(xué)雜志, 2015, 15(5):592-595.