“中國(guó)紅”紅楓植株再生技術(shù)研究

王曉立+王婷+張穎+韓浩章

摘 要：“中國(guó)紅”紅楓是紅楓變種，其枝干多姿、優(yōu)美，葉色艷麗而持久，具有極高的觀賞價(jià)值，從而成為了園林綠化應(yīng)用樹種的新寵。為了建立“中國(guó)紅”紅楓的愈傷組織途徑繁殖體系，該文以紅楓的葉片、幼嫩莖段、葉柄作為外植體，采用75%乙醇（20s）、2%NaClO（10～15min）消毒，接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)，然后進(jìn)行繼代條件探討，愈傷組織誘導(dǎo)芽研究。結(jié)果表明：“中國(guó)紅”幼嫩莖段作為外植體可以啟動(dòng)愈傷組織的形成，而且優(yōu)于葉片與葉柄對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)；在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，BA濃度為3mg/L，NAA濃度0.2mg/L的條件下，愈誘導(dǎo)率最高。在光照條件下出愈率較高。而由愈傷組織誘導(dǎo)芽分化則相對(duì)較難，分化芽后生根率較高。

關(guān)鍵詞：“中國(guó)紅”紅楓；愈傷組織；誘導(dǎo)；植株再生

中圖分類號(hào) S79 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2017）22-0088-02

Abstract："Chinese red" red maple is a variety of red maple.Its branches are colorful， graceful and gorgeous with long leaves.They are of high ornamental value and become the new darling of landscaping trees.In order to establish a propagation system of Chinese red maple from callus， we used 75% alcohol （20s）， 2% NaClO （10 ～ 15min） as the explants， Disinfected， inoculated on callus induction medium for induction culture， and then subculture conditions， callus induction bud study.The results showed that young stem segments of "Chinese Red" could initiate callus formation as explants， and were superior to leaf and petiole on callus induction.In MS induction medium， BA concentration was 3 mg/L， NAA concentration of 0.2mg/L under the conditions， the highest induction rate.In the light of the conditions out of a higher cure rate.However， it is relatively difficult to induce bud differentiation by callus， and the rate of rooting after differentiation buds is higher.

Key words：Acer rubrum；Callus；Induction；Plant regeneration

“中國(guó)紅”紅楓是紅楓（Acer rubrum）的變種，其枝干姿態(tài)優(yōu)美，葉色保持時(shí)間長(zhǎng)且不易褪色，具有極高的觀賞價(jià)值，并且具有生態(tài)適應(yīng)性廣泛[1]、與其他變種植株相比生長(zhǎng)速度快[2]等優(yōu)點(diǎn)，從而成為了園林綠化應(yīng)用樹種的新寵。目前，紅楓現(xiàn)主要通過種子繁殖和嫁接等技術(shù)進(jìn)行繁殖，具有時(shí)間周期長(zhǎng)，成活率不高等不足[3]。為開發(fā)“中國(guó)紅”紅楓新的繁殖技術(shù)，本試驗(yàn)通過在外源激素種類與濃度配比的MS培養(yǎng)基上，對(duì)“中國(guó)紅”紅楓幼嫩莖段等外植體進(jìn)行一系列的愈傷組織誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、催芽、成苗的探討，建立“中國(guó)紅”紅楓組織培養(yǎng)無性繁殖體系。

1 材料與方法

1.1 材料 取自宿遷新夢(mèng)想園林綠化有限公司。以“中國(guó)紅”紅楓葉片、幼嫩莖段、葉柄作為外植體。

1.2 培養(yǎng)基配方 采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基見表1。

1.3 方法 將外植體用自來水沖洗干凈，吸水紙吸干水分后放于超凈工作臺(tái)上，采用75%乙醇20s、2%NaClO（10～15min）消毒，取出，用無菌水沖洗3次后備用。在超凈工作臺(tái)上外植體接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)條件：溫度（25±1）℃、光照長(zhǎng)度14h/d。

1.4 愈傷組織繼代與成苗 選擇質(zhì)地均勻疏松度好的愈傷組織接種于光照和黑暗不同條件的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。將誘導(dǎo)出的再生芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基MS+IBA0.25 mg/L中。

1.5 指標(biāo)統(tǒng)計(jì) 計(jì)算公式如下：

愈傷組織誘導(dǎo)率（%）=（形成愈傷組織外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100；愈傷組織污染率（%）=（污染外植體數(shù)/接種外植體數(shù)）×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同激素濃度配比對(duì)外植體愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將“中國(guó)紅”紅楓葉片、莖段、葉柄等接種到添加植物激素不同組合濃度的MS培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，接種外植體均為30，結(jié)果如表1所示。由表1可知，BA+NAA的組合均可以不同程度地誘導(dǎo)愈傷組織形成，BA3mg/L+NAA0.2mg/L組合對(duì)“中國(guó)紅”紅楓的誘導(dǎo)效果最好，最高誘導(dǎo)率達(dá)80%以上。莖段切口處產(chǎn)生的愈傷組織較疏松，顏色淺；另外，BA濃度的升高也會(huì)相應(yīng)提高愈傷組織的誘導(dǎo)率。從外植體上來看，莖段和葉柄的誘導(dǎo)率均強(qiáng)于葉片，莖段誘導(dǎo)率整體上優(yōu)于葉柄。

