脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在慢性創(chuàng)面治療中的研究進(jìn)展

李展鵬 周志紅 黃海燕 李潔 吳志遠(yuǎn)

[摘要]慢性創(chuàng)面的形成及愈合機(jī)制較為復(fù)雜，是目前醫(yī)學(xué)界的一大難題。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Adipose derived stem cells，ADSCs）是一類具有自我復(fù)制及多向分化潛能的成體干細(xì)胞，它對創(chuàng)面上皮化、血管化及調(diào)節(jié)創(chuàng)面炎癥反應(yīng)等的積極作用已被大量體外實(shí)驗(yàn)及基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，這表明ADSCs有望成為創(chuàng)面治療的一種新的可行方法應(yīng)用于臨床。本文就ADSCs在慢性創(chuàng)面治療中的研究進(jìn)展做一綜述。

[關(guān)鍵詞]脂肪干細(xì)胞;慢性創(chuàng)面;創(chuàng)面愈合;分化潛能;血管化

[中圖分類號]R641? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2022）03-0176-04

Research Progress of Adipose Mesenchymal Stem Cells in the Treatment

of Chronic Wounds

LI Zhanpeng， ZHOU Zhihong， HUANG Haiyan， LI Jie， WU Zhiyuan

（Department of Plastic Surgery， Affiliated Hospital of Guangdong Medical University， Zhanjiang 524000， Guangdong， China）

Abstract： The formation and healing mechanism of chronic wound is complex， which is a major problem in the medical field. Adipose derived stem cells（ADSCs） is a kind of self replication and multi-directional differentiation potential of somatic stem cells， a large number of in vitro experiment and basic experiment has confirmed it to the wound of epithelium， blood vessels， regulate wound inflammation has a positive effect， which suggests that ADSCs is expected to become a new feasible method of wound treatment for clinical application.This article reviews the research progress of ADSCs in the treatment of chronic wounds.

Key words： adipose-derived stem cells; chronic wounds; wound healing; differentiation potential; vascularization

慢性創(chuàng)面（Chronic wound）是經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)治療4周后體表軟組織仍無法愈合或沒有愈合傾向，無法達(dá)到受傷部位的解剖和功能完整性的創(chuàng)面[1]。但創(chuàng)面愈合時(shí)間并非慢性創(chuàng)面的絕對判定標(biāo)準(zhǔn)，因其還與創(chuàng)面大小、病因及全身?xiàng)l件等諸多因素相關(guān)，通常認(rèn)為創(chuàng)面每周愈合比例低于10%～15%或每月愈合比例低于50%時(shí)，可被認(rèn)為是慢性創(chuàng)面。慢性創(chuàng)面的傳統(tǒng)治療方法為傷口換藥、皮瓣修復(fù)、VSD負(fù)壓吸引、低水平激光及高壓氧等[2]。近年來，血小板濃縮物（如：PRP、PRF）、干細(xì)胞移植、精準(zhǔn)清創(chuàng)、新型敷料等新技術(shù)也逐漸進(jìn)入人們視野。然而對于整形外科而言，在創(chuàng)面得到再次發(fā)生上皮化，由開放狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榉忾]狀態(tài)的基本前提下，創(chuàng)面愈合后的外觀改善、毛發(fā)再生、瘢痕增生、功能及感覺恢復(fù)等方面亦是整形外科醫(yī)師需重點(diǎn)考慮的內(nèi)容。ADSCs是間充質(zhì)干細(xì)胞（Mesenchymal stem cells，MCS）的一員，研究發(fā)現(xiàn)ADSCs可通過分泌生長因子、調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的炎癥作用、促進(jìn)創(chuàng)面再上皮化等多個(gè)途經(jīng)改善創(chuàng)面愈合[3-5]，可為臨床上慢性創(chuàng)面的治療提供新的思路和方法。

