• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    一種人參連作障礙土壤改良技術(shù)的評價研究△

    2017-12-11 02:12:47李志成閆偉宋雯韓京龍張輝
    中國現(xiàn)代中藥 2017年11期
    關(guān)鍵詞:皂苷人參指紋

    李志成,閆偉,宋雯,韓京龍,張輝*

    (1.長春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長春 130117;2.吉林三龍環(huán)??萍加邢薰?,吉林 琿春 133300)

    一種人參連作障礙土壤改良技術(shù)的評價研究△

    李志成1,閆偉1,宋雯1,韓京龍2,張輝1*

    (1.長春中醫(yī)藥大學(xué),吉林 長春 130117;2.吉林三龍環(huán)保科技有限公司,吉林 琿春 133300)

    目的通過性狀和高效液相色譜指紋圖譜對連作園參和新林地園參進(jìn)行人參皂苷含量的比較,從而判斷連作園參種植過程中使用的土壤改良技術(shù)是否具有抗人參連作障礙的作用。方法采用有機(jī)試劑萃取法提取連作園參和新林地園參的人參總皂苷,再通過高效液相色譜儀測定兩種人參的皂苷含量,最后使用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版對連作園參和新林地園參樣品進(jìn)行比對,通過分析計算得到上述樣品的相似度。結(jié)果連作園參中所含人參皂苷Rb1、Rg1、Re含量要高于新林地園參,指紋圖譜顯示2種園參與10種連作園參的高效液相色譜圖的相似度具有一定差異性,連作園參沒出現(xiàn)更嚴(yán)重的燒須、紅皮現(xiàn)象。結(jié)論連作園參的質(zhì)量要優(yōu)于新林地園參,證明該土壤改良技術(shù)具有一定的抗人參連作障礙的作用。

    連作園參;土壤改良技術(shù);指紋圖譜;質(zhì)量

    1 引言

    1.1 人參

    人參PanaxginsengC.A.Mey.,具有大補(bǔ)元氣、補(bǔ)脾益肺、生津止渴、安神益智的功效[1]。人參中的人參皂苷是其主要活性成分,具有調(diào)節(jié)人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng)、增強(qiáng)心腦血管功能、延緩衰老、抗腫瘤等作用[2]。人參中含有的人參皂苷可以分為三類:(1)原人參二醇(PPD)類,主要包括人參皂苷Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Rg3,Rh2。(2)原人參三醇(PPT)類,包括人參皂苷Re,Rf,Rg1,Rg2,Rh1。(3)齊墩果酸(OA)類:人參皂苷R0。據(jù)辛穎[3]、Wang[4]等人的研究發(fā)現(xiàn):人參皂苷Rg3可以控制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子,殺死黑素瘤細(xì)胞,從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、增殖的作用。楊逸[5]等人發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rg1可以降低小鼠免疫性的肝損傷,確定其具有的護(hù)肝作用。Zeng[6]等人發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rh2具有一定抗腫瘤的作用。同時,人參皂苷在抗衰老[7]、延緩骨骼肌萎縮[8]方面也發(fā)揮著重要的作用。

    野山參在嚴(yán)格的生態(tài)因子下,人參皂苷含量高于林下參、園參,臨床有效性強(qiáng)。但野生資源有限,價格高昂,已不具備批量應(yīng)用價值。

    1.2 連作園參和新林地園參

    園參為人工毀林種植人參,除在外形上與野山參有所不同外,其有效成分也低于野山參。新林地園參在種植一茬以后,栽培地土壤理化性狀劣變、化感物質(zhì)累積、農(nóng)殘及重金屬增加、養(yǎng)分失衡、根際微生態(tài)系統(tǒng)失調(diào)和土傳病害增加等是導(dǎo)致人參連作障礙的重要因子,其中病蟲害是產(chǎn)生連作障礙的關(guān)鍵因素之一。人參栽培過程中所受的病蟲害種類較多,已報道的病害有40多種,種植過人參的地20年內(nèi)不得重復(fù)栽參,否則會出現(xiàn)燒須、爛根等問題[9]。人參種植中的連作障礙是園參種植業(yè)的重要影響因素[10]。

    連作園參通過微生物微生態(tài)環(huán)境、植物修復(fù)的綜合技術(shù)體系改善土壤理化性質(zhì)實現(xiàn)了土壤物理結(jié)構(gòu)調(diào)整、土壤營養(yǎng)增加、微生物群落優(yōu)化、化感物質(zhì)降解的目標(biāo)。

