布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響及其作用靶點(diǎn)研究

陳玉興，李茹月，黃雪君，曾曉會，甘海寧

（1廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院／廣東省中醫(yī)藥研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州510095；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州510405）

布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響及其作用靶點(diǎn)研究

陳玉興1，李茹月2，黃雪君1，曾曉會1，甘海寧1

（1廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院／廣東省中醫(yī)藥研究開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州510095；2廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州510405）

目的探討布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響及其作用靶點(diǎn)。方法選取70只SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型對照組、非諾貝特組、血脂康組以及布芍調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組。除正常對照組外，其余各組采用高脂飼料制備高脂血癥大鼠模型，連續(xù)8周，第5周開始灌胃給藥，末次給藥后1 h麻醉大鼠，采血并分離血清測定TC、TG、HDL－C、LDL－C、ApoA1、ApoB；取肝組織測定TC、TG水平及LCAT、LXR－α基因表達(dá)。結(jié)果與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊明顯降低血清TC、TG、LDL－C、ApoB水平，升高HDL－C、ApoA1水平，提高ApoA1／ApoB比值，且能夠降低肝臟TC、TG水平，促進(jìn)肝臟LCAT、LXR－α基因表達(dá) （P均<0.01）。結(jié)論布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝有較好的調(diào)節(jié)作用。

布芍調(diào)脂膠囊；高脂血癥；脂質(zhì)代謝

高脂血癥是誘發(fā)動脈粥樣硬化的首要原因，與冠心病、腦血管病、肥胖、脂肪肝等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［1］，危害嚴(yán)重，目前臨床首選西藥降脂藥，如他汀類藥物、貝特類藥物等，但臨床長期服用常伴有不同程度的不良反應(yīng)，患者依從性較差。中醫(yī)藥調(diào)血脂有一定療效且安全性較高，從中醫(yī)藥中研究開發(fā)降脂新藥尤為重要［2］。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為高脂血癥基本病機(jī)為脾虛失運(yùn)，腎精虧虛，肝失疏泄，痰瘀阻絡(luò)［3］，布芍調(diào)脂膠囊藥味組成包括布渣葉、莪術(shù)、赤芍和穿心蓮，有消食化滯和活血祛瘀等多種作用，臨床常用于治療氣滯血瘀型高脂血癥，獲得良好療效。本實(shí)驗(yàn)主要研究布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠的調(diào)血脂作用，為布芍調(diào)脂膠囊的臨床使用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1．1 實(shí)驗(yàn)動物 Sprague-Dawley（SD）大鼠70只，SPF級，廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物的質(zhì)量合格證號為NO0109400。

1．2 實(shí)驗(yàn)藥物 布芍調(diào)脂膠囊 （廣東省第二中醫(yī)院制劑室產(chǎn)品，批號為120403）；非諾貝特膠囊 （法國利博福尼制藥公司產(chǎn)品，批號為16965）；血脂康膠囊 （北京北大維信生物科技有限公司產(chǎn)品，批號為20111108）。

1．3 主要試劑 豬油 （市售豬板油臨用現(xiàn)煉）；丙基硫氧嘧啶（廣州康和藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號為20111219）；Cholesterin gepulvert， Art．3672 （ E．Merck， Darmstadt 產(chǎn) 品 ， 批 號 為448K4728672）；TC試劑盒、TG試劑盒 （上?？菩郎锛夹g(shù)研究所產(chǎn)品，批號為 20120509、20120517）；HDL－C試劑盒、LDL－C試劑盒 （中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品，批號為120441、120471）；LPL／HL測試盒 （南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號為20120526）；ApoA1測定試劑盒、ApoB測定試劑盒 （上海榮盛生物藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批號為20120418、20120522）； TRIzol、 M－MLV First Strand Kit、 Platinum SYBR Green qPCR SuperMix－UDG （美國Invitrogen公司產(chǎn)品，批號為14105、8212090、8212106）；特異性引物 （上海英濰捷基貿(mào)易有限公司產(chǎn)品）；異丙醇、氯仿和無水乙醇等均為國產(chǎn)產(chǎn)品。

