• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    斑海豹線粒體基因組序列分析及比較研究

    2017-12-18 03:32:54高祥剛鹿志創(chuàng)田甲申韓家波赫崇波宋新然
    水產科學 2017年4期
    關鍵詞:斑海豹遼東灣阿拉斯加

    高祥剛,鹿志創(chuàng),田甲申,韓家波,赫崇波,宋新然

    ( 1.遼寧省海洋水產科學研究院,遼寧省海洋水產分子生物學重點實驗室,遼寧 大連 116023; 2. 大連圣亞旅游控股股份有限公司,遼寧 大連 116023 )

    斑海豹線粒體基因組序列分析及比較研究

    高祥剛1,鹿志創(chuàng)1,田甲申1,韓家波1,赫崇波1,宋新然2

    ( 1.遼寧省海洋水產科學研究院,遼寧省海洋水產分子生物學重點實驗室,遼寧 大連 116023; 2. 大連圣亞旅游控股股份有限公司,遼寧 大連 116023 )

    本研究采用LA-PCR擴增和引物步移相結合的方法對我國遼東灣斑海豹的線粒體基因組全序列進行了測定,并完成了基因組成和系統(tǒng)發(fā)生學分析。遼東灣斑海豹線粒體基因組長為16 754 bp,其基因構成與其他海洋哺乳動物基本一致,包括37個基因(2個rRNA基因、22個tRNA基因和13個蛋白質編碼基因)和1個控制區(qū)。在其37個基因中,ND6、tRNAAla、tRNAAsn、tRNACys、tRNATyr、tRNASer(UCN)、tRNAGlu、tRNAPro位于L鏈上,其余均位于H鏈上。對我國遼東灣、韓國和美國阿拉斯加斑海豹線粒體基因組進行了比較分析,結果顯示,三者線粒體基因組長度略有不同,差異主要體現(xiàn)在以重復片段形式存在的控制區(qū)序列中。值得注意的是,在編碼區(qū)中,3個目標群體的線粒體ND5基因核苷酸差異最為顯著,共檢測到了18個突變位點,造成4處氨基酸序列變異。斑海豹線粒體基因組蛋白編碼基因的變異分析及海豹科系統(tǒng)進化分析結果顯示,我國遼東灣和韓國斑海豹的序列同源性顯著高于美國阿拉斯加斑海豹,說明遼東灣和韓國斑海豹很可能來自同一個種群。

    斑海豹;線粒體基因組;結構比較;系統(tǒng)進化

    線粒體DNA(mtDNA)是動物細胞核外唯一的遺傳物質,與核DNA相比,具有母系遺傳、分子結構簡單、進化速度快、無組內特異性等特點。目前mtDNA已成為研究物種起源與系統(tǒng)發(fā)生、近緣物種和種內群體間遺傳分化、物種鑒定、遺傳多樣性分析等的有力工具[1]。

    海豹是對鰭足亞目種海豹科動物的統(tǒng)稱,現(xiàn)存的海豹種類較多,目前共有10屬19種。斑海豹(Phocalargha)屬食肉目、犬形亞目、海豹科、斑海豹屬,主要分布于北太平洋的北部和西部海域及其沿岸和島嶼。斑海豹在我國主要分布于渤海和黃海海域,偶見于南海。是唯一能在我國海域繁殖的鰭腳類動物,屬于國家二類重點保護野生動物,也是黃、渤海生態(tài)系統(tǒng)健康狀況的重要指示生物,因而受到國內外學者的普遍重視[2-3]。

    筆者通過LA-PCR擴增和引物步移相結合的方法對我國遼東灣斑海豹的線粒體基因組全序列進行了測定,初步分析了斑海豹線粒體基因組序列的基本特征,探討了我國、韓國、美國阿拉斯加斑海豹線粒體基因組基因排列、蛋白質編碼基因和多態(tài)位點等。同時利用線粒體基因組蛋白編碼序列,分析了海豹科的系統(tǒng)分類關系。本研究對于海豹的遺傳分化與系統(tǒng)發(fā)生研究、物種鑒定、遺傳多樣性的保護等諸多方面提供寶貴的遺傳信息。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料和基因組DNA提取

    解剖盤錦雙臺河口救助的當年死亡斑海豹幼崽的肝臟,清洗后立即保存于-20 ℃冰柜中。采用常規(guī)酚氯仿法提取全基因組DNA[4],溶于TE緩沖液中,4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2 PCR擴增及序列測定

