肇慶市某醫(yī)院手足口病患兒的免疫功能分析

吳小文，申學(xué)基，區(qū)惠梅，蔡健梅

（廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 肇慶526021）

肇慶市某醫(yī)院手足口病患兒的免疫功能分析

吳小文，申學(xué)基，區(qū)惠梅，蔡健梅

（廣東省肇慶市第一人民醫(yī)院 檢驗(yàn)科，廣東 肇慶526021）

目的分析手足口病患兒的免疫功能。方法選取328例手足口病患兒，檢測(cè)其血清IgG、IgM、IgA、C3、C4水平，以58例同期健康體檢兒童作為對(duì)照組進(jìn)行比較。結(jié)果普通組與對(duì)照組的IgG、IgM、IgA、C4水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；重癥組與對(duì)照組的IgG、IgA水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；普通組與重癥組的IgM水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。四個(gè)不同年齡組兒童的IgG、IgA水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；IgM水平在＜1歲組最低，與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。結(jié)論感染手足口病毒后，患兒的免疫功能會(huì)發(fā)生改變，IgG、IgM、IgA水平變化明顯，而C3、C4水平則相對(duì)穩(wěn)定，按年齡分組討論手足口病更有實(shí)際指導(dǎo)意義。

手足口病；兒童；免疫功能

手足口病 （hand－foot－mouth disease， HFMD） 是兒科常見的傳染病之一，發(fā)病主要集中在5歲以下兒童，臨床上以手、足、臀部、口腔等部位出現(xiàn)皮疹或皰疹為主要特征。很多病毒都可引起HFMD，如柯薩奇病毒、?？刹《?、新腸道病毒等，其中以柯薩奇病毒 A組 16型 （CA16）及腸道病毒 71型（EV71）最常見。大多數(shù)患兒的癥狀較輕，在1周內(nèi)便可痊愈，預(yù)后情況良好，而有少數(shù)患兒可能會(huì)出現(xiàn)心肌炎、肺水腫、無菌性腦炎、膜腦炎等危重癥狀。HFMD的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，有研究［1］推測(cè)可能與病毒直接侵犯組織細(xì)胞 （如腦細(xì)胞）或病毒膿毒癥所致的異常免疫反應(yīng)有關(guān)。本研究從臨床癥狀嚴(yán)重程度、CA16和EV71感染情況、年齡分布等方面探討HFMD與患兒免疫功能的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1．1 研究對(duì)象 選取我院 2014年 1月至 2017年 5月診斷為HFMD的328例患兒作為研究對(duì)象，其中普通組 （254例）男172例、女82例，年齡1個(gè)月 ~12歲；重癥組 （74例）男49例、女25例，年齡2個(gè)月~8歲。另外選取58例同期健康體檢兒童作為對(duì)照組，男38例，女20例；年齡2個(gè)月 ~12歲。三組兒童的年齡、性別、體重等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1．2 診斷標(biāo)準(zhǔn) 按照2010年國(guó)家衛(wèi)生部頒布的 《手足口病診療指南》［2］的診斷標(biāo)準(zhǔn)納入研究對(duì)象。

1．3 排除標(biāo)準(zhǔn) 皰疹性咽峽炎、過敏性蕁麻疹、水痘、口腔潰瘍、汗皰疹等易與HFMD混淆的疾??；檢測(cè)前一個(gè)月內(nèi)使用過激素、血液制品、免疫抑制劑、免疫增強(qiáng)劑等會(huì)導(dǎo)致機(jī)體免疫功能發(fā)生變化的藥物；因患結(jié)核、腫瘤等進(jìn)行過放療或化療。

1．4 儀器與試劑 采用美國(guó)ABI 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀檢測(cè)CA16和EV71，試劑由湖南圣湘生物科技有限公司提供；采用美國(guó)雅培i2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以及廠家配套專用試劑檢測(cè)血清免疫五項(xiàng) （IgG、IgM、IgA、C3、C4）水平。

