八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及臨床研究

張英芝，勞佩維，朱淼華

(寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，浙江 寧波 315020)

·基礎(chǔ)與臨床研究·

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)及臨床研究

張英芝，勞佩維，朱淼華

(寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，浙江 寧波 315020)

目的：探討八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(OCT4)在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)情況及其臨床意義。方法采用免疫組化方法檢測OCT4蛋白在60例子宮內(nèi)膜異位癥患者的異位內(nèi)膜組織及在位內(nèi)膜組織中、50例正常在位子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況。結(jié)果OCT4蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥的異位內(nèi)膜組織中和正常在位內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率分別是81.7%和42.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AFS分期為Ⅲ-Ⅳ期的子宮內(nèi)膜異位癥的異位內(nèi)膜組織中的OCT4蛋白的陽性表達(dá)率高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)。結(jié)論OCT4在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用，且OCT4隨臨床分期的加重而表達(dá)量增加，表明OCT4在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)展中有促進(jìn)作用。

子宮內(nèi)膜異位癥； OCT4； 異位子宮內(nèi)膜； 免疫組化法

子宮內(nèi)膜組織(腺體和間質(zhì))出現(xiàn)在子宮體以外的部位時(shí)，稱為子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis，EMT)[1]。異位子宮內(nèi)膜來源至今尚未闡明，最近研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與子宮內(nèi)膜組織中干細(xì)胞的異?；钚杂嘘P(guān)[2]。作為干細(xì)胞相關(guān)基因的八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(Octamer-Binding Transcription Factor 4，OCT4)在子宮內(nèi)膜癌組織中的異常表達(dá)已經(jīng)有較多的研究[3]，但是，OCT4是否與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生相關(guān)，在子宮內(nèi)膜異位癥中OCT4的表達(dá)情況等研究報(bào)道較為少見。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，檢測OCT4蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥組織中的表達(dá)情況，探討OCT4在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生發(fā)展中的作用以及與臨床分期的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 資料來源

選取2016年6-12月期間在寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院婦一科行腹腔鏡手術(shù)、病理證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥的患者60例，按美國生育學(xué)會(huì)(AFS)的“修正子宮內(nèi)膜異位癥分期法”[1]分期為Ⅰ-Ⅱ期的27例，Ⅲ-Ⅳ期的33例，每例患者均取異位內(nèi)膜組織和在位內(nèi)膜組織作為標(biāo)本。另選同期因?qū)m腔粘連行宮腔鏡手術(shù)患者的正常在位子宮內(nèi)膜組織50例作為對照組。所有入選的患者術(shù)前半年內(nèi)均未行激素類治療，未放置過宮內(nèi)節(jié)育器，子宮內(nèi)膜無其他病變，并取得患者知情同意。所有標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和儀器

兔抗人OCT4多克隆抗體(美國eBioScience公司)；SABC 免疫組化試劑盒及DAB顯色試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；PBS緩沖液(武漢博士德生物工程有限公司)；其他試劑及儀器由寧波市病理中心提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

所有標(biāo)本組織經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，石蠟包埋，制成4μm連續(xù)切片。采用免疫組織化學(xué)SABC法檢測組織中OCT4蛋白量，嚴(yán)格按照SABC試劑盒說明書進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)中均設(shè)陽性和陰性對照片，用PBS代替一抗處理的切片作為陰性對照，以試劑公司提供的陽性片作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判定

OCT4蛋白主要在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。切片中以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色，所有切片均由2名高級(jí)職稱病理醫(yī)師雙盲閱片。結(jié)果判定采用sinicrope改良法[4]，取4個(gè)高倍鏡視野計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞百分比<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；染色強(qiáng)度分級(jí)評分：0分，無染色；1分，弱染色；2分，中度染色；3分，強(qiáng)染色。根據(jù)2項(xiàng)得分相乘之積判斷陽性強(qiáng)度，0分為(-)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)。以乘積≤4分定義為陰性表達(dá)，>4分為陽性表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS17.0軟件處理，采用t檢驗(yàn)比較研究組和對照組的年齡、體重指數(shù)(BMI)及血清CA125的差異；用χ2檢驗(yàn)比較2組的痛經(jīng)情況以及不同組織、不同分期的內(nèi)膜組織中的OCT4蛋白的陽性表達(dá)率，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3組間兩兩比較取P<0.0167為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。

2 結(jié)果

2.1 研究對象一般情況的比較

研究組和對照組患者的一般情況比較見表1，2組患者在年齡、BMI方面無明顯差異，但研究組患者的痛經(jīng)發(fā)病率明顯高于對照組(P<0.05)，而且血清CA125水平也顯著升高(P<0.05)。

表1 研究對象的一般情況比較

2.2 組織中OCT4蛋白的表達(dá)