    參考韓國、美國阿拉斯加斑海豹(GenBank號分別為:FJ895151、NC_008430)線粒體基因組序列,應用FastPCR v3.6軟件設計引物COⅠ_F 和COⅠ_R。利用課題組已設計引物[5-6]COⅠ_F、COⅠ_R、L16274_F 、H34_R,形成引物組合(表1)L16274_F + COⅠ_R 、COⅠ_F + ND4L_R、 ND4L_F + H34_R進行遼東灣斑海豹的線粒體基因組Long-PCR擴增。反應條件和反應體系見表2。測序采用引物步移法進行雙向測通。因為PCR產物直接測序法不能準確讀出測序引物后面約50 bp長度的序列,所以在設計擴增片段的引物時,盡可能保證相鄰擴增片段之間包含80 bp以上的序列重疊,以保證測序后序列的準確性及正確拼接。由于在控制區(qū)測序時出現(xiàn)套峰現(xiàn)象,此段區(qū)域采用克隆后測序的方法。

    表1 用于擴增遼東灣斑海豹線粒體基因組的引物

    表2 遼東灣斑海豹線粒體基因組擴增的反應條件和反應體系

    1.3 序列分析、基因預測

    首先使用Chromas 2.4.1軟件打開和核實基因測序得到的峰圖,并用CONSED手工檢查以避免錯配[7]。利用DOGMA軟件對13個蛋白質編碼基因和2個核糖體RNA 的位置進行預測[8],與其他海豹屬物種的線粒體基因組比對后確定精確的起始位置。利用tRNAscan-SE 1.21軟件對轉運RNA及它們的二級結構特征進行預測[9]。

    1.4 斑海豹線粒體基因組的比較分析

    將所測得的遼東灣斑海豹mtDNA序列,應用Clustal 1.83和Mega 5.0生物信息學軟件,分別與韓國、美國阿拉斯加斑海豹線粒體基因組全序列進行比較分析,探討三者在蛋白編碼基因的氨基酸和核苷酸序列、tRNAs、rRNAs上的差異,以及在非編碼區(qū)的變異情況。

    1.5 海豹科線粒體基因組的系統(tǒng)進化

    對NCBI上已公布的海豹科的15個種、17條線粒體基因組DNA序列的13個蛋白編碼基因的氨基酸序列和核苷酸序列采用鄰接法分別構建系統(tǒng)關系樹。

    2 結 果

    2.1 遼東灣斑海豹線粒體基因組的組成

    將所測得的遼東灣斑海豹線粒體基因組全序列拼接完整后提交至GenBank(NCBI登錄號:KT818831),其長度為16 754 bp,呈現(xiàn)典型的海洋哺乳動物線粒體基因組的特點。即斑海豹線粒體基因組為環(huán)狀,由37個基因組成,其中的 13個蛋白質編碼基因包括:1個細胞色素b基因(CytB)、2個ATP酶亞基的基因(ATPase6, ATPase8)、3個細胞色素氧化酶亞基的基因(COⅠ,COⅡ,CO Ⅲ)和7個呼吸鏈NADH脫氫酶亞基的基因(ND1-6,ND4L);2個rRNA基因分別為1個12S rRNA和 1個16S rRNA;另外還有22個tRNA基因。

    在13個蛋白質編碼基因中,12個是由H 鏈編碼,僅ND6由L鏈編碼;在22個tRNA中,tRNAAla、tRNAAsn、tRNACys、tRNATyr、tRNASer(UCN)、tRNAGlu、tRNAPro的編碼基因位于L鏈上,其余則位于H 鏈上。

    2.2 與其他斑海豹的比較

    將所測得的中國遼東灣斑海豹線粒體基因組與韓國、美國阿拉斯加斑海豹線粒體基因組進行比較分析發(fā)現(xiàn),三者線粒體基因組長度略有不同,分別為16 754、16 728、16 701 bp,主要的變化出現(xiàn)在控制區(qū)(OH),OH長度分別為1316、1290、1264 bp。

    對上述3個線粒體基因組的37個基因分別進行了比較研究,在rRNA中,發(fā)現(xiàn)5個單核苷酸變異;在tRNA中,發(fā)現(xiàn)阿拉斯加斑海豹的tRNALeu出現(xiàn)1個堿基缺失,其他的tRNAPhe、tRNAAla、tRNATyr、tRNAThr等各有1個單核苷酸變異,除此之外的17個tRNA完全一致;13個蛋白質編碼基因中,均發(fā)現(xiàn)有核苷酸變異,其中8個基因(ATPase6、COⅠ、COⅡ、CytB、ND1、ND3、ND4、 ND4L)相對比較保守,其氨基酸序列在3個基因組中完全一致,5個基因出現(xiàn)氨基酸序列變化(表3),其中,ND5的核苷酸突變程度最大,總長1821 bp的核苷酸中有18個突變位點,變異率為0.99%,出現(xiàn)4個氨基酸序列突變。