    本實驗中使用的連作園參是通過使用人參連作技術(shù)改良的園參與新林地園參中人參皂苷含量是否具有差異,來判斷該人參連作技術(shù)是否具有一定的抗人參連作障礙的作用和質(zhì)量的優(yōu)勢。

    2 實驗部分

    2.1 實驗材料

    2.1.1 實驗儀器

    表1 實驗儀器

    2.1.2 實驗試劑

    表2 實驗試劑

    2.1.3 實驗藥材 園參,四年根,產(chǎn)地:吉林省汪清縣羅子溝鎮(zhèn)(吉林三龍環(huán)??萍加邢薰?地塊1、地塊2。

    連作園參,四年根,產(chǎn)地:吉林省汪清縣羅子溝鎮(zhèn)(吉林三龍環(huán)??萍加邢薰?地塊3~地塊12。

    2.1.4 結(jié)果分析軟件 中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版功能:通過導(dǎo)入相關(guān)液相色譜圖,使用設(shè)參照譜、多點校正、自動匹配、生成對照等功能對需要的色譜圖進(jìn)行比對分析??梢缘玫竭@一批色譜圖的相似度等信息。

    2.2 實驗步驟

    2.2.1 連作園參和新林地園參的總皂苷提取 選取園參2種(樣方地1、樣方地2),連作園參10種(樣方地3~樣方地12)去蘆頭,洗凈曬干,將12種樣品分別打成細(xì)粉,編號園參1號、園參2號、連作園參1號~連作園參10號。

    信小娟等[11]將人參細(xì)粉用甲醇溶解后采用超聲提取、索氏提取法和微波提取法進(jìn)行收率的比較,最后計算得出超聲提取法的收率是9.36%為最高;王中立等[12]提出用正丁醇反復(fù)萃取對分離人參中的脂類和多糖類成分結(jié)果較好;殷紅梅等人[13]用氨試液萃取人參醇提取液對分離人參中的大部分多糖和鞣質(zhì)效果較好。故制定方案如下:

    精密稱取園參1號樣品粉末3 g,選擇加甲醇20 mL,超聲處理30 min,濾過,濾液蒸干,殘渣加水20 mL使溶解,用乙酸乙酯振搖提取2次,每次20 mL,棄去乙酸乙酯液;水液用水飽和正丁醇振搖提取2次,每次20 mL,合并正丁醇液;用氨試液洗滌2次,每次20 mL;再用正丁醇飽和水洗滌2次,每次20 mL,正丁醇液蒸干,殘渣加甲醇5 mL溶解,即可得園參1號供試品。

    園參2號、連作園參1號~連作園參10號樣品的處理方法同上。

    最終得到園參1號、2號樣品,連作園參1號~連作園參10號供試品溶液。

    2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱定1 mg的人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品,加1 mL甲醇溶解,得到Rb1的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。人參皂苷標(biāo)準(zhǔn)品Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、S-PPD、S-Rg3、S-Rh2的配制方法同上。將上述11個標(biāo)準(zhǔn)品溶液均精密移取100 μL混勻后制成混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

    2.2.3 高效液相色譜法測定 根據(jù)占曉波等人[14]的色譜條件:Inertsil ODS-SP-C18色譜柱(4.6×250 mm,5 μm);以乙腈為流動相A,以0.1%的磷酸溶液為流動相B,柱溫30 ℃,檢測波長為203 nm。

    結(jié)合實驗室條件,最終確定色譜條件為:Agilent extend C18色譜柱(4.6×150 mm,5 μm);以乙腈為流動相A,以0.5%的磷酸溶液為流動相B,按表3中的指示進(jìn)行梯度洗脫;柱溫30 ℃,檢測波長為203 nm,流速為0.5 mL·min-1。

    表3 流動相洗脫表

    將2.2.1下的12個供試品溶液和混標(biāo)溶液過0.45 μm濾膜后轉(zhuǎn)移至液相進(jìn)樣瓶中,進(jìn)樣量為5 μL。即可得到園參1號、園參2號、連作園參1號~連作園參10號樣品溶液和混標(biāo)溶液的高效液相色譜圖。(見圖1~圖3)

    圖1 園參的高效液相色譜圖

    圖2 連作園參的高效液相色譜圖

    圖3 人參皂苷混標(biāo)高效液相色譜圖

    2.2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對照品溶液0.5、2、4、8、16、30 μL分 別 注 入 HPLC中,按 照“2.2.3”項下色譜條件進(jìn)樣分析,測定峰面積。結(jié)果以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到Rg1、Rb1、Re回歸方程和線性范圍,結(jié)果見表 2,各成分在各自濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