1．5 方法

1．5 ．1 標(biāo)本采集 在兒童本人 （或家長(zhǎng)）知情同意的情況下，用真空干燥管采集空腹靜脈血2 mL檢測(cè)免疫五項(xiàng)；用專用采樣棉簽采集患兒發(fā)病3天內(nèi)咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位的咽拭子檢測(cè)CA16和EV71。

1．5 ．2 免疫五項(xiàng)檢測(cè) 采集靜脈血樣后，3 500 r／min離心 10 min分離出血清，然后用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)免疫五項(xiàng)水平。實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按說明書要求進(jìn)行，檢測(cè)方法為免疫透射比濁法。

1．5 ．3 CA16和EV71檢測(cè) 采集咽拭子樣本后，嚴(yán)格按說明書要求用磁珠法提取核酸，然后吸取5 μL提取好的核酸加到45 μL擴(kuò)增反應(yīng)試劑中組成一個(gè)獨(dú)立反應(yīng)體系，并用PCR擴(kuò)增儀按設(shè)定程序進(jìn)行擴(kuò)增。

1．6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17．0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0．05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 普通組和重癥組CA16和EV71感染情況分布 普通組與重癥組的EV71感染情況分布比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）。 見表 1。

表1 普通組和重癥組CA16和EV71感染情況分布 ［n（%）］

2．2 普通組、重癥組和對(duì)照組的免疫五項(xiàng)水平比較 IgG、IgM、IgA水平在普通組、重癥組和對(duì)照組均呈遞增趨勢(shì)；C3、C4水平在普通組和重癥組均十分接近，且略高于對(duì)照組。普通組與對(duì)照組的IgG、IgM、IgA、C4水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．05）；重癥組與對(duì)照組的IgG、IgA水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；普通組與重癥組的IgM水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P ＜0．05）。 見表 2。

表2 普通組、重癥組和對(duì)照組的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

表2 普通組、重癥組和對(duì)照組的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

注： 與對(duì)照組比較， ▲P ＜0．05； 與重癥組比較， ◆P ＜0．05。

組別 例數(shù) IgG IgM IgA C3 C4重癥組 74 8．19±3．36▲ 1．54±0．74 0．62±0．47▲ 1．13±0．30 0．31±0．14普通組 254 7．51±2．48▲ 1．26±0．57▲◆ 0．62±0．49▲ 1．13±0．23 0．31±0．12▲對(duì)照組 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

2．3 CA16和EV71不同感染情況組的免疫五項(xiàng)水平比較 IgG水平：?jiǎn)蜟A16陽(yáng)性組、單EV71陽(yáng)性組、雙陽(yáng)性組、雙陰性組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。IgM水平：雙陰性組與對(duì)照組、單EV71陽(yáng)性組、雙陽(yáng)性組比較，雙陽(yáng)性組與單CA16陽(yáng)性組比較，單CA16陽(yáng)性組與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。IgA水平：雙陰性組與其余組別比較，單CA16陽(yáng)性組、單EV71陽(yáng)性組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。C4水平：?jiǎn)?CA16陽(yáng)性組、單EV71陽(yáng)性組、雙陽(yáng)性組與對(duì)照組比較，雙陰性組與單CA16陽(yáng)性組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）。見表3。

表3 CA16和EV71不同感染情況組和對(duì)照組的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

表3 CA16和EV71不同感染情況組和對(duì)照組的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

注： 與對(duì)照組比較， ▲P ＜0．05； 與單 CA16陽(yáng)性組比較， ◆P ＜0．05； 與單 EV71陽(yáng)性組比較， △P ＜0．05； 與雙陽(yáng)性組比較， ◇P ＜0．05。

組別 例數(shù) IgG IgM IgA C3 C4雙陽(yáng)性組 25 7．56±2．01▲ 1．66±0．48▲ 0．80±0．53 1．14±0．22 0．32±0．10▲單 CA16 陽(yáng)性組 56 7．61±2．37▲ 1．34±0．55▲ 0．73±0．52▲ 1．16±0．24 0．34±0．13▲單 EV71 陽(yáng)性組 64 8．24±3．05▲ 1．52±0．64 0．72±0．52▲ 1．15±0．21 0．32±0．13▲雙陰性組 183 7．49±2．76▲ 1．20±0．62▲△□ 0．52±0．44▲◆△◇ 1．11±0．27 0．29±0．12◆對(duì)照組 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