1? 慢性創(chuàng)面愈合

創(chuàng)面修復(fù)涉及多個(gè)過程，如：炎癥反應(yīng)、細(xì)胞定向遷移、細(xì)胞增殖分化、胞外基質(zhì)沉積、組織重塑等多個(gè)生物學(xué)過程，正常創(chuàng)面愈合一般分為四期：止血期、炎癥反應(yīng)期、細(xì)胞增生期及組織重塑期，每一階段參與的細(xì)胞因子及修復(fù)過程各不相同又相互重疊，密不可分[6]。然而，在高血糖、高血壓、感染、肥胖等不利因素下，正常創(chuàng)面修復(fù)的有利條件被破壞，創(chuàng)面炎癥反應(yīng)加強(qiáng)，炎性因子持續(xù)分泌，過度增生的中心粒細(xì)胞持續(xù)分泌蛋白酶，可使大量纖維素、膠原、蛋白多糖被破壞[7];創(chuàng)面的細(xì)菌除了可直接破壞組織外，還可在創(chuàng)面形成特殊的生物膜躲避機(jī)體炎癥細(xì)胞的攻擊，使中心粒細(xì)胞不斷增殖及遷移，加重了創(chuàng)面炎癥期的延長[8]。同時(shí)，創(chuàng)面的缺血缺氧除了使組織得不到足夠營養(yǎng)物質(zhì)灌注外，還發(fā)生細(xì)胞膜的破壞，并出現(xiàn)一系列的“瀑布反應(yīng)”：內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）功能下降、動員內(nèi)皮祖細(xì)胞（EPCs）生成障礙、巨噬細(xì)胞遷移減弱、吞噬能力下降等，新生毛細(xì)血管生成更加受限，惡性循環(huán)加重組織缺血缺氧，慢性傷口未能及時(shí)通過傷口有組織的愈合階段[9]。盡管病因不同，慢性傷口的典型特征是促炎細(xì)胞因子、蛋白酶、活性氧及衰老細(xì)胞等不利因素增強(qiáng)和功能性干細(xì)胞的缺乏[10]。

1.1 ADSCs的提取及其鑒定：MSCs是一種具有多向分化和自我更新能力的成體干細(xì)胞，可在多種組織中分離出來，如：脂肪、臍血、胎盤、牙齦、羊水、腦等。目前研究較多的為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）和ADSCs，與BMSCs相比ADSCs有以下優(yōu)勢：①提取技術(shù)簡單，患者痛苦較小;②脂肪提取物中MSCs約占有核細(xì)胞總數(shù)的2%，而骨髓中僅為0.001%～0.004%，且BMSCs的數(shù)量隨著年齡的增長而減少，這為老年患者的提取帶來不便[11];③ADSCs比BMSCs具有更顯著的血管生成、免疫調(diào)節(jié)作用及更強(qiáng)的增殖能力，無需體外擴(kuò)增即可使用[12];④與其他干細(xì)胞如胚胎干細(xì)胞等相比，ADSCs無倫理道德問題。

1.2 ADSCs的制備：根據(jù)我國《脂肪組織來源的干細(xì)胞提取、制備及儲存質(zhì)量管理專家共識》，脂肪干細(xì)胞的制備主要分為以下幾個(gè)步驟：①ADSCs的分離：按脂肪組織體積加入相應(yīng)濃度Ⅰ型膠原酶或胰蛋白酶混合液，振蕩、離心，吸棄上層液，重懸細(xì)胞沉淀后過濾離心，并獲得基質(zhì)血管成分（stromal vascular fraction，SVF） ;②接種SVF至培養(yǎng)皿中培養(yǎng)與傳代：③將P2或P3代細(xì)胞濃度至（2～3）×106個(gè)/毫升，分裝至細(xì)胞凍存管中并轉(zhuǎn)入–196℃液氮中建立脂肪干細(xì)胞種子細(xì)胞庫;④將傳至P5代的細(xì)胞制成均質(zhì)細(xì)胞懸液，取樣進(jìn)行臨床使用前的質(zhì)量控制和安全鑒定，分裝于凍存管并保存于–196℃液氮中，建立ADSCs工作細(xì)胞庫;⑤確定脂肪干細(xì)胞凍存數(shù)量[13]。

目前，仍未發(fā)現(xiàn)ADSCs的特異性表面標(biāo)記物，現(xiàn)階段采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫組織化學(xué)觀察細(xì)胞表面CD抗原的表達(dá)情況。ADSCs表達(dá)典型的間充質(zhì)標(biāo)記物如CD13、CD29、CD44、CD73、CD90、CD105，低表達(dá)造血細(xì)胞表面抗原如 CD31、CD45。但原代細(xì)胞與體外擴(kuò)增細(xì)胞的表面分子表達(dá)并不完全相同，某些間質(zhì)相關(guān)的分子標(biāo)記隨培養(yǎng)時(shí)間延長而逐漸增多，如干細(xì)胞相關(guān)分子標(biāo)記如CD34在培養(yǎng)早期即表現(xiàn)為表達(dá)高峰[14]。然而，目前國內(nèi)外尚缺乏ADSCs提取、分離、制備及儲存的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范。

