淋巴結(jié)穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值

鄧彥東，馬曉雯，劉文聰，邵云，閆國超

(河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院，石家莊050031)

淋巴結(jié)穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值

鄧彥東，馬曉雯，劉文聰，邵云，閆國超

(河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院，石家莊050031)

目的探討超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合高遷移率族蛋白B1(HMGB1)、甲狀腺球蛋白(Tg)檢測對甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值。方法選取行甲狀腺乳頭狀癌根治術(shù)治療后因頸部淋巴結(jié)腫大再次入院患者75例，均進行二次手術(shù)切除腫大淋巴結(jié)，術(shù)后病理顯示淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例?；颊呔诙问中g(shù)前行超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查，并采用ELISA法檢測穿刺淋巴結(jié)組織HMGB1、Tg表達。以術(shù)后組織病理學診斷為金標準，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合淋巴結(jié)組織HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能。結(jié)果淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，漏診12例；診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特異性為100%，敏感性為82.1%(55/67)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者淋巴結(jié)組織HMGB1、Tg表達均高于未轉(zhuǎn)移者(P均<0.01)。淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg表達檢測診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性為97.0%、準確率為96.0%，均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查的100%。結(jié)論超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測可提高對甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷敏感性及準確性。

甲狀腺乳頭狀癌；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；細針穿刺細胞學檢查；超聲；高遷移率族蛋白B1；甲狀腺球蛋白

近年來甲狀腺癌發(fā)病率逐年上升，其中甲狀腺乳頭狀癌約占80%[1]。根治性手術(shù)是目前臨床治療甲狀腺乳頭狀癌的主要方法，多數(shù)患者預后良好；但仍有部分患者術(shù)后出現(xiàn)復發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，預后差。超聲引導下細針穿刺細胞學檢查是診斷淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移的最常用方法，診斷特異性高，但敏感性不足。惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展涉及多種基因的協(xié)同作用，且基因改變可能出現(xiàn)在細胞學改變之前[2,3]，因此尋找一種可行性高的術(shù)前篩查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法至關(guān)重要。高遷移率族蛋白B1(HMGB1)和甲狀腺球蛋白(Tg)均為甲狀腺癌的標志物[4,5]。本研究探討超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測對甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價值。

1 臨床資料

選取海南省人民醫(yī)院2012年6月～2013年12月行甲狀腺乳頭狀癌根治術(shù)治療，術(shù)后(2014年9月～2016年12月)因頸部淋巴結(jié)腫大再次入院的75例患者為研究對象，其中男33例、女42例，年齡19～63(45.3±9.4)歲。納入標準：①采用根治性手術(shù)切除腫瘤組織，術(shù)后病理證實為甲狀腺乳頭狀癌；②根據(jù)《2012中國甲狀腺結(jié)節(jié)和分化型甲狀腺癌指南》推薦的甲狀腺癌術(shù)后復發(fā)危險度分層為高危型；③患者自愿簽署知情同意書；④具有完整的長期隨訪資料，隨訪時間≥2年。排除標準：①肝、腎功能障礙；②妊娠期或哺乳期；③凝血功能異常；④免疫或代謝系統(tǒng)疾病?；颊呷朐汉缶卸问中g(shù)，將二次手術(shù)切除的頸部腫大淋巴結(jié)標本置于4%多聚甲醛中固定過夜，經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋等常規(guī)流程制備厚度為5～7 μm組織切片，二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫苯和水化，HE染色，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例(含多區(qū)域轉(zhuǎn)移)，包括Ⅵ區(qū)35例(52.2%)、Ⅱ區(qū)22例(32.8%)、Ⅲ區(qū)13例(19.4%)、Ⅳ區(qū)9例(13.4%)。

2 方法與結(jié)果

2.1 超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查 患者均于二次手術(shù)前行超聲引導下細胞學檢查。采用日本TSK株式會社20 G一次性介入穿刺針，取仰臥位，肩部墊高，先行彩色多普勒超聲(日本東芝，790A)掃描確定穿刺點，以病理變化較明顯且避開大血管和重要神經(jīng)的位置為穿刺點。穿刺點常規(guī)碘伏消毒，75.0%乙醇脫碘，1%利多卡因局部浸潤麻醉；進針直達淋巴結(jié)中心，負壓抽吸數(shù)次，吸出標本，推至載玻片上，立即涂片，均勻推開，自然晾干，95%乙醇固定2 h以上；HE染色，顯微鏡下觀察，將出現(xiàn)核溝、核內(nèi)假包涵體、毛玻璃樣核、多核巨細胞及砂礫體等細胞為陽性細胞。結(jié)果顯示，出現(xiàn)陽性細胞即淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，均與術(shù)后組織病理學(金標準)診斷一致；漏診12例；診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特異性為100%，敏感性為82.1%(55/67)。12例漏診患者中3例因抽吸樣本為液化組織，未能獲得細胞學結(jié)果；其余9例均在完成細胞學診斷的前提下漏診。