    表3 斑海豹3個線粒體基因組蛋白編碼基因的突變比較分析

    2.3 海豹科線粒體基因組的系統(tǒng)進化

    以海洋哺乳動物的鯨目白鰭豚(Lipotesvexillifer,登錄號:NC_007629)、和海牛目儒艮(Dugongdugon,登錄號: NC_003314)作外群,根據(jù)鰭足亞目海豹科的2個亞科17條mtDNA序列,用鄰接法構建13個編碼蛋白的氨基酸序列系統(tǒng)關系樹(圖1),與最大似然法和最小進化法構建的系統(tǒng)樹基本一致。結果顯示遼東灣斑海豹首先和韓國斑海豹聚為一支,然后與阿拉斯加斑海豹聚為一支,3個斑海豹再與海豹亞科的其他海豹聚為一大支。僧海豹亞科的5個物種序列單獨聚為一大支。根據(jù)13個編碼蛋白的核苷酸與氨基酸序列構建的系統(tǒng)關系樹結果基本一致,并且均顯示遼東灣斑海豹與韓國斑海豹的關系較阿拉斯加斑海豹更近。

    圖1 基于13種線粒體蛋白質的氨基酸序列的鄰接法進化樹中國遼東灣斑海豹(KT818831)、韓國斑海豹(FJ895151)、美國阿拉斯加斑海豹(NC_008430)、港海豹(NC_001325)、環(huán)斑海豹(NC_008433)、貝加爾環(huán)海豹(NC_008432)、里海環(huán)斑海豹(NC_008431)、灰海豹(NC_001602)、鞍紋海豹(NC_008429)、帶紋海豹(NC_008428)、冠海豹(NC_008427)、髯海豹(NC_008426)、夏威夷僧海豹(NC_008421)、食蟹海豹(NC_008423)、韋德爾海豹(NC_008424)、豹形海豹(NC_008422)、南象海豹(NC_008422)、白鰭豚(NC_007629)和儒艮(NC_003314).

    3 討 論

    3.1 斑海豹線粒體控制區(qū)異質性現(xiàn)象

    異質性是指在有些脊椎動物,如中華鱘(Acipensersinensis)、弓鰭魚(Amiacalva),體內存在多種重復序列數(shù)目不同的線粒體基因組。至于控制區(qū)異質型和多態(tài)性水平高的原因,有學者指出線粒體基因異質性中的重復序列可能形成發(fā)卡結構,發(fā)卡結構引起高頻率回復突變,這也許是導致異質性形成的原因,當然也不排除父本mtDNA的滲漏造成異質性的可能性。同時異質性也是物種進化的原因,線粒體中的串聯(lián)重復、存在的大量插入與缺失等是物種進化的特征[10-12]。

    而本文通過比較分析我國遼東灣、韓國、美國阿拉斯加斑海豹線粒體基因組控制區(qū)發(fā)現(xiàn),三者主要變化出現(xiàn)在控制區(qū)CSB-Ⅲ上游約500 bp序列中,其上有大量重復片段,且重復片段長度有差異,這些重復片段主要為:ACGTAC、GCACAC、ACGT、ACGC、AC、GC。Bahn等[13-14]在比較韓國與日本斑海豹的控制區(qū)57個單倍型時,未發(fā)現(xiàn)完全一致的序列。孫凡越[15]也對7頭遼東灣斑海豹控制區(qū)序列進行了克隆測序,得到了146個單倍型,其中異質型數(shù)目占所測序列總數(shù)的92%,并發(fā)現(xiàn)序列差異的原因主要是存在6種重復單元(GTACACAC、GTACAC、GTAC、GCACACAC、GCACAC和GCAC),而各單倍型的重復單元及重復次數(shù)均不相等,由此造成了遼東灣斑海豹不同個體之間出現(xiàn)長度異質性。這一結論與本試驗的研究結果較類似,說明我國遼東灣斑海豹的線粒體DNA異質性程度比較高,因此,OH重復單元的特征以及線粒體ND5基因的序列多態(tài)性,都有可能成為區(qū)分斑海豹個體和不同種群的重要分子標記。

