鮑曼不動(dòng)桿菌對耐碳青霉烯類抗生素耐藥機(jī)制研究〔1〕

李小玉，羅一鈞

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

鮑曼不動(dòng)桿菌對耐碳青霉烯類抗生素耐藥機(jī)制研究〔1〕

李小玉，羅一鈞

(贛州市第五人民醫(yī)院，江西 贛州 341000)

目的：探討鮑曼不動(dòng)桿菌(CRAB)耐碳青霉烯類抗生素的機(jī)制，為臨床選擇抗生素提供合理意見，同時(shí)為新藥開發(fā)提供參考。方法：采用瓊脂紙片擴(kuò)散法(K-B法)及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法從78株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感的臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗(yàn)檢測其外排泵表型。PCR擴(kuò)增耐藥基因，并對陽性產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序分析，確定其基因型。結(jié)果：CRAB的耐藥性非常嚴(yán)重，對12種抗菌藥物中的9種均耐藥(耐藥率>90%)，其中對哌拉西林、頭孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐藥率均為100.0%。結(jié)論：鮑曼不動(dòng)桿菌對碳青霉烯抗生素具有較高的耐藥性，應(yīng)加強(qiáng)對該類抗菌藥使用的監(jiān)控。

膜蛋白；鮑曼不動(dòng)桿菌；耐碳青霉烯類抗生素；機(jī)制

鮑曼不動(dòng)桿菌(CRAB)是不動(dòng)桿菌屬中最常見的一種革蘭陰性球桿菌，該菌廣泛分布于醫(yī)院，是一種重要的機(jī)會(huì)病原菌，能引起一系列院內(nèi)感染，如菌血癥、尿路感染、繼發(fā)性腦膜炎、手術(shù)部位感染及呼吸機(jī)相關(guān)性肺炎等，嚴(yán)重威脅患者生命，尤以ICU病房感染率和病死率最高[1]。由于抗生素的廣泛應(yīng)用，造成對耐藥菌的篩選，使得近年來多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌的感染日趨增多，現(xiàn)階段鮑曼不動(dòng)桿菌碳青霉烯類耐藥正成為臨床微生物領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)[2]。旨在探討鮑曼不動(dòng)桿菌對耐碳青霉烯類抗生素的機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集我院2014年12月—2016年2月臨床分離的耐亞胺培南鮑曼不動(dòng)桿菌78株，去除同一患者相同部位重復(fù)分離株。

1.2 方法

采用瓊脂紙片擴(kuò)散法(K-B法)及聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法從78株廣泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌中篩選出8株僅對多黏菌素敏感、1株全敏感的臨床株。采用PAβN外排泵抑制試驗(yàn)檢測其外排泵表型。采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增耐藥基因blaKPC、blaOXA及ESBLs基因blaTEM、blaCTX-M、blaSHV、blaOXA，DNA模板采用加熱煮沸法制備，并對陽性產(chǎn)物進(jìn)行雙向測序分析，確定其基因型。

2 結(jié) 果

2.1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 CRAB的耐藥性非常嚴(yán)重，對12種抗菌藥物中的9種均耐藥(耐藥率>90%)，其中對哌拉西林、頭孢他啶、哌拉西林-他唑巴坦和美洛培南的耐藥率均為100.0%，耐藥率最低者為頭孢哌酮-舒巴坦(43.6%)(見表1)。

2.2 PCR檢測結(jié)果

在78株CRAB中隨機(jī)選取9株耐藥株(1株adeB基因陰性除外)，以及3株敏感株進(jìn)行PCR。9株耐藥株和3株敏感株均檢測到adeB基因的預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物，其灰度值以內(nèi)參基因recA擴(kuò)增片段為100%對照，經(jīng)凝膠掃描半定量檢測分析，兩者的adeB相對表達(dá)水平幾乎沒有差異(見圖1)。

圖1 鮑曼不動(dòng)桿菌部分菌株ADEB基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果

3 討 論

鮑曼不動(dòng)桿菌已成為院內(nèi)感染最常見的致病菌種，尤其是在ICU病房內(nèi)常引起與呼吸器有關(guān)的肺炎及菌血癥。由于此菌的抗藥性快速增加，已產(chǎn)生了多重抗藥性菌株及全抗藥性菌株，出現(xiàn)臨床上無藥可用的窘境。本研究旨在探討在沒有抗生素的壓力之下，抗藥性鮑曼不動(dòng)桿菌是否能改變其抗藥性[3]。

