濃縮型雙黃連口服液臨床藥效學(xué)試驗(yàn)

吳苑瀅，楊 劍，曾 蕓，韋英益，胡庭俊*

(廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005)

濃縮型雙黃連口服液臨床藥效學(xué)試驗(yàn)

吳苑瀅1，楊 劍1，曾 蕓1，韋英益1，胡庭俊1*

(廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧 530005)

通過濃縮型雙黃連口服液的臨床藥效試驗(yàn)探討該藥物制劑臨床的療效并評價其安全性，為濃縮型雙黃連口服液的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。將風(fēng)熱感冒患雞900只，隨機(jī)分3組，分別為濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組、雙黃連口服液對照組、空白對照組，連續(xù)4 d給藥，停止給藥后繼續(xù)觀察7 d，記錄試驗(yàn)期間雞的臨床表現(xiàn)、體溫、體重，并于第11天測定血清免疫及生化指標(biāo)。結(jié)果顯示，濃縮型雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱治療的有效率、治愈率與雙黃連口服液比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。濃縮型雙黃連口服液、雙黃連口服液的治愈率均顯著高于空白對照組(P<0.05)。證實(shí)濃縮型雙黃連口服液對雞的風(fēng)熱感冒疾病具有較好的治療效果。

濃縮型雙黃連口服液；臨床試驗(yàn)；雞

雙黃連口服液是由金銀花、黃芩、連翹3種中藥制成的中藥方劑，具有清熱解毒、辛涼解表之功效，獸醫(yī)臨床上主要用于預(yù)防和治療寵物、畜禽感冒發(fā)熱及呼吸道疾病等[1]。雙黃連口服液對常見的流感病毒、腺病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒和麻疹病毒等有一定療效。李京玉等用不同濃度雙黃連口服液進(jìn)行了人工感染10日齡SPF雞胚的新城疫強(qiáng)毒抑殺試驗(yàn)，結(jié)果表明雙黃連口服液具有較強(qiáng)抗病毒的作用；并且通過建立內(nèi)毒素注射造成模型家兔發(fā)熱，對雙黃連口服液的解熱功能進(jìn)行了較為深入的研究，發(fā)現(xiàn)雙黃連口服液具有明顯的解熱和抗炎功效[2]。近年來養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅猛，集約化程度提高后也帶來了飼養(yǎng)空間中的氨氣含量增加和灰塵數(shù)量增加等環(huán)境因素；機(jī)體的呼吸系統(tǒng)長時間暴露在高濃度的氨氣之下，可導(dǎo)致呼吸道黏膜纖毛退化，黏液分泌增多；此外，纖毛的退化脫落，則會導(dǎo)致氣管和肺對病原菌的清除率降低，使出現(xiàn)呼吸道疾病和氣囊炎的幾率增加，空氣中大密度的灰塵則往往成為各種病原的載體[3]。接種疫苗是控制呼吸道疾病的重要措施，但疫苗接種后會引起機(jī)體應(yīng)激性的免疫接種反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體抵抗力下降，雞群中存在免疫抑制病毒、大腸埃希菌和支原體感染[4]。雞的呼吸道感染疾病及條件性病原引起的發(fā)熱是生產(chǎn)實(shí)踐中重要的威脅，本試驗(yàn)使用的濃縮型雙黃連口服液為純中藥復(fù)方制劑，其是在《中國獸藥典》收錄的雙黃連口服液工藝配方的基礎(chǔ)上進(jìn)行研發(fā)而成。本臨床試驗(yàn)旨在進(jìn)一步驗(yàn)證該藥物制劑對雞感冒發(fā)熱的臨床療效并評價其安全性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試藥物及對照藥物 供試藥物：濃縮型雙黃連口服液：中試產(chǎn)品，生產(chǎn)批號：20140201，規(guī)格：3.0 g/mL，100 mL/瓶，由河南牧翔動物藥業(yè)有限公司中試生產(chǎn)，有效期2年。

對照藥物：雙黃連口服液，產(chǎn)品批準(zhǔn)文號：獸藥字(2013)160225030，生產(chǎn)批號：14090308，規(guī)格：1.5 g/mL，100 mL/瓶，由河南牧翔動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，有效期2年。