    3.2 我國遼東灣斑海豹與韓國、阿拉斯加斑海豹的親緣關系

    本文在比較分析斑海豹線粒體基因組蛋白編碼基因的突變時,發(fā)現(xiàn)在5個突變蛋白質編碼基因中,共有10個位點出現(xiàn)氨基酸變化,總突變核苷酸位點數(shù)為61個,由表3可見,遼東灣和韓國斑海豹的蛋白編碼基因中,只出現(xiàn)1個氨基酸突變,證明這兩個個體的序列比較保守;相對應的阿拉斯加與遼東灣、阿拉斯加與韓國的突變氨基酸位點數(shù)分別為6個、10個,突變核苷酸位點數(shù)分別為56個、58個。通過對斑海豹3個線粒體基因組蛋白編碼基因的突變比較分析(表3)及系統(tǒng)進化分析(圖1)可以看出,遼東灣和韓國斑海豹的序列同源性顯著高于阿拉斯加與遼東灣、阿拉斯加與韓國,說明遼東灣和韓國斑海豹很可能來自同一個斑海豹種群。

    北太平洋的北部和西部海域及其沿岸和島嶼都是斑海豹在世界上的主要分布區(qū)[16],美國阿拉斯加海域與中國、韓國沿海相距較遠,而從韓家波等[17]的衛(wèi)星信標跟蹤斑海豹研究可以看出,我國遼東灣的斑海豹可以到達韓國西海岸的白翎島,說明我國海域與韓國西海岸的斑海豹有交流,這進一步表明了我國遼東灣與韓國斑海豹較美國阿拉斯加斑海豹的親緣關系更近。

    [1] 邢晶晶. 分子遺傳標記及其技術在水產生物中的研究與應用[J]. 水產學雜志, 2002, 14(2):61-70.

    [2] Shaughnessy P D, Fay R H. A review of the taxonomy and nomenclature of North Pacific harbour seals[J]. J Zool, 1997,182(3):385-419.

    [3] Won C, Yoo B H. Abundance, seasonal haul-out patterns and conservation of spotted sealPhocalarghaalong the coast of Bak-ryoung Island[J]. Oryx,2004,38(1):109-112.

    [4] Sambrook J,F(xiàn)ritsch E F,Maniatis T. Molecular Cloning[M]. New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989.

    [5] 韓家波,赫崇波,王強,等. 遼東灣斑海豹線粒體ND4、tRNA Arg、ND4L和ND3基因序列分析[J]. 水產科學, 2006,25(10):500-504.

    [6] 韓家波,赫崇波,王效敏,等. 遼東灣斑海豹線粒體蘇氨酸和脯氨酸及控制區(qū)部分序列分析[J]. 水產科學,2007,26(2):74-78.

    [7] Gordon D, Abajian C, Green P. Consed: a graphical tool for sequence finishing [J]. Genome Res, 1998, 8(3):195-202.

    [8] Wyman S K, Jansen R K, Boore J L. Automatic annotation of organellar genomes with DOGMA[J]. Bioinformatics, 2004, 20(17):3252-3255.

    [9] Lowe T M, Eddy S R. tRNAscan-SE: a program for improved detection of transfer RNA genes in genomic sequence [J]. Nucleic Acids Res, 1997, 25(5): 955-964.

    [10] 蘇瑛. 動物mtDNA控制區(qū)及保守與異質[J]. 四川動物, 2005, 24(4):669-672.

    [11] 王巍, 朱華, 胡紅霞,等. 五種鱘魚線粒體控制區(qū)異質性和系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 動物學研究, 2009, 30(5): 487-496.

    [12] 肖海霞, 帕熱哈提江·吾甫爾, 玉山江,等. 線粒體DNA在動物起源進化和遺傳多樣性中的應用[J]. 獸醫(yī)導刊, 2015(12):39-40.

    [13] Bahn S Y, Choi E H, Jang K H, et al. Complete mitochondrial genome of the Korean spotted sealPhocalargha(Mammalia, Pinnipedia, Phocidae): genetic differences betweenP.larghaandPhocavitulina[J]. Mitochondrial DNA, 2009, 20(5/6):105-106.

    [14] Mizuno A W, Onuma M, Takahashi M, et al. Population genetic structure of the spotted sealPhocalarghaalong the Coast of Hokkaido, based on mitochondrial DNA sequences[J]. Zool Sci, 2003, 20(6): 783-788.

    [15] 孫凡越. 遼東灣斑海豹種群遺傳特征的研究 [D]. 大連:遼寧師范大學,2009.