表1 78株CRAB對12種抗菌藥物的耐藥和敏感情況

鮑曼不動(dòng)桿菌是一種比較容易產(chǎn)生抗藥性傾向的菌種，再加上抗生素的廣泛使用，更易演變成多重抗藥性菌種，成為近年來急速躍升成為院內(nèi)感染最重要的致病菌之一。臨床研究報(bào)道，鮑曼不動(dòng)桿菌耐碳青霉烯類抗生素的主要機(jī)制為碳青霉烯類水解酶的產(chǎn)生，多伴隨外膜通道蛋白表達(dá)的下調(diào)及細(xì)菌膜上主動(dòng)外排泵過度表達(dá)，降低了青霉素與蛋白結(jié)合的親和力。其耐藥最常見機(jī)制為產(chǎn)生水解碳青霉烯類β-內(nèi)酰胺酶[4]。耐生存、易抗藥、喜潮濕的特性，使得鮑曼不動(dòng)桿菌成為ICU病房特別重要的致病菌，且隨著ICU病房侵入性診斷及治療的發(fā)展以及抗生素、免疫抑制劑等藥物的濫用，鮑曼不動(dòng)桿菌成為院內(nèi)感染性肺炎及菌血癥的主要致病菌[5]。耐藥節(jié)結(jié)化細(xì)胞分化家族(RND)在革蘭陰性菌耐藥性中扮演著重要角色，利用位于革蘭陰性菌細(xì)胞質(zhì)膜上的質(zhì)子驅(qū)動(dòng)力作為能量來源，與周質(zhì)間的膜融合蛋白和外膜蛋白作用，形成連續(xù)的三通道，將物質(zhì)直接運(yùn)出到細(xì)胞外。大部分可接合的質(zhì)體都有可確保接受者已沒有相同物質(zhì)的系統(tǒng)。被轉(zhuǎn)移的遺傳信息通常對接受者是有利的，包括抗藥性、其他異物耐受性、或使用新的代謝物的能力。這種有利的質(zhì)體可能被視為細(xì)菌的內(nèi)共生體[6]。一個(gè)細(xì)菌的DNA通過兩細(xì)菌間形成的特殊蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，接合菌毛，轉(zhuǎn)移到另一個(gè)細(xì)菌。當(dāng)細(xì)菌族群在自然環(huán)境中，在有抗生素的壓力之下，含有抗藥基因的細(xì)菌容易存活且能傳播抗藥基因，造成抗藥細(xì)菌大增。抗藥基因常通過質(zhì)體或跳躍子夾帶而傳播，可以進(jìn)入細(xì)胞造成抗藥性，或離開細(xì)胞而不具抗藥性。細(xì)菌的抗藥性族群在感受性菌株存在時(shí)會(huì)逐漸消失[7]。在抗生素治療停止之后，抗藥菌能持續(xù)一段時(shí)間。當(dāng)感受性菌存在時(shí)，它們可能重新繁衍個(gè)體。在沒有藥物壓力的情況下，感受性細(xì)菌比起抗藥菌有些微弱的存活優(yōu)勢，因?yàn)樗鼈儾挥煤馁M(fèi)能量去維持抗藥性基因，一段時(shí)間之后，就會(huì)擊敗抗藥菌，重新大量繁殖具有敏感性的細(xì)菌[8]。

[1]胥松，王小霞，張柏金.重癥監(jiān)護(hù)病房多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌感染的危險(xiǎn)因素分析[J].慢性病學(xué)雜志，2016(2)：128-130.

[2]周愛春.我院近5年革蘭氏陰性桿菌的分布及耐藥性變遷[J].社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2016(11)：53-56.

[3]郭湘，費(fèi)櫻.耐碳青霉烯酶類抗生素鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性及其對亞胺培南的耐藥機(jī)制[J].山東醫(yī)藥，2016(21)：19-21.

[4]潘穎穎，朱熠，莊建文，等.對人工染耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌物體表面消毒效果的研究[J].兵團(tuán)醫(yī)學(xué)，2016(1)：3-4.

[5]林云萬，梁穎茹，賀征，等.某院ICU多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌耐藥性和碳青霉烯酶耐藥基因分析[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2015(11)：1313-1315.

[6]NOWAK P，PALUCHOWSKA P，BUDAK A.Distribution of blaOXA genes among carbapenem-resistant acinetobacter baumannii nosocomial strains in Poland[J].New Microbiol，2012，35(3)：317-325.

[7]POIREL L，MARQUéS，HéRITIER C，et al.OXA-58，a novel class D {beta}-lactamase involved in resistance to carbapenems in Acinetobacter baumannii[J].Antimicrob Agents Chemother，2005，49(1)：202-208.

[8]LIMANSKY A S，MUSSI M A，VIALE A M，et al.Loss of a 29-kilodalton outer membrane protein in acinetobacter baumannii is associated with imipenem resistance[J].J Clin Microbiol，40(12)：4776-4778.

2017-03-14

(本文編輯：王作利)

R516

A

1671-8631(2017)12-0941-02

〔1〕本課題為贛州市指導(dǎo)性科技項(xiàng)目(課題編號(hào)：GZ2015ZSF333)

李小玉(1981— )，女，江西省贛州市人，學(xué)士學(xué)位，主管檢驗(yàn)師，主要從事免疫和微生物檢驗(yàn)工作。