血清免疫生化試劑盒：血清溶菌酶試劑盒、SOD活力試劑盒、酸性磷酸酶試劑盒、GSH含量試劑盒、總抗氧化能力試劑盒、總蛋白試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.1.2 試驗(yàn)用雞 試驗(yàn)雞品種為桂香雞，雌性，900只。飼料為自配的雛雞飼料，試驗(yàn)地點(diǎn)為廣西國有欽廉林場。

免疫程序?yàn)椋?日齡時肌肉注射雞馬立克病疫苗，7日齡時點(diǎn)眼滴鼻雞新城疫Ⅳ系疫苗，14日齡時點(diǎn)眼滴鼻雞傳染性法氏囊弱毒疫苗；18日齡時呼吸型、腎型、腺胃型傳染性支氣管炎油乳劑滅活苗肌肉注射，22日齡時中毒株法氏囊炎疫苗飲水給予；27日齡時新城疫活疫苗肌肉注射和雞痘滅活苗翅膀下穿刺接種。

發(fā)病原因：雞為自然發(fā)病。由于天氣突變、飼養(yǎng)管理不善等原因?qū)е码u發(fā)病。

臨床表現(xiàn)及診斷：根據(jù)雞的臨床發(fā)病癥狀，選取雞用于試驗(yàn)。試驗(yàn)雞于50日齡時出現(xiàn)風(fēng)熱感冒的癥狀。病雞主要表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁，食欲下降，不愿走動，羽毛松亂，張口呼吸，飲水量增加，雞體表現(xiàn)脫水癥狀，雞冠變暗紅色，咳嗽清亮等疑似感冒發(fā)熱的癥狀。根據(jù)臨床表現(xiàn)初步判定為為風(fēng)熱感冒。試驗(yàn)前病雞均未給任何藥物治療。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)動物分組及處理 發(fā)病雞隨機(jī)分為3組，每組300只，分別為濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組、雙黃連口服液藥物對照組、空白對照組。

1.2.2 給藥方法 按下表1所列的要求給藥。在停藥后對雞只的臨床表現(xiàn)進(jìn)行跟蹤觀察，觀察時間持續(xù)至停藥后第7 d。

表1 試驗(yàn)動物分組及處理

1.2.3 臨床療效的觀察 ①觀察時間。用藥期間及停止給藥后繼續(xù)觀察7 d，共11 d。②臨床癥狀及記錄。試驗(yàn)期間，每天觀察并記錄雞的臨床表現(xiàn)，如精神、食欲、呼吸道癥狀，記錄飲水量等。觀察期間，對死亡病例逐只剖檢，觀察記錄肺臟等器官的病理變化。③體溫。用藥前、用藥后第4 d，每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽取10只測量體溫(肛溫)，計算各組平均體溫，比較用藥后雞的體溫變化。④體重。用藥前、用藥后第11 d，每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽取30只稱重，計算各組平均體重，求出用藥期間各組雞的增重率。⑤血清免疫及生化指標(biāo)。用藥后第11 d，每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽取30只采血，測定血清溶菌酶的水平、超氧化物歧化酶(super oxide dimutese，SOD)活力、酸性磷酸酶水平、谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量、總抗氧化能力、總蛋白濃度，比較用藥后雞血清上述指標(biāo)水平的變化。

1.2.4 療效評價標(biāo)準(zhǔn) 治愈：停止給藥后繼續(xù)觀察7 d，臨床癥狀消失，精神及采食情況恢復(fù)正常判為治愈。每組治愈雞數(shù)占每組試驗(yàn)雞數(shù)的百分比為治愈率。

有效：停止給藥后繼續(xù)觀察7 d，臨床癥狀減輕，精神及采食情況沒有恢復(fù)到發(fā)病前的狀態(tài)判為有效。每組有效雞數(shù)占每組試驗(yàn)雞數(shù)的百分比為有效率。

無效：停止給藥后繼續(xù)觀察7 d，臨床癥狀無改善者判為無效，無效雞數(shù)占每組試驗(yàn)雞數(shù)的百分比為無效率。

1.2.5 療效綜合判定 主要依據(jù)藥物應(yīng)用后臨床癥狀消失等指標(biāo)，對該藥物的療效做出評定。

1.2.6 數(shù)據(jù)分析與處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用t檢驗(yàn)或方差分析，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 濃縮型雙黃連口服液的治療效果

經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，濃縮型雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱治療的有效率、治愈率與雙黃連口服液比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。濃縮型雙黃連口服液、雙黃連口服液的治愈率均顯著高于空白對照組(P<0.05)。