2.2 淋巴結(jié)組織HMGB1、Tg表達檢測 將2.1中細針穿刺所得組織標本與生理鹽水(1∶9)混勻，以電動勻漿器充分勻漿，4 000 r/min離心10 min，取上清液，采用全自動生化分析儀(AU5800，德國貝克曼)以ELISA法(試劑盒購自上海恒遠生物科技有限公司)檢測HMGB1、Tg表達。采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與非轉(zhuǎn)移者HMGB-1、Tg表達比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者淋巴結(jié)組織HMGB1、Tg表達分別為(16.35±3.12)、(1.15±0.52)ng/mL，淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移者分別為(12.26±2.85)、(0.84±0.41)ng/mL，兩者比較P均<0.01。

2.3 超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合淋巴結(jié)HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能 采用受試者工作特征(ROC)曲線分析超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合淋巴結(jié)HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能。結(jié)果顯示，HMGB1診斷甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的最佳截斷值為13.52 ng/mL(≥13.52 ng/mL為陽性，<13.52 ng/mL為陰性)，Tg診斷甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的最佳截斷值為1.06 ng/mL(≥1.06 ng/mL為陽性，<1.06 ng/mL為陰性)。淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg表達檢測診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性為97.0%、準確率為96.0%，均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查的100%。見表1、2。

表1 淋巴結(jié)HMGB1、Tg檢查結(jié)果與病理結(jié)果(例)

表2 淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查及HMGB1、Tg表達檢測對甲狀腺乳頭狀癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷效能(%)

3 討論

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，惡性程度低，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高(30%～80%)。術(shù)后復發(fā)和頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是導致甲狀腺癌患者死亡的主要原因[6]。既往研究多集中于甲狀腺乳頭狀癌的術(shù)前淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率及轉(zhuǎn)移模式，而對于術(shù)后轉(zhuǎn)移研究較少。

目前，確定淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的金標準仍然是病理學診斷，但該結(jié)果只能在再次手術(shù)后獲得，不適合術(shù)前篩查。術(shù)前篩查淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法主要有正電子發(fā)射型計算機斷層掃描、CT、MRI、超聲、細針穿刺細胞學檢查等。其中，正電子發(fā)射型計算機斷層掃描診斷敏感性和特異性均較高，但費用昂貴，不易普及[7]；CT、MRI檢查對大體積淋巴結(jié)的診斷敏感性較高，對于直徑<1 cm者難以定性；彩色多普勒超聲具有操作簡單、安全無創(chuàng)、經(jīng)濟實用等優(yōu)點，是頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移常用檢查工具之一，尤其適用于臨床篩查，但其診斷敏感性和特異性均不理想[8]；細針穿刺細胞學檢查因取樣范圍及取樣量有限，容易發(fā)生漏診[9]。Tg是甲狀腺腫瘤的經(jīng)典標記物，主要由甲狀腺濾泡上皮分泌，存在于甲狀腺組織，只有少量進入血液循環(huán)，在甲狀腺炎癥、甲狀腺結(jié)節(jié)、甲狀腺癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中其表達均顯著升高[10，11]。血清Tg水平受多種因素影響，促甲狀腺素可促進Tg分泌，INF-γ、TNF-α和維甲酸可抑制Tg分泌。甲狀腺乳頭狀癌患者經(jīng)手術(shù)、淋巴結(jié)清掃和131I治療后，其細胞和組織中Tg應處于極低水平，對于術(shù)后Tg仍較高者，應考慮復發(fā)或淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性[12]。既往研究顯示，單純檢測Tg診斷甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后復發(fā)的敏感性為55%～80%[13]。高遷移率族蛋白(HMG)在高等動物的基因復制、重組、轉(zhuǎn)錄等方面均發(fā)揮重要調(diào)控作用，根據(jù)分子量和分子結(jié)構(gòu)可分為A、B、N三個家族，其中HMGB1在B家族含量最為豐富，是一個高度保守的序列，在哺乳動物中其基因序列具有高度同源性[14]。細胞外的HMGB1與受體結(jié)合后可刺激細胞增殖、分化、遷移，并誘發(fā)炎性反應，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及炎性浸潤密切相關(guān)。當細胞發(fā)生壞死和損傷后，HMGB1由細胞內(nèi)釋放入血，其組織表達升高；當發(fā)生腫瘤時，局部組織可釋放大量HMGB1，造成慢性炎癥，同時破壞健康細胞，促進腫瘤細胞向周圍組織浸潤與遷移。有研究報道，甲狀腺乳頭狀癌患者HMGB1表達高于健康人群，且頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者HMGB1表達高于非轉(zhuǎn)移者[15]。

