降壓片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究

吳軍紅，李啟彬

(駐馬店市食品藥品檢驗所，河南 駐馬店 463000)

降壓片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高研究

吳軍紅*，李啟彬

(駐馬店市食品藥品檢驗所，河南 駐馬店 463000)

目的建立降壓片的質(zhì)量控制方法。方法采用薄層色譜法對降壓片中決明子、山楂進(jìn)行定性鑒別；HPLC法測定黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量，色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為30 ℃；流動相為甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，梯度洗脫；流速為1.0 mL·min-1；檢測波長為278 nm。結(jié)果TLC斑點(diǎn)清晰、分離度好，陰性無干擾；黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素分別在0.118 0～2.360 0 μg(r=0.999 9)、0.046 6～0.932 0 μg(r=0.999 8)、0.048 7～0.974 0 μg(r=0.999 9)、0.039 7～0.794 0 μg(r=0.999 9)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均回收率分別為98.58%(RSD為1.14%，n=6)、98.48%(RSD為0.83%，n=6)、98.99%(RSD為0.77%，n=6)、99.28%(RSD為0.78%，n=6)。結(jié)論本方法簡便、準(zhǔn)確，能有效控制降壓片的質(zhì)量。

降壓片；薄層色譜法；決明子；山楂；黃芩；黃酮類；高效液相色譜法

降壓片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第四冊[1]，系由黃芩、決明子、山楂、槲寄生、臭梧桐葉、桑白皮、地龍七味傳統(tǒng)中藥組成的復(fù)方制劑。主要用于降血壓。處方中黃芩、決明子、山楂均具有很好的保肝、降血脂、降血壓作用[2-5]，原標(biāo)準(zhǔn)只有黃芩的薄層鑒別，不能有效控制藥品質(zhì)量，作為常用處方藥，處方有效成分高低直接影響治療效果，作者根據(jù)處方成分藥理作用、臨床療效及劑型特點(diǎn)，增加了主要藥味決明子、山楂的薄層色譜鑒別及君藥黃芩中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量測定方法，補(bǔ)充和完善了現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗表明，所增加的檢驗方法斑點(diǎn)清晰、重復(fù)性好，能更好地控制藥品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

安捷倫1260型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)；硅膠G預(yù)制薄層板(青島海洋化工有限公司，批號：20150727)；超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，功率：250 W，頻率：40 kHz)；電子天平(德國賽多利斯公司，BP211D，十萬分之一)；決明子對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121011-200604)；山楂對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號：121626-201001)；黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：110715-201318，含量以93.3%計)；漢黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：112002-201501，含量以98.8%計)；黃芩素對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111595-201306，含量以97.8%計)；漢黃芩素對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號：111514-200403)；降壓片(成都地奧集團(tuán)天府藥業(yè)股份有限公司，批號分別為150505、150601、150705)；陰性樣品按處方工藝自制；甲醇為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純。

2 定性鑒別

2.1 決明子的TLC鑒別

取本品5片，研細(xì)，稱取2.5 g，加乙醇50 mL，加熱回流50 min[6]濾過，回收溶劑至干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，置水浴加熱30 min，用乙醚提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。再取除去決明子按降壓片制備工藝制備的陰性樣品2.5 g，同法制成陰性樣品溶液。另取決明子對照藥材1.5 g，加水煎煮1.5 h，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加乙醇15 mL使溶解，同法制成對照藥材溶液，照TLC法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60 ℃)-丙酮(8∶4)為展開劑，展開，取出，晾干，置有濃氨的展開缸內(nèi)約2 min。供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖1。

注：1～3.供試品溶液；4.陰性樣品；5.對照藥材。圖1 決明子的TLC鑒別

2.2 山楂的TLC鑒別

取本品6片，研細(xì)，稱取3.0 g，加2%鹽酸乙醇溶液15 mL，浸漬30 min，時時振搖，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇1 mL使溶解，取上清液作為供試品溶液。再取除去山楂按降壓片制備工藝制備的陰性樣品3.0 g，同法制成陰性樣品溶液。另取山楂對照藥材2 g，加水100 mL，煎煮60 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加無水乙醇2 mL，離心，取上清液，濃縮至1 mL，作為對照藥材溶液，照TLC法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙醚-三氯甲烷-甲酸(10∶10∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液(1→10)，在80 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性無干擾，見圖2。

注：1～3.供試品溶液；4.陰性樣品；5.對照藥材。圖2 山楂的TLC鑒別

3 含量測定

3.1 色譜條件

Agilent Eclipse SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫30 ℃；流動相甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脫(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)；檢測波長278 nm；流速1.0 mL·min-1[9-11]。

3.2 溶液的制備

3.2.1 對照品溶液制備 精密稱取黃芩苷對照品29.50 mg、漢黃芩苷對照品11.65 mg、黃芩素對照品12.18 mg、漢黃芩素對照品9.93 mg，同置250 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含黃芩苷0.118 0 mg、含漢黃芩苷0.046 6 mg、含黃芩素0.048 7 mg、含漢黃芩素0.039 7 mg)。

3.2.2 供試品溶液制備 取本品20片，稱重，研細(xì)，取約0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加稀乙醇50 mL，加熱回流3 h，放冷至室溫，濾過，精密量取續(xù)濾液25 mL，置50 mL量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，再精密量取15 mL，置20 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.2.3 陰性樣品溶液制備 精密稱取處方中除去黃芩，將其余藥味按降壓片制備工藝制備的陰性樣品0.8 g，按3.2.2項下方法制備陰性樣品溶液。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗

按照3.1色譜條件，吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，自動進(jìn)樣10 μL，記錄色譜圖，結(jié)果顯示，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計大于5000，分離度大于1.5，陰性無干擾。見圖3。

注：A.對照品；B.樣品；C.陰性樣品；1.黃芩苷；2.漢黃芩苷；3.黃芩素；4.漢黃芩素。圖3 降壓片高效液相色譜

3.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μL，按照3.1色譜條件自動進(jìn)樣，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，得回歸方程，結(jié)果見表1。

表1 線性關(guān)系

3.5 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液5 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對應(yīng)的峰面積RSD分別為0.21%、0.36%、0.29%、0.42%，表明本方法精密度良好。

3.6 重復(fù)性試驗

取降壓片樣品(批號150505)6份，進(jìn)行測定。結(jié)果每片樣品中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素含量的平均值分別為9.51、1.58、1.26、0.76 mg，RSD分別為0.83%、1.03%、0.72%、0.54%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取批號為150505降壓片樣品溶液，按照3.1色譜條件，分別于0、1、3、6、9、12、24 h進(jìn)行測定。結(jié)果供試品中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的含量的RSD分別為1.2%、0.95%、0.79%、0.82%，表明降壓片樣品穩(wěn)定性良好。

3.8 加樣回收試驗

取批號為150505的降壓片樣品(平均片重：0.502 3 mg)，平行取樣6份，各約0.2 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，再精密加入對照品溶液25 mL，按3.2.2項下方法制備，再按照3.1色譜條件進(jìn)樣測定，黃芩苷的加樣回收率見表2。

3.9 樣品測定

取降壓片樣品3批次(批號150505、150601、150705)，按3.2.2項下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表3。

表2 加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

表3 3批降壓片樣品含量測定(n=3) mg/片

4 討論

4.1 薄層色譜法

通過文獻(xiàn)查詢，未見降壓片中決明子、山楂的薄層鑒別，作者參考文獻(xiàn)[6-8]，針對提取方法、展開劑配制、薄層板加熱條件等，經(jīng)過不斷實(shí)驗，制定了降壓片決明子、山楂的薄層鑒別，該方法簡單快速、展開效果好、斑點(diǎn)清晰、陰性無干擾，可作為本品決明子、山楂專屬性鑒別。

4.2 高效液相色譜法

通過波長掃描發(fā)現(xiàn)，黃芩苷在279 nm處有最大吸收，漢黃芩素在278 nm處有最大吸收，黃芩素、漢黃芩苷在276 nm處有最大吸收，采用278 nm作為檢測波長，樣品中各成分靈敏度較高，重復(fù)性好，含量穩(wěn)定。在流動相選擇上曾以乙腈-0.2%磷酸溶液[12]、甲醇-0.2%磷酸溶液、甲醇-0.4%磷酸溶液不同比例進(jìn)行實(shí)驗，發(fā)現(xiàn)甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脫(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)出峰時間較為合適，分離度好，陰性無干擾，所以采用甲醇(A)-0.2%磷酸溶液(B)，按梯度洗脫(0～16 min，47%A；16～40 min，47%～75%A)。在提取方法上，比較了超聲提取和加熱回流2種提取方式，經(jīng)過多次實(shí)驗發(fā)現(xiàn)，回流提取效果明顯高于超聲結(jié)果，曾選取了50%甲醇、乙醇、稀乙醇為提取溶劑，發(fā)現(xiàn)稀乙醇明顯高于前兩者，因此采用稀乙醇加熱回流3 min作為提取方法，以控制本品質(zhì)量。此方法簡單易行、重復(fù)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑：第四冊[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,1991.

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EnhancementofQualityStandardforJiangyaTablets

WUJunhong*，LIqibin

(ZhumadianInstituteforFoodandDrugControl，Zhumadian463000，China)

Objective：To establish a quality control method for Jiangya tablets.MethodsTLC was used to determine Cassiae Semen，Crataegi Fructus，and the content of baicalin，wogonoside，baicalein，wogonin was determined by HPLC.The Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used for the separation and，the temperature of column was 30 ℃ with methanol(solvent A)-0.2% phosphoric acid(solvent B)as mobile phase consisted.The flow rate was 1.0 mL·min-1，and the detection wavelength was 278 nm.ResultsThe spots of TLC were fairly clear with a good separation and without interference of the negative samples.Baicalin，wogonoside，baicalein and wogonin all showed good linearity at 0.118 0-2.360 0 μg，r=0.999 9，0.046 6-0.932 0 μg，r=0.999 8，0.048 7-0.974 0 μg，r=0.999 9，0.039 7-0.794 0 μg，r=0.999 9，respectively.The average recoveries were 98.58%(RSD=1.14%，n=6)；98.48%(RSD=0.83%，n=6)；98.99%(RSD=0.77%，n=6)；99.28%(RSD=0.78%，n=6)，respectively.ConclusionThe method is simple，accurate and can effectively control the quality of Jiangya tablets.

Jiangyatablets；TLC；Cassiae Semen；Crataegi Fructus；baicalin；flavonid；HPLC

*

吳軍紅，主管藥師，研究方向：中藥檢驗及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究和制定；E-mail：48042557@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.027

2017-01-12)