正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選理氣復(fù)胃口服液的醇沉工藝探討

帥小翠，王 婷，徐菲飛

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院藥學(xué)部，四川 成都 610072)

正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選理氣復(fù)胃口服液的醇沉工藝探討

帥小翠，王 婷，徐菲飛

(四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院藥學(xué)部，四川 成都 610072)

目的優(yōu)選理氣復(fù)胃口服液的醇沉除雜質(zhì)工藝，為提升制劑質(zhì)量及規(guī)?；a(chǎn)提供參考。方法以理氣復(fù)胃口服液水提取藥液醇沉后大黃結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率、醇沉后干膏收率為測(cè)定指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)法，考察水提濃縮藥液相對(duì)密度、乙醇濃度、醇沉?xí)r間對(duì)醇沉工藝的影響。結(jié)果以大黃結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，各考察因素對(duì)測(cè)定值的影響程度為：乙醇濃度>醇沉?xí)r間>相對(duì)密度；以干膏率為指標(biāo)時(shí)，各考察因素對(duì)其影響程度為：相對(duì)密度>乙醇濃度>醇沉?xí)r間。結(jié)論依據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，平衡各種影響因素并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，優(yōu)選出的醇沉除雜工藝為：藥液相對(duì)密度為1.20～1.25，乙醇濃度為75%，醇沉?xí)r間為24小時(shí)。該工藝可改善理氣服胃口服液的澄明度，也為其規(guī)模化生產(chǎn)提供了數(shù)據(jù)支撐。

理氣復(fù)胃口服液；正交試驗(yàn)；醇沉工藝

理氣復(fù)胃口服液為我院自制制劑，由木香、熟大黃、枳實(shí)、陳皮等7味中藥制成的口服液，具有行氣導(dǎo)滯，除濕消痞的功效，用于運(yùn)動(dòng)障礙型功能性消化不良，臨床收效良好。研究表明，理氣復(fù)胃口服液作為純中藥制劑在治療功能性消化不良(functional dyspepsia，F(xiàn)D)方面，其促進(jìn)胃排空，改善各種胃排空延遲的作用與胃動(dòng)力藥莫沙必利療效相當(dāng)；在預(yù)防化療后便秘及腹脹方面療效顯著，且不良反應(yīng)輕微[1～2]。理氣復(fù)胃口服液制備過(guò)程為：含揮發(fā)性成分的原藥材如木香、枳實(shí)、陳皮等先行水蒸汽蒸餾提取芳香水，殘?jiān)喜⑵渌兴幮兴逄崛?，除去雜質(zhì)，再進(jìn)行配液。前期我們對(duì)該口服液的水提取工藝進(jìn)行了研究，確定了最佳水提工藝[3]。

中藥口服液的純化/除雜質(zhì)不但影響其外觀，也與口服液的內(nèi)在質(zhì)量密切相關(guān)，通過(guò)純化可除去鞣質(zhì)、果膠、樹脂、蛋白質(zhì)、多糖等相關(guān)雜質(zhì)，一方面可使制劑達(dá)到澄明度要求，同時(shí)也可增加口服液的穩(wěn)定性；中藥口服液的純化方法較多，如醇沉法、高速離心法、澄清劑純化工藝、膜分離法、大孔樹脂法等[4，5]。為提升理氣復(fù)胃口服液的質(zhì)量，改善其澄明度，2015年7～9月，本研究利用傳統(tǒng)工藝醇沉法對(duì)其水提取液進(jìn)行純化，以醇沉后藥液中大黃結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率、干膏率為檢測(cè)指標(biāo)，通過(guò)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化理氣復(fù)胃口服液的醇沉工藝，為不斷提高該制劑的工藝水平及口服液的質(zhì)量提供參考，同時(shí)也為該口服液的規(guī)模生產(chǎn)奠定技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1儀器與試藥電子天平(JJ500型 d=0.01 g)、waters 2690 seporation module；waters 996 photodiode Array Detector，電磁爐、BP211D電子天平(d=0.01 mg，德國(guó)Sartorius公司)、蒸發(fā)皿、水浴鍋、電烘箱等。藥材：木香、熟大黃、枳實(shí)、陳皮等7味中藥飲片，購(gòu)于四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)檢驗(yàn)，均符合《中國(guó)藥典》2010版標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)照品：大黃酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110757-200206)，大黃素(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110756-200210)，大黃酚(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110796-200208)，大黃素甲醚(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110758-200611)，蘆薈大黃素(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110795-200806)。