    [16] Rugh D J, Shelden K E W, Withrow D E. Spotted seals,Phocalargha, in Alaska[J]. Marine Fisheries Review, 1997, 59(1):1-18.

    [17] 韓家波,鹿志創(chuàng),田甲申,等. 基于衛(wèi)星信標跟蹤的斑海豹放流效果研究[J]. 獸類學報, 2013, 33(4): 300-307.

    AnalysisandComparisonofCompleteMitochondrialGenomeinSpottedSealPhocalargha

    GAO Xianggang1, LU Zhichuang1, TIAN Jiashen1, HAN Jiabo1, HE Chongbo1, SONG Xinran2

    ( 1. Key Lab of Marine Fishery Molecular Biology of Liaoning Province, Liaoning Ocean and Fisheries Science Research Institute, Dalian 116023, China; 2. Dalian Sun Asia Tourism Holding Co, Ltd, Dalian 116023, China )

    The complete sequence of the mitochondrial genome of the spotted seals (Phocalargha) in the Liaodong Gulf has been determined by long and accurate polymerase chain reaction (LA-PCR) and primer walking technology. The genome is 16 754 bp in size, containing 2 ribosomal RNA genes, 13 protein-coding genes, 22 transfer RNA (tRNA) genes and one control region, demonstrating a structure basically in accordance with other marine mammals. The ND6, tRNAAla, tRNAAsn, tRNACys, tRNATyr, tRNASer(UCN), tRNAGluand tRNAProgenes were located on the light strand (L strand), and the remainders lied on the heavy strand (H strand). The comparative analysis of the seal mitochondrial genome among Liaodong, Korean and Alaskan populations revealed the existence of length differences and that the major variations exhibited in the form of repeat motifs were located in the control region. Notably, in the coding region of the three targeted populations, ND5 showed the maximal mutation degree in total of 18 mutant bases was detected, which resulted in four amino acid changes. The variant and phylogenetic analysis of protein-coding genes indicated that the Liaodong seal shared higher homology with Korean seal than with Alaskan seal. It is inferred that Liaodong seal and Korean seal probably belong to one population.

    Phocalargha; mitochondrial genome; comparative structure;phylogeny

    10.16378/j.cnki.1003-1111.2017.04.018

    Q786

    A

    1003-1111(2017)04-0509-05

    2016-07-01;

    2016-08-16.

    遼寧省海洋與漁業(yè)科研項目(201417);香港海洋公園保育基金資助項目(MM04-1516).

    高祥剛(1980-),男,副研究員;研究方向:動物分子遺傳學. E-mail:xiangganggao@163.com. 通訊作者: 赫崇波(1961-),男,研究員,博士;研究方向:動物分子遺傳學. E-mail:chongbohe@163.com.