表4 不同年齡組患兒的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

表4 不同年齡組患兒的免疫五項(xiàng)水平比較 （±s，g／L）

注： 與對(duì)照組比較， ▲P ＜0．05； 與＜1 歲組比較， ◆P ＜0．05； 與 1 歲組比較， △P ＜0．05； 與 2～3 歲組比較， ◇P ＜0．05。

組別 例數(shù) IgG IgM IgA C3 C4＜1 歲 74 5．89±1．88▲ 0．92±0．47▲ 0．25±0．13▲ 1．05±0．30 0．29±0．11 1 歲 113 7．46±2．43▲◆ 1．39±0．61◆ 0．43±0．22▲◆ 1．10±0．20 0．29±0．13 2～3 歲 105 8．19±2．02▲◆△ 1．48±0．63◆ 0．80±0．42◆△ 1．19±0．25▲◆△ 0．32±0．13▲4～12 歲 36 10．39±3．89◆△◇ 1．47±0．56◆ 1．42±0．60▲◆△◇ 1．20±0．19◆△ 0．33±0．12▲對(duì)照組 58 9．48±2．43 1．58±0．64 0．97±0．59 1．10±0．29 0．26±0．12

2．4 不同年齡組患兒的免疫五項(xiàng)水平比較 IgG、IgM、IgA、C3、C4水平均隨患兒年齡增加呈遞增趨勢(shì)，IgG、IgM、IgA水平隨年齡變化的幅度較C3、C4水平變化幅度明顯。四個(gè)年齡組患兒的IgG、IgA水平比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；IgM水平在＜1歲組最低，與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；患兒2歲前后的C3水平比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0．05）；四個(gè)年齡組患兒的C4水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0．05）。 見表 4。

3 討論

臨床醫(yī)生初次擬診HFMD往往以手、足、臀部、口腔等部位是否有皰疹以及精神狀態(tài)等作為依據(jù)，但有些患兒的臨床癥狀較輕，表現(xiàn)不典型或呈隱性感染狀態(tài)，因此部分輕癥病例往往會(huì)被忽略。引起HFMD的病毒有多種，但一般實(shí)驗(yàn)室通常只檢測(cè)最常見的CA16和EV71兩種，因此實(shí)驗(yàn)室的陽(yáng)性檢出率會(huì)低于實(shí)際情況。本研究結(jié)果顯示，普通組CA16陽(yáng)性率和EV71陽(yáng)性率相近，而重癥組CA16陽(yáng)性率則明顯低于EV71陽(yáng)性率，表明重癥HFMD主要與EV71感染有關(guān)，這與其他相關(guān)研究［3－7］結(jié)果一致。

以往人們多數(shù)從血常規(guī)、心肌酶譜、心電圖、腦電圖、腦脊液等方面變化來研究HFMD患兒身體功能的改變?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析HFMD還可以通過檢測(cè)免疫活性物質(zhì)來了解機(jī)體的功能狀態(tài)，常見的免疫活性物質(zhì)包括抗體、補(bǔ)體、干擾素、白細(xì)胞介素等。本研究主要檢測(cè)IgG、IgA、IgM、C3、C4免疫活性物質(zhì)，并探討其在HFMD的臨床意義。

IgG主要針對(duì)蛋白質(zhì)多肽類抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，是機(jī)體抗感染的主力部隊(duì)，在抗細(xì)菌、抗病毒和抗毒素中發(fā)揮主要作用，同時(shí)也是機(jī)體再次免疫應(yīng)答的主要抗體，是唯一能通過胎盤的免疫球蛋白。表2中，普通組和重癥組的IgG水平均低于對(duì)照組，癥狀越重IgG水平越高。表3中，患兒CA16和EV71陽(yáng)性構(gòu)成比分布情況與IgG水平關(guān)系不明顯，但與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。表4中，患兒的IgG水平隨年齡增加而升高。這是由于嬰兒出生后，從母體獲得的IgG會(huì)逐漸減少，到6個(gè)月時(shí)基本消失；而小兒自身合成的IgG則隨個(gè)體免疫系統(tǒng)的成熟逐漸增多，直到學(xué)齡期機(jī)體合成IgG的能力才接近大人水平。