1.2方法

1.2.1指標(biāo)選擇 理氣復(fù)胃口服液的主要功效為行氣導(dǎo)滯、除濕消痞。文獻(xiàn)資料顯示[6，7]，與該功效密切相關(guān)的組分有揮發(fā)油類(行氣)和大黃所含蒽醌類成分(導(dǎo)滯)；大黃氣味重濁，直降下行，走而不守，有斬關(guān)奪門之力，專攻心腹脹滿，胸胃蓄熱。在行醇沉法除去雜質(zhì)時(shí)，應(yīng)充分考慮口服液中有效成分的保留，故將蒽醌類有效成分的含量作為考察的主要指標(biāo)，以減少或避免此類物質(zhì)的損失，影響療效；醇沉后的干膏收率對(duì)口服液的澄明度乃至有效成分的含量均有一定影響，故亦將干膏收率作為檢測(cè)指標(biāo)。

1.2.2因素水平選擇 經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)，影響醇沉工藝的因素主要有：水提濃縮藥液相對(duì)密度、乙醇濃度(醇沉?xí)r乙醇體積分?jǐn)?shù))、醇沉?xí)r間[8]，為此，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察此3因素對(duì)理氣復(fù)胃口服液醇沉工藝的影響，各因素均設(shè)三個(gè)水平，因素水平見表1，以L9(34)正交表安排實(shí)驗(yàn)，見表2。

表1 醇沉工藝因素水平表

表2 醇沉工藝正交實(shí)驗(yàn)安排表和結(jié)果

1.2.3樣品制備 藥材經(jīng)水提取后，量取等量的提取液，按照正交設(shè)計(jì)的安排表(表2)方法進(jìn)行試驗(yàn)，所得藥液經(jīng)過(guò)濾，濃縮，定容50 ml，作為干膏率測(cè)定和含量測(cè)定的供試藥液。

1.2.4干膏率測(cè)定 精密量取供試藥液10 ml，置干燥恒重的蒸發(fā)皿中，于105 ℃電熱恒溫干燥箱中干燥3 h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，迅速稱重，計(jì)算干膏率(干膏率=10 ml提取液的干膏質(zhì)量×5/對(duì)應(yīng)量藥材質(zhì)量×100%)。

1.2.5含量測(cè)定方法[9]①色譜條件：色譜柱Phenomenex Gemini C18(250 × 4.6 mm，5 μm，110 A)，保護(hù)柱Security Guard Cartridges Gemini C18(4×3.0 mm)，柱溫35 ℃；流動(dòng)相為甲醇-乙腈-0.01 mol/L，NaH2PO4(pH1.5)(2：5：3.5)，流速1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)435 nm。②對(duì)照品配制：精密稱取各對(duì)照品適量，配制成每1 ml約含大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素各4 μg，大黃素甲醚2 μg的混合工作溶液，置4 ℃冰箱避光儲(chǔ)存?zhèn)溆谩＂酃┰嚻啡芤褐苽渑c測(cè)定 總蒽醌測(cè)定：精密量取混勻的供試品溶液5 ml，置25 ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。精密量取稀釋液5 ml，置圓底燒瓶中，加入8%鹽酸10 ml，混勻，再加入三氯甲烷10 ml，混勻，置沸水浴上回流1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌燒瓶，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷液液提取3次，每次10 ml，合并三氯甲烷提取液，置37 ℃水浴上氮?dú)鈸]干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，混勻，以微孔濾膜(0.425 μm)過(guò)濾后進(jìn)樣10 μl。游離蒽醌測(cè)定：取樣品40 μl，加入3倍量甲醇，混勻，高速離心后取上清液，過(guò)濾，進(jìn)樣10 μl。

1.2.6結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率計(jì)算 結(jié)合蒽醌=總蒽醌-游離蒽醌。結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率=醇沉后結(jié)合蒽醌含量/醇沉前結(jié)合蒽醌含量×100%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法將所得干膏率、結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率，數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件分析處理。對(duì)正交結(jié)果采用方差分析。P< 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各因素對(duì)醇沉工藝的影響醇沉工藝正交實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見表2、表3，直觀分析，以干膏率為指標(biāo)，各因素對(duì)醇沉的影響程度A>B>C，干膏率越低越好，最佳組合為A3B3C3；以大黃結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，各因素對(duì)醇沉的影響程度B>C>A，轉(zhuǎn)移率越高越好，最佳組合為A3B2C1。由表4可知，因素A、因素B能夠顯著影響醇沉工藝的干膏率；由表5可知，因素B對(duì)結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率的影響具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。鑒于口服液澄明度的要求，重點(diǎn)考慮干膏率的影響，且經(jīng)分析，醇沉工藝的乙醇濃度65%和75%所得結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率沒有顯著性差異，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，擬定醇沉工藝為A3B3C1：即醇沉?xí)r藥液相對(duì)密度為1.20～1.25，乙醇濃度為75%，醇沉?xí)r間為24小時(shí)。