    猜你喜歡
    斑海豹遼東灣阿拉斯加
    2023年4月3日。在阿拉斯加聯(lián)合太平洋多國戰(zhàn)備中心舉行的阿拉斯加23-02演習期間,美軍士兵正扮演敵方調查周圍地區(qū)
    軍事文摘(2023年9期)2023-04-30 04:11:52
    2021年6月18日,一架F-16戰(zhàn)隼在聯(lián)合太平洋阿拉斯加靶場上空
    軍事文摘(2021年15期)2021-08-11 13:01:12
    大連百頭斑海豹幼崽被盜獵,沒有買賣才沒有傷害
    渤海精靈斑海豹
    天天愛科學(2017年2期)2017-04-29 11:25:40
    天然氣分輸站規(guī)劃選址可行性論證初探——以盤錦遼東灣新區(qū)榮興分輸站為例
    遼東灣西部海域表層沉積物重金屬的含量分布與污染評價
    遼東灣坳陷南部旅大10-2構造區(qū)源蓋動態(tài)耦合關系定量評價
    遼東灣地區(qū)濁積扇體識別及儲層地震描述方法研究
    斷塊油氣田(2012年6期)2012-03-25 09:53:57
    冰川的藍,極光的燦——阿拉斯加夢飛行
    50石油職工志愿者5年守護斑海豹
    国产黄频视频在线观看| 亚洲中文av在线| 九九爱精品视频在线观看| 久久久久久久大尺度免费视频| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 青春草国产在线视频| 青春草国产在线视频| 黄色 视频免费看| 国产精品熟女久久久久浪| 色视频在线一区二区三区| 日日撸夜夜添| 亚洲成国产人片在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 国产片内射在线| 热re99久久国产66热| 看免费av毛片| 国产亚洲一区二区精品| 99re6热这里在线精品视频| 1024视频免费在线观看| 搡老乐熟女国产| 欧美日韩精品网址| 国产一卡二卡三卡精品 | 天美传媒精品一区二区| 韩国高清视频一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产高清国产精品国产三级| 在线免费观看不下载黄p国产| 男女无遮挡免费网站观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 成人国产麻豆网| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产爽快片一区二区三区| 亚洲,欧美精品.| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品第一国产精品| 国产精品蜜桃在线观看| 午夜福利免费观看在线| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 国产精品 国内视频| 777米奇影视久久| 美国免费a级毛片| 国产在线一区二区三区精| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | bbb黄色大片| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲精品在线美女| 1024香蕉在线观看| av福利片在线| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品.久久久| 波多野结衣一区麻豆| 精品少妇久久久久久888优播| 久久久精品区二区三区| 高清视频免费观看一区二区| 在线观看免费午夜福利视频| 亚洲成人手机| 久久久国产欧美日韩av| 天天操日日干夜夜撸| 女人精品久久久久毛片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产淫语在线视频| 久久性视频一级片| 一二三四中文在线观看免费高清| 97在线人人人人妻| 国产精品国产av在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲欧洲国产日韩| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品 国内视频| 国产成人免费观看mmmm| 女性被躁到高潮视频| 搡老岳熟女国产| 男女免费视频国产| 午夜久久久在线观看| 国产精品免费视频内射| 黄片小视频在线播放| 久久99精品国语久久久| 国产成人av激情在线播放| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲伊人久久精品综合| 国产在视频线精品| 午夜福利乱码中文字幕| 18在线观看网站| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 中国三级夫妇交换| 国产精品免费视频内射| 免费在线观看完整版高清| 免费观看a级毛片全部| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 香蕉丝袜av| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲精品第二区| 亚洲第一青青草原| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 日本爱情动作片www.在线观看| 999久久久国产精品视频| 久久久久久久久久久免费av| 成人国产av品久久久| 熟女av电影| 青草久久国产| netflix在线观看网站| 丁香六月天网| 亚洲av国产av综合av卡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产深夜福利视频在线观看| 99国产综合亚洲精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 成年人午夜在线观看视频| 人妻 亚洲 视频| 国产极品天堂在线| 热re99久久国产66热| 一个人免费看片子| 麻豆av在线久日| 国产成人av激情在线播放| 亚洲专区中文字幕在线 | 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 热re99久久国产66热| 一个人免费看片子| 久久精品亚洲av国产电影网| 最近手机中文字幕大全| a级片在线免费高清观看视频| 国产精品一国产av| 亚洲欧美清纯卡通| 精品人妻在线不人妻| 欧美日韩成人在线一区二区| 精品卡一卡二卡四卡免费| 国产日韩欧美在线精品| 男人操女人黄网站| 嫩草影院入口| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品一国产av| 五月天丁香电影| 宅男免费午夜| 性少妇av在线| 最近的中文字幕免费完整| 国产一卡二卡三卡精品 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久99热这里只频精品6学生| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产精品 欧美亚洲| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲中文av在线| 国产97色在线日韩免费| 97人妻天天添夜夜摸| 久久av网站| 视频区图区小说| 又黄又粗又硬又大视频| 男女床上黄色一级片免费看| 色综合欧美亚洲国产小说| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 大香蕉久久网| 国产片内射在线| 亚洲精品国产av蜜桃| 中文字幕人妻丝袜制服| 日韩成人av中文字幕在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 黄片播放在线免费| 欧美97在线视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 成年动漫av网址| 这个男人来自地球电影免费观看 | 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 亚洲欧洲日产国产| 十八禁高潮呻吟视频| 伊人亚洲综合成人网| 久久久久久久精品精品| 国产亚洲精品第一综合不卡| 免费观看a级毛片全部| 亚洲欧美清纯卡通| 国产欧美亚洲国产| 欧美另类一区| 国产野战对白在线观看| 街头女战士在线观看网站| 午夜91福利影院| 日韩电影二区| 视频区图区小说| 五月天丁香电影| 亚洲久久久国产精品| 国产成人91sexporn| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美日本中文国产一区发布| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 