1．4 儀器 BS224S電子天平 （購自德國 SARTORIUS公司）；JJ3000雙杰牌電子秤 （購自G＆G公司）；HH－6數(shù)顯恒溫水浴鍋 （購自金壇市富華儀器有限公司）；3K30離心機(jī) （購自SIGMA公司）；UV－2501PC型紫外分光光度計(jì) （購自日本SHIMADZU公司）；5424型小型高速離心機(jī) （購自德國Eppendorf公司）；－80℃ 超低溫冰箱 （購自美國 Thermo公司）；IQTM5型熒光定量PCR儀 （購自美國 Bio－Rad公司）；SmartSpec plus核酸蛋白測定儀 （購自美國 Bio－Rad公司）；Milli Q Plus超級純水儀 （購自美國Millipore公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2．1 分組、造模及給藥 將大鼠按體重隨機(jī)分為7組各10只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。分別為正常對照組、模型對照組、非諾貝特組 （49．5 mg 藥粉 ／kg）、 血脂康組 （0．108 g 藥粉 ／kg） 以及布芍調(diào)脂膠囊高、 中、 低劑量組 （5．76、 2．88、 1．44 g 生藥／kg）。上午9時左右，正常對照組給予正常飼料，其余各組造模大鼠每籠給予定量高脂飼料［4］200 g／d（含 2%膽固醇、10%豬油、0．2%丙基硫氧嘧啶、87．8%基礎(chǔ)飼料），下午5時左右換成正常飼料100 g，飲水自由，每天重復(fù)上述操作，連續(xù)8周。第4周末，各組大鼠禁食不禁水16 h，從其眼眶靜脈叢采血約1 mL，離心分離血清，測定血清TC、TG水平作為大鼠給藥前的血脂水平。從第5周開始，各給藥組大鼠每天按劑量給予相應(yīng)藥物灌胃，正常對照組、模型對照組同法給予等量蒸餾水灌胃，每天1次，連續(xù)4周。給藥期間，各組大鼠造模方法同前述。

2．2 指標(biāo)測定 于第8周末末次給藥前各組大鼠均禁食不禁水16 h，末次給藥后1 h，大鼠眼眶靜脈叢取血，離心分離血清按試劑盒說明書測定總膽固醇 （TC）、甘油三酯 （TG）、高密度脂蛋白膽固醇 （HDL－C）、低密度脂蛋白膽固醇 （LDL－C）、載脂蛋白AⅠ （ApoA1）、載脂蛋B （ApoB）。取肝臟小塊，按試劑盒說明書測定肝臟TC、TG水平和卵磷脂膽固醇脂?；D(zhuǎn)移酶 （LCAT）、肝X受體 α（LXR－α）的基因表達(dá)。結(jié)果用SPSS 22．0 統(tǒng)計(jì)軟件 One－Way ANOVA S－N－K 法分析處理。

3 結(jié)果

3．1 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清TC、TG水平的影響 給藥前，與正常對照組比較，各組造模大鼠的血清TC、TG水平均顯著升高 （P＜0．01）。給藥4周后，與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組的TC、TG水平均顯著降低（P ＜0．01）。 見表 1。

表1 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清TC、TG水平的影響（n=10； ±s， mmol／L）

表1 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清TC、TG水平的影響（n=10； ±s， mmol／L）

注：非諾貝特組、血脂康組、布芍調(diào)脂膠囊劑量單位分別為mg藥粉 ／kg、 g 藥粉 ／kg、 g 生藥 ／kg。 與正常對照組比較， *P ＜0．01； 與模型對照組比較， ＃P ＜0．01。