給予臨床推薦劑量的濃縮型雙黃連口服液3 d后與自然發(fā)病的空白對照組比較，發(fā)病雞的病情減輕，精神以及食欲好轉(zhuǎn)，夜間觀察咳嗽減少。用藥后第5 d，濃縮型雙黃連口服液組試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，臨床癥狀明顯減輕。夜間觀察僅有零星咳嗽聲。給藥后第11 d觀察，各用藥組試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)基本恢復(fù)正常，采食和飲水恢復(fù)正常。

雙黃連口服液的治療效果與濃縮型雙黃連口服液治療效果相當(dāng)。給藥后第11 d觀察，各用藥組試驗(yàn)雞的精神狀態(tài)基本恢復(fù)正常，空白對照組試驗(yàn)雞夜間有咳嗽聲，部分雞出現(xiàn)不同頻率的甩頭現(xiàn)象。結(jié)果表明，濃縮型雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱治療效果明顯，可用于雞感冒發(fā)熱的治療。用法用量為：混飲，每只雞0.25 mL，連用4日。雙黃連口服液的療效結(jié)果見表2。

2.2 濃縮型雙黃連口服液對雞體溫的影響

雞的正常體溫范圍與品種等因素有關(guān)。據(jù)該養(yǎng)殖場日常測定結(jié)果，桂香雞正常體溫范圍在40.0℃～41.0℃之間。由表3可以看出，用藥前各組雞的平均體溫范圍均為41.7℃～41.8℃范圍內(nèi)，根據(jù)臨床表現(xiàn)確定為感冒發(fā)熱；用藥后第4 d，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的體溫均明顯下降，與空白對照組比較，分別為差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。而用藥后第4 d，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組雞的體溫差異不顯著(P>0.05)。

2.3 濃縮型雙黃連口服液對雞體重的影響

于用藥前和試驗(yàn)結(jié)束時對每組試驗(yàn)雞隨機(jī)抽取30只分別稱重。由表4可見，空白對照組增重率為45.32%，濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組、雙黃連口服液藥物對照組試驗(yàn)雞的增重率分別為46.31%、47.95%，但與空白對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組、雙黃連口服液藥物對照組試驗(yàn)雞的相對增重率分別為102.19%、105.80%。

表2 雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱的治療效果

注：與空白對照組比較，*P<0.05為差異顯著。“#”表示自愈。

Note:Compared with blank control group,*P<0.05 significant difference.“#”self-healing.

表3 各試驗(yàn)組雞的體溫變化

注：“*”表示與空白對照組比較，差異顯著(P<0.05)；“**”表示差異極顯著(P<0.01)。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference(P<0.05)；“**”very significant difference(P<0.01).

表4 各試驗(yàn)組雞的體重變化

2.4 濃縮型雙黃連口服液對雞血清溶菌酶水平的影響

由表5可以看出，用藥后第11 d，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清溶菌酶含量均呈現(xiàn)一定程度的升高，與空白對照組比較，差異分別為顯著和極顯著(P<0.05和P<0.01)；濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組雞血清溶菌酶水平與雙黃連口服液藥物對照組比較差異不顯著(P>0.05)。

2.5 濃縮型雙黃連口服液對雞血清SOD活力的影響

由表6可以看出，相較于空白對照組，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清總SOD活力均發(fā)生一定程度的下降，但較空白對照組，差異均不顯著(P>0.05)；濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組下降幅度較小，與雙黃連口服液藥物對照組差異不顯著(P>0.05)。

表5 用藥后第11 d雞血清溶菌酶含量測定結(jié)果

注：“*”表示與空白對照組比較，差異顯著(P<0.05)；“**” 表示差異極顯著(P<0.01)。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference(P<0.05)；“**”very significant difference(P<0.01).

表6 各試驗(yàn)組雞血清總SOD活力測定結(jié)果

注：“*”表示相對于空白對照組，差異顯著；“**”表示相對于空白對照組，差異極顯著；“#”表示相對于藥物對照組，差異顯著；“##”表示相對于藥物對照組，差異極顯著。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference,and“**”very significant difference; compared with drug control group“#”significant difference,and “##”very significant difference.