    成分回歸方程r線性范圍/μg人參皂苷Rg1y=291327x-4882 60 99990 534~35 35人參皂苷Rb1y=209401x+146910 99980 562~30 54人參皂苷Rey=208695x+509430 99990 725~43 50

    2.2.5 精密度試驗 分別精密吸取混合對照品溶液 10 μL,在“2.2.3”項色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣 6 次,計算人參皂苷Rg1、Rb1、Re的峰面積 RSD均小于 2.0%,表明儀器精密度良好。

    2.2.6 穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一人參供試品溶液,分別于 0、2、6、12、18、24 h進(jìn)樣,各色譜峰的峰面積RSD均小于2.0%,表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    2.2.7 重復(fù)性實驗 精密吸取同一人參供試品溶液,在“2.2.3”項色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次,各色譜峰的峰面積 RSD 均小于2.0%,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.2.8 加樣回收率實驗 取已知含量的人參樣品約1 g,平行6份,精密稱定分別加入對照品適量,按“2.2.1”下方法制備供試品溶液,按“2.2.3”項色譜條件下進(jìn)行分析,計算人參皂苷Rg1、Rb1、Re的平均加樣回收率分別為97.24%、98.95%、99.67%。

    2.2.9 樣品的含量測定 按照“2.2.1”下方法制備12批供試品溶液,按“2.2.3”項色譜條件下分別測定人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量,含量測定結(jié)果見表4。

    表4 12批人參樣品3種皂苷類成分的含量(%)

    由表4可知,連作園參中人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量要高于新林地園參。

    2.3 指紋圖譜的建立

    本試驗利用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版對2種園參和10種連作園參共計12個樣品的高效液相色譜圖進(jìn)行分析比較,以探究其呈現(xiàn)的具有“指紋”意義的共有峰的相對保留時間、相對保留峰面積、相似度等數(shù)據(jù)。指紋圖譜的建立是為了明確連作園參和新林地園參的含量差異、為連作園參的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。在2種園參樣品和10種連作園參樣品的高效液相色譜圖的基礎(chǔ)上,通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版的軟件就可以建立上述12個樣品的高效液相色譜指紋圖譜,見圖4。

    注:S1為園參1號樣品;S2為園參2號樣品;S3至S12為連作園參1號樣品至連作園參10號樣品;R為對照譜圖。圖4 2種園參和10種連作園參的高效液相色譜圖(檢測波長:203 nm)

    2.3.1 精密度實驗 任意選取一個樣品按照2.2.1下方法制備供試品溶液,按2.2.3下條件連續(xù)進(jìn)樣5次。計算各共有峰相對于內(nèi)參比峰的相對保留時間和相對峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。結(jié)果見表5、表6。

    表5 方法精密度的測試(相對保留時間)

    由表5可知,相對保留時間的RSD值為0.099%~0.743%。

    表6 方法精密度的測試(相對峰面積)

    由表6可知,相對峰面積的RSD值為0.410%~1.600%,綜合二者,表明方法的精密度良好。

    2.3.2 重現(xiàn)性實驗 按照2.2.1制備同一供試品溶液5份,按2.2.3下的液相條件進(jìn)樣。計算各共有峰相對于內(nèi)參比峰的相對保留時間和相對保留峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表7、表8。

    表7 方法重現(xiàn)性的測試結(jié)果(相對保留時間)

    由表7可知,相對保留時間的RSD值為0.070%~0.140%。

    表8 方法重現(xiàn)性的測試結(jié)果(相對峰面積)

    由表8可知,相對峰面積的RSD值為1.400%~2.100%。綜合二者,說明方法重現(xiàn)性良好。

    2.3.3 穩(wěn)定性實驗 取一樣品按2.2.1下方法制成供試品溶液,按2.2.3下色譜條件分別于第0、4、12、24、48h進(jìn)樣,計算各共有峰相對于內(nèi)參比峰的相對保留時間和相對峰面積值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表9、表10。

    表9 樣品穩(wěn)定性的測試(相對保留時間)

    由9表可知,相對保留時間的RSD值為0.080%~0.220%。

    表10 樣品穩(wěn)定性的測試(相對峰面積)

    由表10可知,相對峰面積的RSD值為0.500%~2.800%。綜合二者,說明樣品至少在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

    3 小結(jié)與討論

    3.1 連作園參和新林地園參的高效液相色譜圖分析

    連作園參和新林地園參的高效液相色譜可分離出40余個成分。經(jīng)中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版軟件的對比,從中選取7個具有“指紋”意義和穩(wěn)定的共有峰,其中包括人參皂苷Rg1、Re、Rb1,見表11。