超碰97精品在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲国产看品久久| 日韩制服骚丝袜av| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产精品av久久久久免费| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 亚洲人成77777在线视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 蜜桃国产av成人99| 国产一区二区三区综合在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 日韩大片免费观看网站| 亚洲 欧美一区二区三区| 午夜福利视频在线观看免费| 日本午夜av视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美激情极品国产一区二区三区| 伦理电影免费视频| 日本欧美视频一区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 下体分泌物呈黄色| 色网站视频免费| 久久久精品94久久精品| av在线老鸭窝| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产精品国产三级国产专区5o| 精品国产一区二区三区久久久樱花| av天堂久久9| 日日啪夜夜爽| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲av电影在线进入| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 巨乳人妻的诱惑在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 99国产综合亚洲精品| 国产高清国产精品国产三级| 国产乱人偷精品视频| 天天操日日干夜夜撸| av国产精品久久久久影院| 日韩电影二区| 女人精品久久久久毛片| 成年av动漫网址| 这个男人来自地球电影免费观看 | 美女大奶头黄色视频| 在线观看免费高清a一片| 国产午夜精品一二区理论片| 精品午夜福利在线看| 国产成人欧美| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产精品国产三级专区第一集| 丰满少妇做爰视频| www.av在线官网国产| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产国语露脸激情在线看| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲成人av在线免费| 国产成人av激情在线播放| 欧美在线黄色| 亚洲av男天堂| 亚洲美女搞黄在线观看| 一区二区三区精品91| 国产精品久久久久成人av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产亚洲最大av| 91成人精品电影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美日韩av久久| 国产精品av久久久久免费| 日本爱情动作片www.在线观看| 两个人免费观看高清视频| 少妇人妻久久综合中文| 三上悠亚av全集在线观看| 最新的欧美精品一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频| 五月开心婷婷网| 丰满乱子伦码专区| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 9191精品国产免费久久| 啦啦啦 在线观看视频| 免费av中文字幕在线| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人91sexporn| 老汉色∧v一级毛片| 一级,二级,三级黄色视频| 又黄又粗又硬又大视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 另类亚洲欧美激情| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品久久久av美女十八| 中国三级夫妇交换| 91成人精品电影| 又大又黄又爽视频免费| 久久久久久人人人人人| 国产精品无大码| 国产精品一区二区精品视频观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 丝袜美足系列| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产一区二区 视频在线| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲国产欧美一区二区综合| 成年人午夜在线观看视频| 丝袜美腿诱惑在线| 久久精品国产综合久久久| 久久久久精品人妻al黑| 午夜免费鲁丝| 男女床上黄色一级片免费看| 夫妻午夜视频| av在线老鸭窝| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 中文字幕色久视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产精品蜜桃在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 黄色 视频免费看| 超色免费av| 国产精品免费视频内射| 午夜日本视频在线| 狂野欧美激情性bbbbbb| 男女边摸边吃奶| 丰满少妇做爰视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 丰满乱子伦码专区| 亚洲视频免费观看视频| 欧美国产精品一级二级三级| 热99久久久久精品小说推荐| 在线观看国产h片| 午夜福利乱码中文字幕| 黑人猛操日本美女一级片| 亚洲第一av免费看| 久久久国产一区二区| 在线观看人妻少妇| 国产一区亚洲一区在线观看| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲精品国产一区二区精华液| 欧美av亚洲av综合av国产av | 久热这里只有精品99| 国产精品人妻久久久影院| 精品亚洲成国产av| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 婷婷色综合大香蕉| 国产精品久久久久久精品古装| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲精品成人av观看孕妇| 午夜福利网站1000一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲精品日本国产第一区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久精品国产综合久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 男女高潮啪啪啪动态图| 考比视频在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 99re6热这里在线精品视频| 在线观看国产h片| 国产又色又爽无遮挡免| 成人漫画全彩无遮挡| 另类亚洲欧美激情| 亚洲情色 制服丝袜| 日韩一区二区视频免费看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 一区福利在线观看| 黑人猛操日本美女一级片| 两个人免费观看高清视频| 日韩av免费高清视频| 欧美在线黄色| 一级毛片电影观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 18在线观看网站| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 香蕉国产在线看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本wwww免费看| 国产爽快片一区二区三区| av福利片在线| 97在线人人人人妻| 成人国语在线视频| 国产又爽黄色视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人三级做爰电影| 欧美在线黄色| 午夜久久久在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 在线精品无人区一区二区三| av国产精品久久久久影院| 十八禁网站网址无遮挡| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品一区二区在线观看99| 热re99久久国产66热| 色94色欧美一区二区| 丝袜美足系列| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲精品日本国产第一区| 美女大奶头黄色视频| 丝袜脚勾引网站| 天天操日日干夜夜撸| 少妇 在线观看| 国产精品 国内视频| 97精品久久久久久久久久精品| 久久久亚洲精品成人影院| 国产精品免费视频内射| 久久99精品国语久久久| 飞空精品影院首页| bbb黄色大片| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久久国产一级毛片高清牌| 一级爰片在线观看| 国产亚洲欧美精品永久| 久久天堂一区二区三区四区| 色视频在线一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | av.