GAS5基因插入/缺失多態(tài)性與甲狀腺濾泡癌易感性的相關(guān)性研究

王會(huì)平 陳 浩 朱占勝

1徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004 2徐州醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系 江蘇省徐州市 221004 3徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004

GAS5基因插入/缺失多態(tài)性與甲狀腺濾泡癌易感性的相關(guān)性研究

王會(huì)平1陳 浩2朱占勝3

1徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院遺傳學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004 2徐州醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)系 江蘇省徐州市 221004 3徐州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室 江蘇省徐州市 221004

目的：研究在中國(guó)徐州地區(qū)漢族人群中，GAS5基因中的一個(gè)5-bp插入/缺失多態(tài)性和甲狀腺濾泡癌（FTC）易感性的相關(guān)性。方法：應(yīng)用PCR和非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合銀染法檢測(cè)204例FTC患者和232例健康對(duì)照者插入/缺失基因型頻率，經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析探討其與FTC的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果：選擇的患者和健康對(duì)照組人群在性別、年齡、方面的頻率分布無(wú)顯著性差異,吸煙和飲酒在FTC患者中比例較大；基因分型結(jié)果顯示：患者中插入/插入型(Ins/Ins) ，插入/缺失型(Ins/Del)和缺失/缺失型(Del/Del)基因型頻率分別為0.363，0.500和0.137，健康對(duì)照組分別為0.478，0.440和0.082?；蛐蜑镮ns/Del和Del/Del的個(gè)體CRC易感性明顯增高（OR=1.51，95%CI: 1.02-2.22，P=0.048）（OR=2.21，95%CI: 1.21-4.85，P=0.022）。結(jié)論：GAS5基因5-bp插入/缺失多態(tài)性與FTC發(fā)生存在關(guān)聯(lián)，這一結(jié)果對(duì)FTC早期診斷具有重要意義。

GAS5；插入/缺失多態(tài)性；甲狀腺濾泡癌

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，近年來(lái)甲狀腺癌的發(fā)病率來(lái)呈現(xiàn)爆發(fā)式上升，給家庭和社會(huì)帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)[1]。在臨床實(shí)踐中，甲狀腺濾泡癌（FTC）在甲狀腺癌組織學(xué)分類(lèi)中排第二位，占所有甲狀腺癌的15%以上，惡性程度高，預(yù)后差[2]。因此，對(duì)FTC的預(yù)防和預(yù)測(cè)稱(chēng)為關(guān)注的焦點(diǎn)。精準(zhǔn)醫(yī)療的興起，可以有效地幫助潛在患者防止FTC的發(fā)生[3]。然而，精準(zhǔn)醫(yī)療的關(guān)鍵點(diǎn)是可疑基因及遺傳多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)和鑒定，只有發(fā)現(xiàn)盡量多的遺傳標(biāo)記，才能做到盡可能的準(zhǔn)確判斷。本課題組多年來(lái)致力于基因多態(tài)性尤其是插入缺失多態(tài)性與腫瘤易感性的研究，在最近的研究中，課題組首次發(fā)現(xiàn)位于非編碼基因GAS5區(qū)域內(nèi)的一個(gè)5-bp插入/缺失多態(tài)性（rs145204276）與FTC易感性存在關(guān)聯(lián)。目前尚無(wú)針對(duì)GAS5多態(tài)性和FTC易感性相關(guān)性的類(lèi)似報(bào)道，這一研究應(yīng)當(dāng)對(duì)于FTC的預(yù)測(cè)和預(yù)防，維持健康具有重要意義。在本研究中，課題組檢測(cè)了徐州地區(qū)FTC癌患者和健康對(duì)照人群的GAS5基因插入/缺失多態(tài)性，分析其與FTC易感性的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

FTC患者204例，男55例，女149例，年齡44.7 ± 7.5歲，無(wú)濾泡性腺瘤，甲狀腺腫病史。收集2015年5月至2017年7月在徐州市二院入院治療的FTC患者，患者符合我國(guó)中華醫(yī)學(xué)會(huì)2012年關(guān)于甲狀腺癌診斷指南標(biāo)準(zhǔn)。健康對(duì)照232例，選自健康體檢人群的隨機(jī)個(gè)體，男65例，女167例，年齡43.2 ± 8.2歲，無(wú)濾泡性腺瘤，甲狀腺腫病史。所有研究對(duì)象均為自然人群、漢族且無(wú)血緣關(guān)系。

表1：病例組和對(duì)照組的臨床資料

1.2 標(biāo)本收集

受試對(duì)象均靜脈抽取全血1.5 mL，課題組采用DNA提取試劑盒(ThermoFisher)從全血標(biāo)本抽提基因組DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 基因分型

采用按照陶瑞旸等人所述方法[4]進(jìn)行基因分型。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

采用卡方檢驗(yàn)比較臨床資料差別；卡方檢驗(yàn)比較病例組和對(duì)照組基因型及等位基因頻率差別；遺傳多態(tài)性與CRC易感性的關(guān)聯(lián)強(qiáng)度分析采用邏輯回歸方法，采用校正臨床資料諸因素后的優(yōu)勢(shì)比(odds ratio，OR)和95%置信區(qū)間(con fi dence interval，CI)表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果以P＜0.05為顯著性標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 病例組與對(duì)照組的一般特征