    因人參皂苷Rb1峰面積較大且穩(wěn)定,故將人參皂苷Rb1色譜峰定為參照峰。計算各共有峰的相對保留時間及相對保留峰面積,見表12、表13。

    表11 連作園參和新林地園參的7個共有峰

    表12 園參和連作園參的7個共有峰的相對峰面積

    由表12可知,7個共有峰的相對保留時間的RSD值為0.110%~0.274%。

    表13 人參和連作園參的7個共有峰的相對保留時間

    表13可知,7個共有峰相對保留峰面積的RSD值在0.148%~0.591%。綜合二者,說明這7個共有峰均為有效峰。

    3.2 指紋圖譜相似度計算

    指紋圖譜通過比較導(dǎo)入到軟件中的所有色譜峰的面積大小是否相似,來表述各個樣品間的相似程度。相似度是一個通過研究指紋圖譜來分析中藥質(zhì)量的穩(wěn)定性的重要參考數(shù)據(jù)。指紋圖譜的相似度計算是以一張指紋圖譜為基礎(chǔ),通過高效液相色譜峰積分信息之間的比對[15]得出結(jié)果。結(jié)果表明,以共有峰的面積作為一個比較的方向,通過中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版軟件計算得到12種樣品的高效液相色譜指紋圖譜的相似度[16],見表14。

    表14 連作園參和新林地園參的指紋圖譜相似度比較

    從表14可以看出,2批新林地園參的相似度在0.6以上,而10批連作園參的相似度在0.9以上。

    4 結(jié)論與討論

    本文將2種園參樣品和10種連作園參樣品的生曬參通過有機(jī)試劑萃取的方法分別提取人參總皂苷,再通過高效液相色譜儀對12批人參樣品中的人參皂苷Rg1、Rb1、Re進(jìn)行含量測定,結(jié)果表明連作園參中的人參皂苷含量要高于新林地園參。將得到的12個樣品的色譜圖導(dǎo)入中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版軟件,就可以得到上述樣品的指紋圖譜。以人參皂苷Rb1為參照峰,對具有“指紋”意義的7個共有峰進(jìn)行相對保留時間、相對保留峰面積和相似度的計算。結(jié)果表明,2批新林地園參的相似度在0.6以上,而10批連作園參的相似度在0.9以上,說明兩者之間的成分具有一定的差異性,結(jié)合含量測定結(jié)果,連作園參的質(zhì)量要優(yōu)于新林地園參,連作園參沒出現(xiàn)更嚴(yán)重的燒須、紅皮現(xiàn)象。

    實驗證明,通過使用土壤改良技術(shù)對土地的土壤進(jìn)行改良,不僅可以有效抵抗連作障礙,還可以提高人參藥材質(zhì)量,為人參種植產(chǎn)業(yè)的大規(guī)模發(fā)展起到了巨大的推動作用。

    [1] 李鳳林.人參莖葉皂苷藥理作用的研究進(jìn)展[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)2013,41(2):54-57.

    [2] 路放,楊世梅.人參藥理作用研究新進(jìn)展[J].人參研究,2013,25(1):46-52.

    [3] 辛穎,倪勁松,姜新,等.20(S)-人參皂苷Rg3抑制腫瘤生長的作用[J].吉林大學(xué)報(醫(yī)學(xué)版),2006,32(1):61-64.

    [4] Wang Q,Wu M Q,Zhao L H,Effect of ginsenoside Rh2on transplanted-tumor and expression of JAM in mice[J].China journal of Chinese materiamedica,2008,33(18):2116-2119.

    [5] 楊逸,覃筱燕,郭哲,等.人參皂苷Rg1對小鼠免疫性肝損傷保護(hù)作用[J].中國公共衛(wèi)生,2015,31(3):309-311.

    [6] Zhen X L,Tu Z G,Induction of differentiation by ginsenoside Rh2in hepatocarcinoma cell SMMC-7721[J].Chinese journal of cancer,2004,23(8):879-884.

    [7] 劉曉暉.人參皂苷Rb1的研究進(jìn)展[J].武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2006,15(1):82-84.

    [8] 張巨.不同劑量二醇組人參皂苷對失神經(jīng)骨骼肌萎縮的保護(hù)作用[J].吉林中醫(yī)藥,2009,29(12):1095-1097.

    [9] 李自博.人參連作對土壤真菌種類的影響[C].中國植物病理學(xué)會2014年學(xué)術(shù)年會論文集,2014:612-613.