在线天堂| 色婷婷久久久亚洲欧美| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o | 久久精品国产亚洲av涩爱| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 色94色欧美一区二区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲七黄色美女视频| 97人妻天天添夜夜摸| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品蜜桃在线观看| 精品一区二区免费观看| 欧美精品高潮呻吟av久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 1024视频免费在线观看| 亚洲成人一二三区av| 最黄视频免费看| 激情视频va一区二区三区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 青春草国产在线视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 少妇的丰满在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 九草在线视频观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美精品一区二区大全| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 美女主播在线视频| 精品亚洲成a人片在线观看| xxx大片免费视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产成人精品在线电影| 曰老女人黄片| 街头女战士在线观看网站| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲第一青青草原| 在线观看免费高清a一片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 人人澡人人妻人| 国产一卡二卡三卡精品 | 精品人妻一区二区三区麻豆| 在线观看免费午夜福利视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| kizo精华| 国产免费视频播放在线视频| 欧美xxⅹ黑人| 啦啦啦啦在线视频资源| 午夜福利在线免费观看网站| av不卡在线播放| 亚洲精品自拍成人| 晚上一个人看的免费电影| 国产97色在线日韩免费| 久热这里只有精品99| 我的亚洲天堂| 在线天堂最新版资源| 成年人午夜在线观看视频| 黄片无遮挡物在线观看| 国产乱人偷精品视频| 夫妻午夜视频| 在线天堂中文资源库| 人妻人人澡人人爽人人| 午夜日本视频在线| 国产爽快片一区二区三区| 色综合欧美亚洲国产小说| 18禁国产床啪视频网站| 中国国产av一级| 成人亚洲精品一区在线观看| www日本在线高清视频| 亚洲精品视频女| 男人舔女人的私密视频| 精品午夜福利在线看| 人妻一区二区av| 大片免费播放器 马上看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产一级毛片在线| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲成人国产一区在线观看 | 99久久人妻综合| 亚洲国产欧美在线一区| 精品一品国产午夜福利视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产男女超爽视频在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 69精品国产乱码久久久| 国产精品久久久av美女十八| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲av电影在线进入| 最近2019中文字幕mv第一页| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 两个人看的免费小视频| 最近中文字幕2019免费版| 国产黄色视频一区二区在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 波多野结衣av一区二区av| 欧美国产精品一级二级三级| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲精品日本国产第一区| 制服诱惑二区| 国产日韩欧美在线精品| 国产精品女同一区二区软件| 免费观看av网站的网址| 亚洲精品成人av观看孕妇| 少妇人妻久久综合中文| 午夜免费男女啪啪视频观看| 丝袜美足系列| 视频在线观看一区二区三区| 免费黄网站久久成人精品| 夫妻午夜视频| 五月开心婷婷网| 国产精品99久久99久久久不卡 | 天天影视国产精品| 9色porny在线观看| 最近中文字幕2019免费版| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产麻豆69| 赤兔流量卡办理| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 中文字幕色久视频| 亚洲国产精品999| 无限看片的www在线观看| 电影成人av| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品三级大全| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久国产精品人妻一区二区| 中文字幕人妻熟女乱码| 人妻 亚洲 视频| 久久国产亚洲av麻豆专区| av网站免费在线观看视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲成人av在线免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 午夜日韩欧美国产| 1024视频免费在线观看| 伊人久久国产一区二区| 精品第一国产精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 不卡av一区二区三区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 一级a爱视频在线免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 母亲3免费完整高清在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久ye,这里只有精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 蜜桃国产av成人99| 欧美中文综合在线视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 99热全是精品| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 看十八女毛片水多多多| 老司机在亚洲福利影院| 日日撸夜夜添| 午夜福利,免费看| 久久久久网色| 欧美日韩一级在线毛片| 久久天堂一区二区三区四区| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 欧美精品一区二区免费开放| 欧美在线黄色| 卡戴珊不雅视频在线播放| 视频在线观看一区二区三区| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 观看美女的网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 亚洲少妇的诱惑av| 爱豆传媒免费全集在线观看| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 操美女的视频在线观看| 国产在线视频一区二区|