表3 不同因素下正交結(jié)果分析

注：表3中K1、K2、K3為對(duì)應(yīng)因素1水平、2水平、3水平干膏率之和，R為極差。K*1、K*2、K*3為對(duì)應(yīng)因素1水平、2水平、3水平結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率之和，R*為極差。

表4 醇沉工藝干膏率方差分析

表5 醇沉工藝結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率方差分析

2.2醇沉工藝驗(yàn)證按正交優(yōu)選出的工藝進(jìn)行3批樣品的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率均值為83.10%，RSD為1.91%；干膏率均值為11.78%，RSD為0.42%，可見該醇沉工藝穩(wěn)定可行。結(jié)合蒽醌轉(zhuǎn)移率、干膏率實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

表6 醇沉工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

理氣復(fù)胃口服液由多味中藥組成，其成分復(fù)雜，不同化學(xué)成分理化性質(zhì)各異，一些雜質(zhì)的存在，除了影響口服液的外觀如澄明度等，還可能在制備過(guò)程中導(dǎo)致有效成分的損失，甚至影響口服液在貯存過(guò)程中的穩(wěn)定性。如何在保留有效成分的前提下盡可能除去雜質(zhì)，是提升中藥口服液質(zhì)量的關(guān)鍵之一。雖然中藥口服液除雜方法較多，但基于理氣復(fù)胃口服液所含組分的特性，同時(shí)考慮生產(chǎn)實(shí)際的相關(guān)成本與效益，本研究最終選擇醇沉法進(jìn)行理氣復(fù)胃口服液的除雜工藝。

在理氣復(fù)胃口服液的醇沉工藝優(yōu)選過(guò)程中，為保證其療效及口服液最后的澄明度，我們選擇了大黃所含蒽醌類成分及提取液的干膏率作為測(cè)定指標(biāo)。前者直接反映在醇沉過(guò)程中有效成分的保留程度；后者主要反映除雜質(zhì)程度，與有效成分的保留也有一定關(guān)聯(lián)。干膏率越低可能更有利于口服液的澄明度，但條件控制不佳則可能影響有效成分的含量。綜合考慮各種因素，結(jié)合最后驗(yàn)證試驗(yàn)及生產(chǎn)實(shí)際，最終確定的醇沉最佳工藝為：藥液相對(duì)密度1.20-1.25，乙醇濃度為75%，醇沉24小時(shí)。

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OptimizationofethanolprecipitationprocessforLiqifuweioralliquidbyorthogonaltest

SHUAIXiao-cui，WANGTing，XUFei-fei

(DepartmentofPharmacy，SichuanAcademyofMedicalSciences&SichuanProvincialPeople’sHospital，Chengdu610072，China)

ObjectiveTo optimize the ethanol sedimentation process of Liqifuwei oral liquid in order to provide the reference for improving the quality and large-scale production of the oral liquid.MethodsBy using the anthraquinone transfer ratio of ethanol sedimentation solution and the yield of dry extract as indexes，the effect of the relative density of concentrated liquor extracted by water，the ethanol concentration and the alcohol precipitation time on the ethanol precipitation process was investigated with orthogonal experiment method.ResultsWhen anthraquinone transfer rate as detecting index，the various influence on the ethanol precipitation process were that ethanol concentration > alcohol precipitation time > the relative density.When the yield of dry extract as detecting index，the various influence on the ethanol precipitation process were that relative density > ethanol concentration >alcohol precipitation time.ConclusionAccording to the test results，balancing various influences factors and combining with the actual production，the optimal alcohol sedimentation process is that the relative density of concentrated liquor extracted by water is 1.20～1.25，ethanol concentration was 75% and alcohol precipitation time was 24 hours.The optimized process could improve the clarity of Liqifuwei oral liquid，and provide data supporting its large-scale production as well.

Liqifuwei oral liquid； Orthogonal experiment method； Ethanol precipitation process

R917

A

1672-6170(2017)06-0110-03

2017-03-10；

2017-08-23)