2? ADSCs促進(jìn)慢性創(chuàng)面愈合的相關(guān)機(jī)制

2.1 ADSCs外泌體（Exosome，Exo）：外泌體為細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的脂質(zhì)雙分子層多囊泡體，內(nèi)含細(xì)胞因子、DNA、mRNAs、miRNAs等物質(zhì)，以胞吐的方式參與細(xì)胞信號傳導(dǎo)，可在長距與短距調(diào)控細(xì)胞新陳代謝。Zhang等[15]研究發(fā)現(xiàn)，ADSCs-Exo通過激活PI3K/Akt信號通路促進(jìn)Ⅰ型膠原蛋白（Col1）、Ⅲ型膠原蛋白（Col3）、bFGF、VEGF的分泌，優(yōu)化膠原沉積與成纖維細(xì)胞增殖遷移，加速創(chuàng)面愈合。另外，田立新等[16]通過體外實(shí)驗(yàn)在角質(zhì)形成細(xì)胞加入ADSCs-Exo培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)ERK1/2、AKT和STAT3通路的磷酸化水平顯著高于對照組，提示ADSCs-Exo可能通過ERK1/2、AKT和STAT3信號通路促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增生與形成，從而加快創(chuàng)面的形成進(jìn)程。

2.2 分泌細(xì)胞因子：早期研究認(rèn)為，MSCs修復(fù)創(chuàng)面的機(jī)制為向原有缺損組織定向分化。但最近研究發(fā)現(xiàn)，行MSCs移植后，大部分干細(xì)胞數(shù)量急劇減少，只有少量可通過自身增殖分化替代受損組織，而大部分則依賴ADSCs的旁分泌作用改變局部微環(huán)境促進(jìn)創(chuàng)面愈合[3]。據(jù)研究，ADSCs可旁分泌多種細(xì)胞因子，如：血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、堿性成纖維生長因子（b-FGF）、胰島素樣生長因子（IGF）、轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、血管生成素1（Ang-1）、肝細(xì)胞生長因子（HGF）及血小板源性生長因子（PDGF）等，通過與相應(yīng)受體結(jié)合參與了血管生成、膠原合成、調(diào)控炎癥及細(xì)胞增值分化等過程參與創(chuàng)面修復(fù)[3]。Kim等[17]發(fā)現(xiàn)ADSCs可旁分泌bFGF、VEGF、TGF等多種生長因子提高成纖維細(xì)胞的遷移和分泌能力，以及新生血管分化能力。

2.3 調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的炎癥作用：創(chuàng)面早期炎癥的主力軍是中心粒細(xì)胞，隨后在中心粒細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子、趨化因子的作用下，單核細(xì)胞被募集至創(chuàng)面，進(jìn)而分化成巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞在吞噬病原體、促進(jìn)血管化、組織重塑等方面發(fā)揮重要作用[4，18-19]，其可分為未分化的（M0）、促進(jìn)炎癥反應(yīng)（M1）與抑制炎癥反應(yīng)類型（M2）的巨噬細(xì)胞，其中M1巨噬細(xì)胞激活時(shí)可使TNF-α、IL1β分泌增加，加重組織破壞，延緩愈合進(jìn)程[4]。研究表明，ADSCs除了可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞由M1向M2轉(zhuǎn)化，亦可在促進(jìn)巨噬細(xì)胞由M0向M2分化的同時(shí)抑制M1的功能[20-21]，而M1的減少可避免持續(xù)分泌的蛋白酶對纖維蛋白、膠原蛋白的破壞，從而縮短炎癥反應(yīng)期[5]。Navone等[22]體外實(shí)驗(yàn)證明，ADSCs通過輕度下調(diào)巨噬細(xì)胞遷移抑制因子（Mif），誘導(dǎo)真皮成纖維細(xì)胞遷移，促進(jìn)創(chuàng)面愈合。

2.4 促進(jìn)新生血管形成：新生血管的形成主要有兩個(gè)階段，血管生成過程與血管形成過程，Zografou等[23]通過聯(lián)合ADSCs與皮片移植作用于小鼠創(chuàng)面，結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組小鼠移植皮片VEGF、TGF等生長因子表達(dá)明顯升高，血管密度和血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)量增加。同時(shí)，ADCSs亦可通過外泌體和分泌細(xì)胞因子的方式提高創(chuàng)面VEGF、HGF、Ang-1等生物活性物質(zhì)的分泌，生成的血管內(nèi)皮生長因子通過與VEGFR2結(jié)合，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖與遷移，同時(shí)增加血管內(nèi)皮通透性，促進(jìn)新生血管網(wǎng)的重建[3，15]，創(chuàng)面的缺血缺氧使局部微環(huán)境紊亂，創(chuàng)面血管化的速度及程度決定了創(chuàng)面恢復(fù)的最終質(zhì)量，對創(chuàng)面修復(fù)十分重要，而ADSCs在此方面顯示了巨大的潛能。