    [10] 吳連舉.人參連作障礙原因及其防治途徑研究進(jìn)展[J].特產(chǎn)研究,2008,30(2):68-72.

    [11] 信小娟.不同提取方法對人參皂苷收率的影響[J].中國林副特產(chǎn),2015(1):34-35.

    [12] 王中立.人參皂苷的提取及總皂苷純化工藝的研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2016,18(9):1596-1601.

    [13] 殷洪梅.HPLC-ELSD方法研究不同樣品處理方式對益心舒片中人參皂苷Rg1、Re和Rb1含量測定的影響[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2015,17(11):2280-2284.

    [14] 占曉波,朱峰.HPLC測定保健食品中西洋參總皂苷含量樣品處理研究[J].2013,25(7):87-89.

    [15] 陳珊珊.高山紅景天質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及指紋圖譜研究[D].長春:吉林大學(xué),2007,10(3):22-23.

    [16] 付娟,張海弢,王偉.芪白平肺顆粒HPLC指紋圖譜研究及其多指標(biāo)成分定量分析[J].中草藥,2017,48(5):918-992.

    AKindofGinsengContinuousCroppingObstacleofSoilImprovementTechnologyEvaluationResearch

    LIZhichen1,YANWei1,SONGWen1,HANJinglong2,ZHANGHui1*

    (1.ChangchunUniversityofChineseMedicine,Changchun,Changchun130117,China;2.JilinSanlongEnvironmentalProtectionTechnologyDevelopmentCo.LTD,Hunchun130117,China)

    Objective:To evaluate a soil improving technology for ginseng continuous cropping obstacle through comparison of the character and HPLC fingerprint of continuous cropping garden and new woodland garden ginseng.MethodsThe total saponins were extracted,and the contents of saponins in ginseng were determined by HPLC.Finally,the similarity evaluation system of traditional Chinese medicine chromatographic fingerprints was used to evaluate the total saponins of ginseng,and the parameters of the samples were compared with each other,and the similarity of the samples was calculated and analyzed.ResultsThe contents of ginsenoside Rb1,Rg1and Re in continuous cropping garden ginseng were higher than that in new woodland garden ginseng deforestation,and the fingerprints showed that the similarity of high performance liquid chromatograms of 10 kinds of plants was different.There is no more serious burning beard,red skin phenomenon on continuous cropping garden ginseng.ConclusionThe quality of continuous cropping ginseng is better than that of new forestland ginseng,which proves that the soil improvement technology has certain anti continuous cropping effect.

    Continuous cropping garden ginseng;soil improving technology;fingerprints;quality

    吉林省特色藥材炮制規(guī)范項目(PZ-2016-12)

    *

    張輝,教授;研究方向:中藥化學(xué);Tel:(0431)80812267,E-mail:zhanghui_8080@163.com

    10.13313/j.issn.1673-4890.2017.11.022

    2017-06-26)