IgM是初次體液免疫應(yīng)答中最早出現(xiàn)的抗體，是機(jī)體抗感染的先頭部隊(duì)。通過結(jié)合補(bǔ)體，IgM有溶解細(xì)菌、血細(xì)胞的作用，并能中和病毒，其效能比IgG高100倍以上，但因其在血中含量低，半衰期短，總體效應(yīng)不如IgG。表2中，普通組的IgM水平與重癥組、對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05），說明臨床癥狀較輕時(shí)，體內(nèi)原有的IgM會(huì)因迅速反應(yīng)以抵抗感染而消耗掉一部分；隨著病程的進(jìn)展，機(jī)體免疫系統(tǒng)新產(chǎn)生的IgM水平會(huì)逐漸增加以維持血液中免疫球蛋白的穩(wěn)定狀態(tài)，因此重癥組的IgM水平會(huì)接近對(duì)照組。表3中，CA16和EV71陽(yáng)性構(gòu)成比分布情況與IgM水平關(guān)系不明顯。表4中，＜1歲組的IgM水平最低，與其他各組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明＜1歲的患兒自身免疫系統(tǒng)不夠成熟，抵抗力較差，醫(yī)護(hù)人員需特別注意該類患兒的病程變化。

IgA分為血清型和分泌型，其中血清型主要以單體形式存在，而分泌型則由J鏈連接的二聚體和分泌成分組成。IgA主要存在于胃腸道和支氣管分泌液、初乳、唾液和淚液中，并在機(jī)體局部黏膜發(fā)揮作用，是機(jī)體抗感染的邊防部隊(duì)。表2和表3中，按臨床癥狀嚴(yán)重程度和病毒感染情況分組，患兒的IgA水平無明顯差別，但與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。表4中，不同年齡組的IgA水平比較差異明顯，且隨年齡增加呈遞增趨勢(shì)，說明按年齡分組討論IgA水平更有實(shí)際意義。

補(bǔ)體是一組存在于人和脊椎動(dòng)物血清中、具有酶樣活性且不耐熱的糖蛋白，其組成部分復(fù)雜多樣，以連續(xù)反應(yīng)的級(jí)聯(lián)方式發(fā)揮生物效應(yīng)。補(bǔ)體系統(tǒng)廣泛參與機(jī)體的抗感染防御反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)，是體內(nèi)具有重要生物學(xué)意義的放大效應(yīng)系統(tǒng)。目前已發(fā)現(xiàn)的補(bǔ)體成分有30多種，在血清中以C3和C4水平最高，兩者均由巨噬細(xì)胞和肝臟合成，是補(bǔ)體系統(tǒng)的活化單位，主要負(fù)責(zé)免疫活化，隨時(shí)準(zhǔn)備發(fā)動(dòng)免疫攻擊。C3主要在補(bǔ)體經(jīng)典激活途徑與旁路激活途徑中發(fā)揮重要作用，C4主要參與補(bǔ)體的經(jīng)典激活途徑。本研究結(jié)果顯示，即使用了三種不同的分組方式，患兒組間的C3和C4水平仍然無明顯差異，這與魏惠亞［8］的研究結(jié)果相似。而各組的C3水平與對(duì)照組比較一般無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，C4水平則部分有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。原因可能是：①正常情況下，血清補(bǔ)體的存在與抗原性異物的刺激無關(guān)，所以在HFMD的發(fā)展過程中同樣不例外。②在正常人血清中，補(bǔ)體含量相對(duì)穩(wěn)定，并不會(huì)隨年齡變化而出現(xiàn)較大波動(dòng)，所以HFMD患兒的C3、C4水平也相對(duì)穩(wěn)定。③代謝率較快是補(bǔ)體水平相對(duì)穩(wěn)定的一個(gè)重要原因，有文獻(xiàn)［9］報(bào)道，血漿中的補(bǔ)體每天更新約50%，只要不是急性嚴(yán)重感染、大面積燒傷、失血過多或高消耗性疾病等，補(bǔ)體系統(tǒng)均會(huì)自動(dòng)調(diào)整到最佳狀態(tài)以維持機(jī)體的免疫穩(wěn)定。