本研究經(jīng)術(shù)后病理證實發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例(含多區(qū)域轉(zhuǎn)移者)，以Ⅵ區(qū)最為常見，無Ⅰ區(qū)轉(zhuǎn)移者，與其他報道[11]基本相似。術(shù)前淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移55例，12例漏診，診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的特異性為100%，敏感性為82.1%；12例漏診者中3例因抽吸樣本為液化組織，無法判斷細胞結(jié)構(gòu)，其余9例漏診原因可能為細針穿刺取樣范圍局限，未獲得完整細胞，或該區(qū)域細胞尚未出現(xiàn)典型的惡性形態(tài)特征[11,12]。

分析本研究結(jié)果，超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測診斷診斷甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的敏感性和準確率均高于各項單項檢測；診斷特異性為87.5%，低于淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查的100%。

綜上所述，超聲引導下淋巴結(jié)細針穿刺細胞學檢查聯(lián)合HMGB1、Tg檢測可提高甲狀腺乳頭狀癌術(shù)后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷敏感性及準確性。

[1] Yu XM, Schneider DF, Leverson G, et al. Follicular variant of papillary thyroid carcinoma is a unique clinical entity: a population-based study of 10,740 cases[J]. Thyroid, 2013,23(10):1263-1268.

[2] Haugen BR, Alexander EK, Bible KC, et al. 2015 American thyroid association management guidelines for adult patients with thyroid nodules and differentiated thyroid cancer: the American thyroid association guidelines task force on thyroid nodules and differentiated thyroid cancer[J]. Thyroid, 2016,26(1):1-133.

[3] 孫勤暖,李冬梅,吳罡,等.甲狀腺乳頭狀癌患者組織、癌組織中p53、Fas、TNF-α和Cyclin E的表達及臨床意義[J].中國免疫學雜志,2014,30(10):1383-1387.

[4] 壽金朵,蔣賢鋒,朱江,等.術(shù)前超聲引導淋巴結(jié)細針穿刺檢查聯(lián)合洗脫液甲狀腺球蛋白測定對診斷甲狀腺乳頭狀癌側(cè)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值[J].中華普通外科雜志,2016,31(12):989-992.

[5] 蘇巖.超聲聯(lián)合組織高遷移率蛋白-1診斷老年甲狀腺乳頭狀癌患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的價值[J].中國老年學雜志,2016,36(21):5344-5346.

[6] 邢蘭蘭,陳松,李亞明.乳頭狀甲狀腺癌術(shù)后復發(fā)的相關(guān)因素分析[J].同位素,2014,27(1):22-27.

[7] 董占飛,趙志偉,趙艷萍,等. ～(99m)TcN-NOET顯像SPECT/CT檢查在分化型甲狀腺癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移判斷中的應用[J].山東醫(yī)藥,2016,56(7):80-81.

[8] 潘莉莉,潘哲,李云川.超聲診斷甲狀腺乳頭狀癌根治術(shù)后復發(fā)[J].中國老年學雜志,2012,32(23):5301-5302.

[9] 方慶全,涂金花,肖方森,等.細針穿刺制作細胞塊結(jié)合分子標志物診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的價值[J].中華內(nèi)分泌代謝雜志,2015,31(11):932-936.

[10] 孫亞楠,劉曉虹,毛曉韻,等.甲狀腺乳頭狀癌組織Bag-1、Bcl-2蛋白表達變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2015,55(31):11-13.

[11] Spencer C, LoPresti J, Fatemi S. How sensitive (second-generation) thyroglobulin measurement is changing paradigms for monitoring patients with differentiated thyroid cancer, in the absence or presence of thyroglobulin autoantibodies[J]. Curr Opin Endocrinol Diabetes Obes, 2014,21(5):394-404.

[12] 岳寧,趙偉,霍宗偉,等.甲狀腺癌患者～(131)Ⅰ全身顯像相關(guān)參數(shù)與Tg相關(guān)性分析[J].中華腫瘤防治雜志,2015,22(20):1628-1633.

[13] 范志娜,吳剛,袁建軍.超聲聯(lián)合組織Tg、SPECT/CT診斷分化型甲狀腺癌術(shù)后頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[J].中國醫(yī)學影像技術(shù),2014,30(3):362-365.

[14] Xu YF, Ge FJ, Han B, et al. High-mobility group box 1 expression and lymph node metastasis in intrahepatic cholangiocarcinoma[J]. WJG, 2015,21(11):3256-3265.

[15] 李新宇,張超,杜春梅,等.甲狀腺乳頭狀癌患者腫瘤組織中HMGB-1的表達及其臨床意義[J].中國地方病防治雜志,2016,31(7):768-770.

邵云(E-mail: 13331369972@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.44.029

R736.1

B

1002-266X(2017)44-0089-03

2017-03-06)