    猜你喜歡
    皂苷人參指紋
    水中人參話鰍魚
    像偵探一樣提取指紋
    為什么每個人的指紋都不一樣
    清爽可口的“水中人參”
    海峽姐妹(2019年8期)2019-09-03 01:01:04
    HPLC-MS/MS法同時測定三七花總皂苷中2種成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:04
    HPLC法測定大鼠皮膚中三七皂苷R1和人參皂苷Rb1
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:40
    HPLC法同時測定熟三七散中13種皂苷
    中成藥(2017年6期)2017-06-13 07:30:34
    胡蘿卜為什么被稱為“小人參”
    基于自適應(yīng)稀疏變換的指紋圖像壓縮
    吃人參不如睡五更
    華人時刊(2016年13期)2016-04-05 05:50:15
    欧美精品一区二区大全| 久久久久久久国产电影| 丝袜美腿在线中文| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲成人av在线免费| 中文字幕av在线有码专区| 18禁动态无遮挡网站| 高清欧美精品videossex| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产免费又黄又爽又色| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲怡红院男人天堂| 久久久久久九九精品二区国产| 久久精品国产亚洲av涩爱| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲精品影视一区二区三区av| or卡值多少钱| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产av码专区亚洲av| 色5月婷婷丁香| 久久草成人影院| 高清欧美精品videossex| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 日日干狠狠操夜夜爽| 久久国产乱子免费精品| 欧美三级亚洲精品| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品蜜桃在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 91久久精品国产一区二区三区| 日韩伦理黄色片| 午夜日本视频在线| av天堂中文字幕网| 联通29元200g的流量卡| 亚洲久久久久久中文字幕| 在线免费十八禁| 天天躁日日操中文字幕| 一级a做视频免费观看| 高清日韩中文字幕在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 1000部很黄的大片| 天天一区二区日本电影三级| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品一二三区在线看| 亚洲欧美清纯卡通| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 午夜激情久久久久久久| 国产精品福利在线免费观看| ponron亚洲| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 日本三级黄在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 免费观看的影片在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 91久久精品国产一区二区三区| 久久久久久久久久黄片| 街头女战士在线观看网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲av二区三区四区| 欧美日本视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 啦啦啦啦在线视频资源| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲av男天堂| 街头女战士在线观看网站| 久久精品人妻少妇| 国产午夜福利久久久久久| 国产成人freesex在线| 免费人成在线观看视频色| 男女那种视频在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 青春草国产在线视频| 亚洲成人久久爱视频| 最近手机中文字幕大全| 淫秽高清视频在线观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费大片黄手机在线观看| 国产淫语在线视频| 免费观看av网站的网址| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 最近的中文字幕免费完整| av国产久精品久网站免费入址| 91在线精品国自产拍蜜月| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 一级二级三级毛片免费看| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产精品久久久久久精品电影| 搡女人真爽免费视频火全软件| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲电影在线观看av| 中国美白少妇内射xxxbb| 老女人水多毛片| 中文在线观看免费www的网站| 老女人水多毛片| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美日韩亚洲高清精品| 18禁动态无遮挡网站| 中文字幕制服av| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 一区二区三区免费毛片| 亚洲国产精品成人综合色| 免费看a级黄色片| 国产成人freesex在线| 午夜视频国产福利| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美97在线视频| 免费观看精品视频网站| 日韩视频在线欧美| 一级爰片在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 午夜福利成人在线免费观看| 国产69精品久久久久777片| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产伦精品一区二区三区四那| 丝袜喷水一区| 日本一本二区三区精品| 丝袜喷水一区| 亚洲三级黄色毛片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美极品一区二区三区四区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲不卡免费看| 真实男女啪啪啪动态图| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 观看美女的网站| 欧美激情在线99| 国产精品久久视频播放| 大片免费播放器 马上看| 97热精品久久久久久| 国模一区二区三区四区视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲四区av| 亚洲精品第二区| 久久精品久久久久久久性| 美女高潮的动态| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 极品少妇高潮喷水抽搐| 亚洲在线自拍视频| 可以在线观看毛片的网站| 青春草视频在线免费观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 内射极品少妇av片p| 大香蕉久久网| 国内精品美女久久久久久| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费观看a级毛片全部| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲成人中文字幕在线播放| 成人国产麻豆网| 亚洲自偷自拍三级| 成人特级av手机在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 一级毛片久久久久久久久女| 插阴视频在线观看视频| 美女内射精品一级片tv| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 男女视频在线观看网站免费| 国产高清国产精品国产三级 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日韩国内少妇激情av| 看免费成人av毛片| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久九九精品二区国产| av网站免费在线观看视频 | 久久久久久久久久黄片| 九色成人免费人妻av| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 久久99热这里只频精品6学生| av国产久精品久网站免费入址| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 欧美高清性xxxxhd video| 国产色爽女视频免费观看| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲精品亚洲一区二区| 一边亲一边摸免费视频| 国模一区二区三区四区视频| 久久精品久久久久久久性| 国产乱人偷精品视频| 欧美潮喷喷水| 亚洲最大成人中文| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 草草在线视频免费看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 一夜夜www| 国产精品一区www在线观看| 三级毛片av免费| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美日本视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 午夜免费观看性视频| 欧美+日韩+精品| 国产熟女欧美一区二区| 午夜福利在线在线| 婷婷六月久久综合丁香| 深爱激情五月婷婷| 免费大片18禁| 成人无遮挡网站| 久久精品夜色国产| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 看黄色毛片网站| 欧美+日韩+精品| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 夫妻午夜视频| av卡一久久| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av不卡在线观看| 欧美97在线视频| 日本熟妇午夜| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲怡红院男人天堂| 最近视频中文字幕2019在线8| 高清欧美精品videossex| 国产中年淑女户外野战色| 午夜精品国产一区二区电影 | 2021少妇久久久久久久久久久| 91精品国产九色| 亚洲丝袜综合中文字幕| 三级经典国产精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| av国产免费在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 校园人妻丝袜中文字幕| 丰满少妇做爰视频| 免费看av在线观看网站| 精品久久久噜噜| 免费观看在线日韩| 黄片wwwwww| 色哟哟·www| 嫩草影院入口| 99热全是精品| 99热这里只有精品一区| 亚洲无线观看免费| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲精品日韩av片在线观看| 777米奇影视久久| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 三级毛片av免费| 欧美一级a爱片免费观看看| 久久久久久久久久成人| 亚洲av国产av综合av卡| 日韩大片免费观看网站| 国产综合精华液| 毛片女人毛片| 国产亚洲一区二区精品| 欧美97在线视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 国产熟女欧美一区二区| 国产永久视频网站| 亚洲av成人精品一二三区| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 如何舔出高潮| 看黄色毛片网站| 在线观看av片永久免费下载| av免费在线看不卡| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲国产av新网站| 2018国产大陆天天弄谢| 久久久久久久午夜电影| 亚洲国产色片| 亚洲av成人精品一区久久| 中文资源天堂在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲内射少妇av| 插阴视频在线观看视频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产一区二区三区综合在线观看 | 国产午夜福利久久久久久| 美女主播在线视频| 丰满乱子伦码专区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 99久久人妻综合| 久久亚洲国产成人精品v| 国产三级在线视频| 久久精品综合一区二区三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 精品一区二区三卡| av在线蜜桃| 欧美精品国产亚洲| 最近手机中文字幕大全| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲成人av在线免费| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 两个人视频免费观看高清| 麻豆成人午夜福利视频| 在线观看人妻少妇| 九九在线视频观看精品| 国产精品久久久久久精品电影| 在线观看免费高清a一片| 国产一级毛片在线| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 免费高清在线观看视频在线观看| 天堂√8在线中文| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 岛国毛片在线播放| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产精品一二三区在线看| 成人综合一区亚洲| 永久网站在线| 精品午夜福利在线看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 超碰97精品在线观看| av在线亚洲专区| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲av免费在线观看| 毛片女人毛片| 久久久a久久爽久久v久久| 色综合色国产| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一区二区三区四区激情视频| 久久久久性生活片| 成人美女网站在线观看视频| 黄色日韩在线| 免费观看a级毛片全部| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产69精品久久久久777片| 精品一区二区三卡| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 热99在线观看视频| 久久6这里有精品| 亚洲av在线观看美女高潮| 免费看光身美女| 亚洲成人中文字幕在线播放| 超碰av人人做人人爽久久| 亚洲成人一二三区av| 看免费成人av毛片| 国产一区二区在线观看日韩| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 免费看av在线观看网站| 中文资源天堂在线| 街头女战士在线观看网站| 久久精品久久精品一区二区三区| 午夜激情欧美在线| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久99蜜桃精品久久| 日日干狠狠操夜夜爽| 又爽又黄a免费视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | av在线亚洲专区| 婷婷色麻豆天堂久久| 精品一区在线观看国产| 一级黄片播放器| 麻豆成人av视频| 日韩精品有码人妻一区| av国产久精品久网站免费入址| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 少妇被粗大猛烈的视频| 青青草视频在线视频观看| 干丝袜人妻中文字幕| 秋霞伦理黄片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一个人免费在线观看电影| 欧美 日韩 精品 国产| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 精品国产三级普通话版| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产高清不卡午夜福利| 婷婷色综合大香蕉| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产69精品久久久久777片| 伦精品一区二区三区| 人人妻人人澡欧美一区二区| 亚洲av一区综合| 丝袜喷水一区| 边亲边吃奶的免费视频| 麻豆国产97在线/欧美| 