2.6 濃縮型雙黃連口服液對雞血清酸性磷酸酶活力的影響

由表7可以看出，相較于空白對照組，雙黃連口服液藥物對照組的血清酸性磷酸酶升高，但差異不顯著(P>0.05)；濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清酸性磷酸酶降低，差異不顯著(P>0.05)；相較于雙黃連口服液藥物對照組，濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清酸性磷酸酶降低，差異極顯著(P<0.01)。

2.7 濃縮型雙黃連口服液對雞血清GSH含量的影響

由表8可以看出，相較于空白對照組，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清GSH含量均發(fā)生一定程度的升高；相較于空白對照組，前者差異不顯著(P>0.05)，后者差異極顯著(P<0.01)；相較于雙黃連口服液藥物對照組，濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清GSH含量差異極顯著(P<0.01)。

表7 各試驗(yàn)組雞血清酸性磷酸酶測定結(jié)果

注：“*”表示相對于空白對照組，差異顯著；“**”表示相對于空白對照組，差異極顯著；“#”表示相對于藥物對照組，差異顯著；“##”表示相對于藥物對照組，差異極顯著。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference,and“**”very significant difference; compared with drug control group“#”significant difference,and “##”very significant difference.

表8 各試驗(yàn)組雞血清GSH含量測定結(jié)果

注：“*”表示相對于空白對照組，差異顯著；“**”表示相對于空白對照組，差異極顯著；“#”表示相對于藥物對照組，差異顯著；“##”表示相對于藥物對照組，差異極顯著。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference,and“**”very significant difference; compared with drug control group“#”significant difference,and “##”very significant difference.

2.8 濃縮型雙黃連口服液對雞血清總抗氧化能力的影響

由表9可以看出，相較于空白對照組，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清總抗氧化能力分別微小的升高和降低，但差異均不顯著(P>0.05)；相較于雙黃連口服液藥物對照組，濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清總抗氧化能力下降，但差異不顯著(P>0.05)。

2.9 濃縮型雙黃連口服液對雞血清總蛋白濃度水平的影響

由表10可以看出，相較于空白對照組，雙黃連口服液藥物對照組和濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組的血清蛋白濃度均發(fā)生一定程度的下降，但差異均不顯著(P>0.05)；濃縮型雙黃連口服液試驗(yàn)組與雙黃連口服液藥物對照組差異也不顯著(P>0.05)。

表9 各試驗(yàn)組雞血清總抗氧化能力測定結(jié)果

注：“*”表示相對于空白對照組，差異顯著；“**”表示相對于空白對照組，差異極顯著；“#”表示相對于藥物對照組，差異顯著；“##”表示相對于藥物對照組，差異極顯著。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference,and“**”very significant difference; compared with drug control group“#”significant difference,and “##”very significant difference.

表10 各試驗(yàn)組雞血清總蛋白濃度測定結(jié)果

注：“*”表示相對于空白對照組，差異顯著；“**”表示相對于空白對照組，差異極顯著；“#”表示相對于藥物對照組，差異顯著；“##”表示相對于藥物對照組，差異極顯著。

Note:Compared with blank control group,“*”significant difference,and“**”very significant difference; compared with drug control group“#”significant difference,and “##”very significant difference.

3 討論

雙黃連口服液收載于《中國獸藥典》，由金銀花、黃芩、連翹3味中藥組合而成，其具有清熱解毒、辛涼解表的功效。本試驗(yàn)通過臨床研究證明，雙黃連口服液對血液生理生化指標(biāo)有顯著的影響，可增加溶菌酶的活性，提高機(jī)體抗氧化能力，對風(fēng)熱感冒引起的發(fā)熱雞群起到明顯的降溫作用。曾林等研究了雙黃連對大鼠血清溶菌酶活性的影響，注射雙黃連5 d后，大鼠血清中溶菌酶含量試驗(yàn)組和對照組比較，相差極顯著，結(jié)果表明，雙黃連激活血清中溶菌酶是其抗菌作用機(jī)理之一[5]。李霽偉等從抗氧化的作用途徑探討雙黃連對缺血再灌注肝臟損傷大鼠的治療，證明雙黃連能提高肝臟內(nèi)相關(guān)抗炎、抗氧化機(jī)制，從而減輕肝的損傷程度[6]。在臨床中主要用于細(xì)菌和病毒感染引起的感冒發(fā)熱、咳嗽、咽痛、上呼吸道感染、流行性感冒、氣管炎、輕型肺炎、扁桃體炎等病癥，其療效在許多文獻(xiàn)上都有報道[7-12]。現(xiàn)代藥理研究證明雙黃連制劑對多種病原微生物具有抑制作用，并能降低毛細(xì)血管的通透性、減少滲出，具有抗炎、抗過敏作用，還可增強(qiáng)機(jī)體產(chǎn)生α-干擾素能力，可顯著地增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫作用，對病毒也具有較強(qiáng)的抑制作用，并能中和細(xì)菌產(chǎn)生的內(nèi)毒素，同時具抗感染及免疫調(diào)節(jié)雙重作用[13]。但是臨床上雙黃口服液相關(guān)不良反應(yīng)的報道也時有出現(xiàn)，多見于哺乳動物，禽類報道較少，主要以過敏反應(yīng)最為常見；現(xiàn)代研究報道證明，這與雙黃連口服液中的黃芩苷和黃芩素等有關(guān)[14-17]。