組別 劑量 給藥前 給藥后TC TG TC TG高劑量組 5．76 7．813±0．984*2．798±0．308* 5．284±1．244＃ 1．556±0．299＃中劑量組 2．88 7．741±0．753*2．790±0．302* 5．792±1．446＃ 1．917±0．464＃低劑量組 1.44 7．959±1．034*2．750±0．311* 6．585±1．131＃ 2．162±0．772＃血脂康組 0．108 7．801±1．240*2．580±0．153* 5．812±2．120＃ 2．434±0．638＃非諾貝特組 49．5 7．647±0．901*2．631±0．430* 6．272±1．268＃ 1．484±0．457＃模型對照組 － 7．729±0．528*2．696±0．186* 8．084±0．538*3．247±0．639*正常對照組 － 1．920±0．197 0．888±0．111 1．886±0．190 0．975±0．134

3．2 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影響 給藥4周后，與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組的 HDL－C水平均顯著升高 （P＜0．01），LDL－C 水平均明顯下降 （P ＜0．01）。 見表 2。

表2 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影響 （n=10； ±s， mmol／L）

表2 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清HDL－C、LDL－C水平的影響 （n=10； ±s， mmol／L）

注：各組劑量單位同表1。與正常對照組比較，*P＜0．01；與模型對照組比較， ＃P ＜0．01。

組別 劑量 HDL－C LDL－C高劑量組 5．76 1．766±0．308＃ 1．011±0．305＃中劑量組 2．88 1．699±0．625＃ 1．111±0．447＃低劑量組 1.44 1．545±0．270＃ 1．202±0．393＃血脂康組 0．108 1．674±0．451＃ 1．279±0．287＃非諾貝特組 49．5 1．324±0．327＃ 0．884±0．243＃模型對照組 － 0．895±0．217* 1．720±0．285*正常對照組 － 1．932±0．542 0．604±0．103

3．3 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影響 給藥4周后，與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊高、中劑量組的 ApoA1水平均明顯升高 （P＜0．01），ApoB水平均顯著降低 （P ＜0．01）， ApoA1／ApoB 比值均明顯升高 （P ＜0．01）。 見表 3。

表3 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影響 （n=10； ±s）

表3 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠血清ApoA1、ApoB水平的影響 （n=10； ±s）

注：各組劑量單位同表1。與正常對照組比較，*P＜0．01；與模型對照組比較， ＃P ＜0．01。

ApoB （g／L） ApoA1／ApoB 1．295±0．337＃0．941±0．228＃0．668±0．319 0．880±0．265＃0．970±0．368＃0．363±0．092*正常對照組 － 0．240±0．035 0．110±0．026 2．305±0．665組別 劑量 ApoA1 （g／L）高劑量組 5．76 0．211±0．043＃0．173±0．060＃中劑量組 2．88 0．185±0．030＃低劑量組 1.44 0．155±0．030血脂康組 0．108 0．209±0．026＃非諾貝特組 49．5 0．179±0．029＃模型對照組 － 0．128±0．022*0．208±0．065＃0．262±0．087 0．260±0．089＃0．204±0．064＃0．360±0．057*

3．4 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟TC、TG水平的影響 給藥4周后，與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組的肝臟TC、TG水平均明顯降低 （P＜0．01）。見表4。

表4 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟TC、TG水平的影響（n=10； ±s， mg／g）

表4 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟TC、TG水平的影響（n=10； ±s， mg／g）

注：各組劑量單位同表1。與正常對照組比較，*P＜0．01；與模型對照組比較， ＃P ＜0．01。

組別 劑量 肝臟TC 肝臟TG高劑量組 5．76 5．079±0．559＃ 3．942±0．397＃中劑量組 2．88 5．499±0．443＃ 4．173±0．538＃低劑量組 1.44 5．738±0．374＃ 4．306±0．312＃血脂康組 0．108 6．074±1．186＃ 5．111±0．514＃非諾貝特組 49．5 6．920±0．767＃ 4．319±0．704＃模型對照組 － 10．440±1．464* 5．922±0．541*正常對照組 － 4．055±0．276 1．673±0．249