春色校园在线视频观看| 午夜久久久久精精品| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 一级黄片播放器| 99re6热这里在线精品视频| 日本与韩国留学比较| 日本av手机在线免费观看| 国产精品久久久久久久久免| 日韩成人伦理影院| 热99在线观看视频| 99热6这里只有精品| 国产成人freesex在线| 日韩制服骚丝袜av| 成人无遮挡网站| av专区在线播放| eeuss影院久久| 亚洲四区av| 成年女人在线观看亚洲视频 | 大香蕉久久网| 国产成人91sexporn| 午夜激情欧美在线| 波野结衣二区三区在线| 久久精品综合一区二区三区| 中文字幕制服av| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 插逼视频在线观看| 黑人高潮一二区| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 高清午夜精品一区二区三区| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 午夜免费观看性视频| av播播在线观看一区| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲人成网站在线观看播放| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品国产av成人精品| kizo精华| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品国产三级国产专区5o| 晚上一个人看的免费电影| 精品国内亚洲2022精品成人| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 女人被狂操c到高潮| 国产黄片美女视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产v大片淫在线免费观看| av在线蜜桃| 两个人视频免费观看高清| 青春草视频在线免费观看| 22中文网久久字幕| 久久99热这里只频精品6学生| 国产成人精品一,二区| 亚洲精品日韩av片在线观看| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲av福利一区| 中文字幕制服av| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 成人美女网站在线观看视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久欧美国产精品| 一级毛片 在线播放| 国产精品女同一区二区软件| 成人性生交大片免费视频hd| 波野结衣二区三区在线| 国产高清有码在线观看视频| 午夜免费观看性视频| 99久久精品热视频| 人妻系列 视频| 日本黄大片高清| 欧美激情在线99| 波多野结衣巨乳人妻| 久久久久久久久久黄片| 成人亚洲精品av一区二区| av网站免费在线观看视频 | 国产淫片久久久久久久久| 亚洲成人av在线免费| 91精品伊人久久大香线蕉| 看免费成人av毛片| av在线播放精品| www.av在线官网国产| 久久97久久精品| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲最大成人av| 真实男女啪啪啪动态图| 国产真实伦视频高清在线观看| 一本一本综合久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产精品三级大全| 国产久久久一区二区三区| 午夜日本视频在线| 最近手机中文字幕大全| 亚洲欧美日韩东京热| 精品久久国产蜜桃| 中文在线观看免费www的网站| av播播在线观看一区| 人妻系列 视频| 国产免费福利视频在线观看| 欧美激情在线99| 成人午夜精彩视频在线观看| 精品久久久久久电影网| 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 丝袜喷水一区| 日韩精品有码人妻一区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 插阴视频在线观看视频| h日本视频在线播放| 一个人免费在线观看电影| 国产午夜精品一二区理论片| 精品午夜福利在线看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 黄片wwwwww| 亚洲精品成人av观看孕妇| 麻豆久久精品国产亚洲av| 插阴视频在线观看视频| h日本视频在线播放| 欧美zozozo另类| 国产一区二区三区综合在线观看 | 男插女下体视频免费在线播放| 久久久久久久久久久免费av| 国产成年人精品一区二区| 成人亚洲精品av一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美成人一区二区免费高清观看| 一个人看视频在线观看www免费| 国产亚洲91精品色在线| 又爽又黄a免费视频| 五月伊人婷婷丁香| 久久人人爽人人片av| 永久免费av网站大全| 一级毛片我不卡| 亚洲欧美日韩东京热| 成人漫画全彩无遮挡| 美女被艹到高潮喷水动态| 色综合站精品国产| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲精品国产成人久久av| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 免费电影在线观看免费观看| 精品久久久噜噜| 夫妻午夜视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 777米奇影视久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲欧洲国产日韩| 国产精品伦人一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 好男人在线观看高清免费视频| 在线a可以看的网站| 91久久精品国产一区二区成人| 九草在线视频观看| 听说在线观看完整版免费高清| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲精品乱久久久久久| 日日啪夜夜爽| 亚洲欧洲国产日韩| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲自拍偷在线| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 亚洲精品亚洲一区二区| 97精品久久久久久久久久精品| 1000部很黄的大片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美区成人在线视频| 亚洲高清免费不卡视频| 国产成人精品福利久久| 嫩草影院新地址| 人妻一区二区av| 一级二级三级毛片免费看| 看黄色毛片网站| 成人特级av手机在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 综合色av麻豆| 秋霞伦理黄片| 有码 亚洲区| 日韩欧美一区视频在线观看 | 精品国产三级普通话版| 白带黄色成豆腐渣| 精品久久久久久久久av| 免费人成在线观看视频色| 亚洲内射少妇av| 99久久精品一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 日韩欧美一区视频在线观看 | 国精品久久久久久国模美| 内射极品少妇av片p| 日本免费a在线| 国产成人freesex在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产视频首页在线观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 青青草视频在线视频观看| 亚洲最大成人中文| 一区二区三区免费毛片| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 丰满少妇做爰视频| 日本黄大片高清| 熟女人妻精品中文字幕| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 成人二区视频| 亚洲国产av新网站| 丝袜喷水一区| 国产成人精品婷婷| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品人妻久久久影院| 男女那种视频在线观看| 色综合站精品国产| 亚洲性久久影院| 69av精品久久久久久| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 欧美三级亚洲精品| 精品人妻熟女av久视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 99久国产av精品| 日韩欧美三级三区| 美女被艹到高潮喷水动态| 搡老乐熟女国产|