2.2 不同消毒處理對(duì)污染的影響 通過應(yīng)用不同消毒劑處理外植體試驗(yàn)后發(fā)現(xiàn)（表2）：接種7d后，以75%乙醇處理10s后，用2% NaClO 10min處理的材料污染情況很嚴(yán)重，以75%乙醇消毒15s和0.1% HgCl2消毒9min時(shí)，材料污染較小。HgCl2消毒劑消毒效果優(yōu)于NaClO。隨著消毒時(shí)間延長(zhǎng)時(shí)，污染率均顯著下降。但隨著殺毒時(shí)間的延長(zhǎng)，材料的死亡率大幅提高。綜合考慮以上因素，同時(shí)考慮到HgCl2的污染性，認(rèn)為75%乙醇消毒15s和2% NaClO消毒20min為較理想的消毒處理時(shí)間。endprint

2.3 愈傷組織繼代培養(yǎng)與誘導(dǎo)芽分化 愈傷組織繼代培養(yǎng)條件對(duì)“中國(guó)紅”紅楓愈傷組織的生長(zhǎng)分化十分重要。以“中國(guó)紅”紅楓為外植體，接種于繼代培養(yǎng)基中，一部分置于光照下（14h/d光照），另一部分放在黑暗條件下培養(yǎng)，接種30d后觀察。發(fā)現(xiàn)光照條件對(duì)“中國(guó)紅”紅楓愈傷組織生長(zhǎng)有很大的促進(jìn)作用，光照下愈傷組織生長(zhǎng)快，顏色淺，愈傷疏松；暗培養(yǎng)下外植體黃化嚴(yán)重，愈傷組織生長(zhǎng)速度慢。繼代培養(yǎng)后可得到均勻、疏松、狀態(tài)穩(wěn)定的愈傷組織轉(zhuǎn)入MS BA2mg/L+NAA0.5mg/L培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生芽。

2.4 生根培養(yǎng) 剪切1cm以上的分化芽轉(zhuǎn)入MS+IBA0.25mg/L生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論 愈傷組織的誘導(dǎo)技術(shù)中，植物部位的選擇是關(guān)鍵因素之一[4]。在紅楓愈傷誘導(dǎo)上，以選擇硬的枝條居多[5]。新生枝條對(duì)消毒劑敏感，易死亡等缺點(diǎn)。但本試驗(yàn)選擇新生枝條做為材料，可以成功誘導(dǎo)愈傷組織。文獻(xiàn)在滅菌上，大體采用30s 75%乙醇，0.1%升汞組合處理[6]。本試驗(yàn)通過縮短75%乙醇處理時(shí)間，次氯酸鈉處理時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng)，取得了良好效果。激素配比（生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素）對(duì)于植物愈傷組織的誘導(dǎo)十分重要。我們的試驗(yàn)結(jié)果，基本同King S M[7]試驗(yàn)結(jié)果相同。

3.2 結(jié)論 “中國(guó)紅”紅楓愈傷組織誘導(dǎo)以幼嫩莖段最好。在光照條件下，培養(yǎng)基BA3mg/L+NAA0.2mg/L下成功誘導(dǎo)愈傷組織。而由愈傷組織誘導(dǎo)芽分化則相對(duì)較難。該試驗(yàn)研究為進(jìn)一步建立“中國(guó)紅”紅楓快速繁殖體系提供試驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]李瑩，羅曉芳，蔣湘寧.美國(guó)紅楓外植體選擇及啟動(dòng)培養(yǎng)研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（8）：6-9.

[2]宗樹斌，周春玲，牛立軍，等.美國(guó)紅楓的組織培養(yǎng)研究[J].山東林業(yè)科技，2006（1）：1-3.

[3]桂勇武，郭成寶，高年春.4種引進(jìn)彩葉樹種的播種育苗技術(shù)研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（6）：271-272.

[4]于傳.美國(guó)紅楓（Acerrubrum）的組織培養(yǎng)技術(shù)體系研究[D].重慶：西南大學(xué)，2013.

[5]龔崢，王洪峰，張衛(wèi)華，等.楓香組織培養(yǎng)快繁育苗技術(shù)研究[J].林業(yè)與環(huán)境科學(xué)，2012，28（5）：45-50.

[6]曹受金，劉輝華，田英翠.美國(guó)紅楓組織培養(yǎng)與快繁技術(shù)的研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，49（11）：2643-2645.

[7]King S M， Morehart A L.Effect of BA， NAA， and 2，4-D on red maple callus growth[J].Plant cell， tissue and organ culture， 1987，10（1）： 57-63.

（責(zé)編：張宏民）endprint