3．5 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟LCAT、LXR－α基因表達(dá)的影響 給藥4周后，與模型對照組比較，布芍調(diào)脂膠囊高、中、低劑量組大鼠肝臟LCAT、LXR－α基因相對表達(dá)量均顯著升高 （P ＜0．01）。 見表 5。

表5 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟LCAT、LXR－α基因表達(dá)的影響 （n=10； ±s）

表5 布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥模型大鼠肝臟LCAT、LXR－α基因表達(dá)的影響 （n=10； ±s）

注：各組劑量單位同表1。與正常對照組比較，*P＜0．01；與模型對照組比較， ＃P ＜0．01。

組別 劑量 LCAT基因相對表達(dá)量 LXR－α基因相對表達(dá)量高劑量組 5．76 1．138±0．395＃ 2．334±0．679＃中劑量組 2．88 0．955±0．321＃ 1．975±0．611＃低劑量組 1.44 0．654±0．200＃ 1．057±0．299＃血脂康組 0．108 0．818±0．232＃ 1．473±0．425＃非諾貝特組 49．5 0．868±0．264＃ 1．825±0．580＃模型對照組 － 0．322±0．089* 0．432±0．223*正常對照組 － 1．000±0．327 1．000±0．172

3 討論

隨著生活水平的不斷提高，我國高脂血癥患者數(shù)量也不斷上升，現(xiàn)已達(dá)1．6億左右。高脂血癥主要依靠藥物治療，但我國2 136例高膽固醇血癥患者的用藥情況調(diào)查結(jié)果顯示，通過藥物控制血脂的達(dá)標(biāo)率僅為26．5%，現(xiàn)階段血脂異常的防范控制情況已非常嚴(yán)峻。高脂血癥藥物需要長期服用，臨床反映西藥的療效較好，但長期服用會導(dǎo)致肝腎功能損害、肌溶解，還存在停藥后血脂反跳現(xiàn)象，這些不良反應(yīng)一直未能解決，這也是西藥治療高脂血癥的難題。由于高脂血癥病因機(jī)制復(fù)雜多變，還可誘發(fā)多器官、多靶點(diǎn)同時產(chǎn)生病變，與西藥比較，中藥多組分、多靶點(diǎn)、整體調(diào)節(jié)的特性會更加對應(yīng)契合高脂血癥的病因機(jī)制，開發(fā)中藥治療高脂血癥具有廣闊的應(yīng)用前景。

布芍調(diào)脂膠囊為我院臨床應(yīng)用多年的制劑，由布渣葉、赤芍、莪術(shù)、穿心蓮組成，方中用布渣葉消食化積為君藥，莪術(shù)行氣、活血通脈，赤芍散瘀、使血循暢達(dá)，共奏活血祛瘀、行氣破血之功，同為臣藥，配穿心蓮，性寒味苦，入大腸、膀胱經(jīng)，助主藥以清利濕熱，全方合用旨在消食化滯、活血祛瘀，臨床用于治療氣滯血瘀型高脂血癥可取得較好療效。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，布芍調(diào)脂膠囊可降低高脂血癥大鼠的TC、TG、LDL－C水平，升高 HDL－C水平，降低肝臟 TG、TC水平，與臨床應(yīng)用情況基本一致。

研究［5］顯示，HDL的主要作用是將肝外組織的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟中消除。ApoA1是HDL主要的載脂蛋白，是LCAT的必需激活劑，通過ApoA1實(shí)現(xiàn)HDL的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)TC，增強(qiáng)脂質(zhì)清除功能，加速TC的清除。LDL為主要的致動脈粥樣硬化性脂蛋白，ApoB是LDL的載脂蛋白。ApoA1／ApoB反映機(jī)體調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的水平［6］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，布芍調(diào)脂膠囊可降低血清ApoB，升高ApoA1，提高ApoA1／ApoB比值，說明布芍調(diào)脂膠囊可通過調(diào)節(jié)ApoA1和ApoB代謝而調(diào)節(jié)血脂。