綜上所述，患兒年齡越小，自身免疫系統(tǒng)越不完善，臨床癥狀就越嚴(yán)重。若要考察HFMD患兒的免疫狀態(tài)，建議檢測(cè)IgG、IgM、IgA三項(xiàng)指標(biāo)，并且按年齡分組討論更有實(shí)際指導(dǎo)意義。由于重癥HFMD與EV71感染關(guān)系較明顯，因此醫(yī)護(hù)人員需特別警惕EV71陽(yáng)性患兒的病情變化，給予必要的干預(yù)措施，避免發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的病理?yè)p傷甚至死亡。

[1]王蘭蘭,吳健民.臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn) [M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:30.

[2]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.手足口病診療指南 (2010年版) (一)[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,22(7):586-587.

[3]Jan SL,Lin SJ,Fu YC,et al.Extracorporeal life support for treatment children with enterovirus 71 infection-related cardiopulmonary failure[J].Intensive Care Med,2010,36(3):520-527.

[4]Cho HK,Lee NY,Lee H,et al.Enterovirus 71-associated hand,foot and mouth diseases with neurologic symptoms,a university hospital experience in Korea,2009[J].Korean J Pediatr,2010,53(5):639-643.

[5]Koroleva GA,Lukashev AN,Khudiakova LV,et al.Encephalomyelitis caused by enterovirus type 71 in children[J].Vopr Virusol,2010,55(6):4-10.

[6]Preissig CM,Rigby MR.Hyperglycaemia results from beta-cell dysfunction in critically ill children with respiratory and cardiovascular failure:a prospective observational study[J].Critical Care,2009,13(1):R27.

[7]吳亦棟,尚世強(qiáng),陳志敏,等.手足口病病原體流行特征分析及臨床意義 [J].中華兒科雜志,2010,48(7):535-539.

[8]魏惠亞.678例手足口病患兒體液免疫檢測(cè)分析 [J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2012,22(12):976-977.

[9]呂世靜.臨床免疫學(xué)檢驗(yàn) [M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2004:70.

Analysis on the Immune Function of Children with Hand-Foot-Mouth Disease in A Hospital in Zhaoqing City

WU Xiaowen,SHEN Xueji,OU Huimei,CAI Jianmei
(Clinical Laboratory,Zhaoqing First People's Hospital,Zhaoqing 526021,China)

ObjectiveTo analyze the immune function of children with hand-foot-mouth disease(HFMD).Methods328 cases of children with HFMD were selected,and their serum IgG,IgM,IgA,C3 and C4 levels were detected.The results were compared with 58 cases of healthy children selected as the control group at the same period.ResultsStatistical difference was found in the IgG,IgM,IgA and C4 levels between common group and control group(P＜0.05).Statistical difference was found in the IgG and IgA levels between severe group and control group(P ＜0.05).Statistical difference was found in the IgM level between common group and severe group(P ＜0.05).Statistical difference was found in the IgG and IgA levels among four different age groups(P ＜0.05).IgM level was lowest in＜1 year group,had statistical difference with those of other groups(P＜0.05).ConclusionsThe immune function changes after children are infected with HFMD viruses.The IgG,IgM and IgA levels significantly change,but C3 and C4 levels are relatively stable.It is more practical to discuss HFMD in different age groups.

Hand-foot-mouth disease;Children;Immune function

R512.5

A

10.3969/j.issn.1674-4659.2017.11.1632

2017－06－22

2017-08-10

吳小文 （1983－），男，廣東羅定人，本科學(xué)歷，主管技師，從事分子生物學(xué)檢驗(yàn)工作。

（責(zé)任編輯：張普）