OCT4蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，在EMT患者的異位膜、在位內(nèi)膜以及對照組的子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)。不同組織中的OCT4蛋白的表達(dá)情況見表2，與對照組的子宮內(nèi)膜比較，EMT患者的異位內(nèi)膜中OCT4的陽性表達(dá)率明顯增高(χ2=18.54，P=0.000)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0167)。

表2 OCT4蛋白在不同組織中的表達(dá)情況

2.3 不同分期的異位內(nèi)膜組織中OCT4蛋白的表達(dá)

AFS分期為Ⅲ-Ⅳ期的EMT患者異位內(nèi)膜中OCT4蛋白的陽性表達(dá)高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)，見表3。

表3 不同AFS分期的EMT異位內(nèi)膜組織中 OCT4蛋白的表達(dá)

3 討論

八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子(OCT4)是近年來發(fā)現(xiàn)的一種轉(zhuǎn)錄因子，是胚胎干細(xì)胞維持自身更新及分化潛能的核心轉(zhuǎn)錄因子。在正常成體細(xì)胞及惡性腫瘤組織中OCT4的表達(dá)已有較多的報(bào)道。Padykula[5]提出人類子宮內(nèi)膜的強(qiáng)再生能力是由子宮內(nèi)膜干細(xì)胞調(diào)控的。在子宮內(nèi)膜組織中存在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞的祖細(xì)胞，而且發(fā)現(xiàn)OCT4也存在于子宮內(nèi)膜組織中。本文中檢測正常子宮內(nèi)膜組織中有OCT4的表達(dá)，與文獻(xiàn)相符。

近幾年研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生與子宮內(nèi)膜組織中干細(xì)胞的異常活性有關(guān)[2]。作為干細(xì)胞相關(guān)基因的OCT4，在子宮內(nèi)膜異位病灶的形成中發(fā)揮上調(diào)作用[6]。本文的研究結(jié)果顯示OCT4在EMT患者異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)明顯高于對照組內(nèi)膜組織，提示OCT4因其干細(xì)胞特性在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮一定作用。另外，在子宮內(nèi)膜異位癥臨床分期期別越高的組織中OCT4的表達(dá)量越大，隨病情發(fā)展而增加，提示了OCT4對子宮內(nèi)膜異位癥的促進(jìn)作用。

CA125是目前比較公認(rèn)的卵巢上皮性癌的檢測指標(biāo)，合并有卵巢內(nèi)異囊腫的卵巢癌患者的血清CA125值明顯升高。有研究表明，OCT4可促進(jìn)異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的自我更新及增強(qiáng)細(xì)胞生存能力，而且是促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制基礎(chǔ)[7]。本研究中，卵巢內(nèi)異癥患者的血清CA125水平明顯高于對照組，因此可推測OCT4在促進(jìn)EMT向卵巢癌轉(zhuǎn)變中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，子宮內(nèi)膜異位癥患者異位內(nèi)膜組織中OCT4蛋白的表達(dá)均顯著高于正常的子宮內(nèi)膜組織，提示OCT4在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮作用。且隨著臨床分期的加重，OCT4的表達(dá)量增加，表明OCT4對子宮內(nèi)膜異位癥的病情發(fā)展可能有促進(jìn)作用。這是OCT4對子宮內(nèi)膜異位癥作用的初步研究，并不能揭示OCT4在EMT發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制，仍需大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證實(shí)其在異位子宮內(nèi)膜組織中高度表達(dá)，及促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用。隨著對OCT4研究的不斷深入，也許可以為探討子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機(jī)制提供一條新的思路，為治療EMT帶來一種新的方法。

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ExpressionofOCT4anditsclinicalsignificanceinendometriosis

ZHANGYingzhi,LAOPeiwei,ZHUMiaohua

(The Affiliated Hospital of Ningbo University Medical School,Zhejiang 315020,China)

ObjectiveTo investigate the expression of OCT4 protein in endometriosis and its clinical significance.MethodOCT4 protein expression in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues obtained from 60 patients with endometriosis,and the normal endometrium tissues from 50 patients with intrauterine adhesion were detected by immunohistochemistry.ResultThe positive rates of OCT4 in ectopic endometrium tissues and eutopic endometrium tissues with endometriosis,and the normal endometrium tissues were 81.7%,63.3% and 42.0%, respectively (P<0.05).The positive rates of OCT4 in endometriotic tissues with AFS stage for Ⅲ-Ⅳ of endometriosis were significantly higher than that with Ⅰ-Ⅱ phase(P<0.05).ConclusionOCT4 correlates to the occurrence and progress of endometriosis. The expression of OCT4 were increased significantly with the clinical stage of the increase .OCT4 may play an important role in the development of endometriosis.

endometriosis; OCT4; ectopic endometrium; immunohisto chemistry

張英芝(1976-)，女，浙江金華人，碩士，副主任醫(yī)師。研究方向：婦科腫瘤及婦科內(nèi)鏡診療

R711.71

B

1672-0024(2017)06-0049-03