204例FTC樣本和232例健康對(duì)照樣本人口學(xué)資料情況比較(見(jiàn)表1)，從表中可以看出二者在性別和年齡吸煙和飲酒情況方面的頻率分布無(wú)顯著性差異。吸煙和飲酒情況方面的頻率分布存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，其中吸煙患者在病例組中較多（P＜0.001）。

2.2 rs145204276基因座分型結(jié)果

經(jīng)凝膠電泳分型，存在插入/缺失（Ins/Del），插入/插入Ins/Ins），缺失/缺失（Del/Del）三種基因型。對(duì)照組基因座基因型分布頻率 Phwe＞0.05。

2.3 GAS5基因插入缺失多態(tài)頻率分布

研究中插入缺失多態(tài)性頻率分布見(jiàn)表2， CRC組缺失型純合子頻率為13.7%，明顯高于正常對(duì)照組的頻率8.2%（P＜0.01）。

表2：GAS5基因插入缺失多態(tài)基因型分布

2.4 多態(tài)性與CRC易感性分析

進(jìn)行邏輯回歸分析（調(diào)整諸臨床資料因素），數(shù)據(jù)表明基因型為雜合子和缺失型純合子的患者CRC易感性增高 明 顯（OR=1.52，95%CI∶ 1.02-2.22，P=0.048）（OR=2.21，95%CI∶ 1.21-4.85，P=0.022），即在95%置信區(qū)間內(nèi)，與插入型純合子相比教，帶有雜合子個(gè)體患FTC的風(fēng)險(xiǎn)高出52%（P=0.048），帶有缺失型純合子個(gè)體患FTC的風(fēng)險(xiǎn)性是帶插入型純合子個(gè)體的2.21倍（P=0.022）。邏輯回歸結(jié)果提示GAS5基因遺傳多態(tài)性與FTC患病風(fēng)險(xiǎn)之間明顯相關(guān)，課題組由此認(rèn)為帶有缺失型等位基因是FTC的潛在致病因素。

3 討論

GAS5基因5-bp插入/缺失多態(tài)有可能影響該基因表達(dá)，而GAS5在肺癌[5]、腎癌[6]等惡性腫瘤中起抑瘤作用，課題組認(rèn)為該多態(tài)可以下調(diào)GAS5蛋白表達(dá)，抑瘤作用下降，增加FTC發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

此前，已有相關(guān)報(bào)道證實(shí)了該多態(tài)與肝細(xì)胞肝癌等多種腫瘤相關(guān)[7]，但是缺乏與FTC的相關(guān)性報(bào)道。本研究首次發(fā)現(xiàn)了這一相關(guān)性，并且鑒定缺失型等位基因具有致病性，有助于FTC的早期預(yù)防及機(jī)制的深入研究。

本研究首次發(fā)現(xiàn)中國(guó)漢族人群中GAS5基因區(qū)域插入/缺失多態(tài)與FTC易感性之間存在顯著關(guān)聯(lián)，但條件有限，調(diào)查范圍僅局限在徐州地區(qū)的漢族人群，且未進(jìn)行組織蛋白表達(dá)情況分析，得出更加明確的結(jié)論還有待于更大樣本量和其他不同人群中相關(guān)實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證。

[1]王卓穎,吳毅.分化型甲狀腺癌的診治指南解讀[J].外科理論與實(shí)踐,2014(03):185-188.

[2]陳禎勇.分化型甲狀腺癌外科治療的研究進(jìn)展.當(dāng)代醫(yī)學(xué),2013;05-18(02):12-13.

[3]陳健,江亮.精確病理診斷在甲狀腺癌精準(zhǔn)醫(yī)療中的意義.中國(guó)腫瘤臨床,2017;44(04):181-185.

[4]陶瑞旸.LncRNA GAS5啟動(dòng)子區(qū)插入/缺失多態(tài)與肝細(xì)胞肝癌易感性關(guān)聯(lián)研究及功能分析.蘇州大學(xué),2016.

[5]Shi X,Sun M,Liu H,et al.A critical role for the long noncoding RNA GAS5 in proliferation and apoptosis in non-small-cell lung cancer.MolCarcinog,2015;54 Suppl1(S1):E1.

[6]Qiao H,Gao W,Huo J,et al.Long non-coding RNA GAS5 functions as a tumor suppressor in renal cell carcinoma. Asian Pacific Journal of Cancer Prevention,2013,14(02):1077.

[7]Tao R,Hu S,Wang S,et al.Association between indel polymorphism in the promoter region of lncRNA GAS5 and the risk of hepatocellular carcinoma. Carc inogenesis,2015(36):1136-1143.

徐州醫(yī)科大學(xué)優(yōu)秀人才科研啟動(dòng)基金（D2015018，D2015019）。

（通訊作者：朱占勝）

王會(huì)平（1984-），女，博士。講師。研究方向?yàn)榧谞钕侔┑念A(yù)防與治療。

朱占勝（1980-），男，博士。講師。研究方向?yàn)榧谞钕侔┑念A(yù)防與治療。