臨床藥效試驗(yàn)顯示濃縮型雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱具有較好的療效，有效率、治愈率分別為98.67%和97.67%。雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱的療效與濃縮型相當(dāng)，有效率、治愈率分別為98%和97%。濃縮型雙黃連口服液能使發(fā)病雞的體溫下降，并能提高雞血液中溶菌酶水平，提高雞非特異性免疫力，達(dá)到治療雞感冒發(fā)熱的效果。濃縮型雙黃連口服液組、雙黃連口服液組試驗(yàn)雞的相對增重率分別為102.19%和105.80%。依據(jù)雙黃連口服液治療效果和雞體溫、血清溶菌酶等免疫及生化指標(biāo)變化情況，表明濃縮型雙黃連口服液在治療效果方面略高于雙黃連口服液。本試驗(yàn)通過對血液中溶菌酶的測定，解釋了雙黃連口服液治療發(fā)熱感冒的可能性機(jī)制，為實(shí)踐生產(chǎn)應(yīng)用提供了數(shù)據(jù)支持。

濃縮型雙黃連口服液是在《中國獸藥典》收錄的雙黃連口服液工藝配方的基礎(chǔ)上進(jìn)行研發(fā)而成。臨床藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果顯示通過對感冒發(fā)熱的雞進(jìn)行治療性臨床試驗(yàn)，證實(shí)濃縮型雙黃連口服液對雞感冒發(fā)熱具有較好的療效，至停藥后第7 d病雞群的整體狀況有了極大的改善，推薦濃縮型雙黃連口服液治療雞感冒發(fā)熱的臨床應(yīng)用用法用量為混飲，每只雞0.25 mL，連用4日。

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ClinicalEfficacyofConcentratedShuanghuanglianOralLiquid

WU Yuan-ying1,YANG Jian1,ZENG Yun1,WEI Ying-yi1,HU Ting-jun1

(CollegeofAnimalScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning,Guangxi,530005,China)

The clinical trial of concentrated Shuanghuanglian oral liquid was performed to evaluate its clinical efficacy and safety,and to provide basis for clinical application of the concentrated Shuanghuanglian oral liquid.The 900 chickens were randomly divided into 3 groups:concentrated Shuanghuanglian oral liquid test group,Shuanghuanglian oral liquid control group,and blank control group.The animals were treated with the drugs in 4 consecutive days,then the clinical signs were observed in the following 7 days.The clinical manifestations,body temperature and body weight of the chickens were recorded during the experiment and biochemical parameters were measured on Day 11.The results showed that concentrated Shuanghuanglian oral liquid was effective for the treatment of cold fever in chickens,and the cure rate was not statistically significant when compared with Shuanghuanglian oral liquid (P>0.05).The cure rate of the concentrated Shuanghuanglian oral liquid or Shuanghuanglian oral liquid was significantly higher than that of blank control group(P<0.05)respectively.In brief,the concentrated Shuanghuanglian oral liquid had a good curative effect on anemopyretic cold in chickens.

concentractedShuanghuanglianoral liquid; clinical trial; chicken

2017-04-08

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31560708); 廣西大學(xué)獸醫(yī)學(xué)研究生聯(lián)合培養(yǎng)基地建設(shè)項(xiàng)目(20160976)

吳苑瀅(1994-)，女，廣西貴港人，碩士研究生，主要從事獸醫(yī)藥理與毒理學(xué)研究。 *

S859.3

A

1007-5038(2017)11-0126-06