肝臟是機(jī)體內(nèi)重要的脂質(zhì)合成和代謝場所，機(jī)體的脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運(yùn)還與多種脂蛋白、 酶類等密切相關(guān)。HDL代謝過程中的關(guān)鍵酶LCAT就存在于肝臟中，是脂代謝過程中的重要酶，能將一個脂肪酸從卵磷脂轉(zhuǎn)移至新生HDL的FC中形成膽固醇脂 （CE），CE構(gòu)成HDL3的中性脂質(zhì)核心，LCAT進(jìn)一步活化產(chǎn)生更多的CE進(jìn)入HDL3核心，形成HDL2，在HDL2與富含TG的脂蛋白間，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白進(jìn)行膽固醇酯與TG的互換，此過程將實(shí)現(xiàn)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)和血漿膽固醇的持續(xù)下降［7］。LXR－α為LXR亞型之一，能在肝臟中高表達(dá)，與氧化的膽固醇衍生物結(jié)合并激活，激活后LXR－α可增加ABCG5／G8的表達(dá)，促進(jìn)膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸排泄進(jìn)入膽汁［8］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，布芍調(diào)脂膠囊可明顯提高LCAT、LXR－α基因表達(dá)量，從而促進(jìn)機(jī)體脂質(zhì)代謝轉(zhuǎn)運(yùn)，這可能是其降脂作用機(jī)制之一。

本研究初步探討了布芍調(diào)脂膠囊對高脂血癥大鼠脂質(zhì)代謝的影響及其相關(guān)作用靶點(diǎn)，更深入的研究有待繼續(xù)進(jìn)行。

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Study on the Effect of Bushao Lipid Regulating Capsule on Lipid Metabolism and Its Related Targets in Hyperlipidemic Rats

CHEN Yuxing1,LI Ruyue2,HUANG Xuejun1,ZENG Xiaohui1,GAN Haining1
(1Guangdong Province Engineering Technology Research Institute of TCM/Guangdong Provincial Key Laboratory of Research and Development in Traditional Chinese Medicine,Guangzhou 510095,China;2Guangzhou Universisty of Chinese Medicine,Guangzhou 510405,China)

ObjectiveTo explore the effect of Bushao lipid regulating capsule on lipid metabolism and its related targets in hyperlipidemic rats.Methods70 SD rats were selected and randomly divided into seven groups,including normal control group,model control group,fenofibrate group,Xuezhikang group and high-dose group,middle-dose group and low-dose group of Bushao regulating capsule.Excepting normal control group,the rat models with hyperlipidemia of each group were established by high fat diet for 8 weeks.Intragastric administration was given at the fifth week.Rats were anesthetized at 1 h after the last administration,and their blood was collected and separated for the detection of TC,TG,HDL-C,LDL-C,ApoA1 and ApoB levels.The TC and TG levels as well as the gene expression of LCAT and LXR-α were detected in hepatic tissue.ResultsCompared with the model control group,Bushao lipid regulating capsules significantly reduced the serum TC,TG,LDL-C and ApoB levels,improved the HDL-C and ApoA1 levels and ApoA1/ApoB ratio,reduced the hepatic TC and TG levels and promoted hepatic LCAT and LXR-α gene expression(all P ＜0.05).ConclusionsBushao lipid regulating capsule has a good regulatory effect on lipid metabolism of hyperlipidemic rats.

Bushao lipid regulating capsule;Hyperlipidemia;Lipid metabolism

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.11.1525

2017－06－08

2017-08-24

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目 （項(xiàng)目編號：2013B060300034；2014A070705014； 2015A040404030）

陳玉興 （1971－），男，海南籍，主任中藥師，主要從事中藥藥理學(xué)研究工作，E-mail：cyx89333@qq.com。

（責(zé)任編輯：常海慶）