2.5 促進(jìn)創(chuàng)面再上皮化：創(chuàng)面愈合的重要過程之一就是通過角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及表皮干細(xì)胞等共同作用使創(chuàng)面發(fā)生再上皮化，將創(chuàng)面由開放變?yōu)榉忾]狀態(tài)，避免創(chuàng)面與外界直接接觸，降低感染風(fēng)險(xiǎn)，在這一過程中角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞起著重要作用。有意思的是，ADSCs還可釋放抗纖維化分子TGF-β1對病變處膠原的合成進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)，避免過多的膠原蛋白沉積，造成纖維化損傷，并影響外觀[24]。Ren[25]通過基因表達(dá)分析以及觀察ADSCs微囊泡刺激后角質(zhì)形成細(xì)胞，成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中AKT和ERK信號通路的激活水平，發(fā)現(xiàn)ADSCs可顯著促進(jìn)細(xì)胞的增殖，遷移和血管生成。增殖標(biāo)志物（細(xì)胞周期蛋白D1、D2、A1、A2）和VEGFA，PDGFA的基因表達(dá)明顯上調(diào)，AKT和ERK信號通路的激活使得局部注射部位顯著的上皮再形成，膠原蛋白沉積和新血管形成。Kim等[26]研究表明ADSCs可上調(diào)包括Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、纖連蛋白在內(nèi)的ECM蛋白mRNA水平，下調(diào)MMP1抑制細(xì)胞外基質(zhì)的降解。

3? ADSCs治療慢性創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究與臨床應(yīng)用

3.1 轉(zhuǎn)基因：基因治療是指運(yùn)用基因移植技術(shù)將目的基因?qū)爰?xì)胞并使之表達(dá)，從而獲得或加強(qiáng)某項(xiàng)功能以達(dá)到治療目的的一項(xiàng)技術(shù)。李江璇等[27]將攜VEGF165基因慢病毒轉(zhuǎn)染ADSCs，其表達(dá)VEGF及bFGF的量超出未轉(zhuǎn)染組2～3倍，提取轉(zhuǎn)染后的VEGF及bFGF作用于體外，發(fā)現(xiàn)兩者有明顯促細(xì)胞增殖、遷移的能力。王先成等[28]將表皮生長因子（EGF）基因轉(zhuǎn)染人ADSCs，將誘導(dǎo)后的轉(zhuǎn)EGF基因ADSCs移植于裸鼠皮膚缺損模型，發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組創(chuàng)面修復(fù)速度明顯加快，形成的新生表皮層厚且分層明顯。同時(shí)，免疫組化結(jié)果顯示試驗(yàn)組中EFG基因在新生表皮有較強(qiáng)的陽性表達(dá)，表明轉(zhuǎn)EGF基因的ADSCs在體內(nèi)成活并繼續(xù)分化為表皮細(xì)胞。研究中未見到細(xì)胞轉(zhuǎn)染導(dǎo)致的細(xì)胞突變，但是基因修飾后的移植安全性、體外干細(xì)胞生物學(xué)特性、ADSCs作用于機(jī)體的有效性等，尚需要動物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)進(jìn)一步評估。

3.2 構(gòu)建支架復(fù)合體移植：ADSCs在移植部位保持足夠的數(shù)量及有效的血供是其成活及發(fā)揮作用的關(guān)鍵步驟，而在移植ADSCs的實(shí)踐應(yīng)用中，ADSCs可能會隨著移植物懸浮液的流失導(dǎo)致干細(xì)胞數(shù)目的不確定，細(xì)胞支架可為細(xì)胞提供一個(gè)類似細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的結(jié)構(gòu)，通過一個(gè)三維基質(zhì)的方式引導(dǎo)干細(xì)胞的附著和生長，可減少干細(xì)胞的流失。Shafei[29]將載有ADSCs-Exo的Alg水凝膠應(yīng)用于小鼠全層皮膚缺損，其血管密度、膠原合成量、角質(zhì)細(xì)胞合成速度及創(chuàng)面愈合時(shí)間都優(yōu)于對照組;240 h后，Alg水凝膠逐漸降解，且降解速度隨時(shí)間延長而增加，但小鼠創(chuàng)面愈合速度不受影響。Zhang等[30]運(yùn)用新型膠原海綿支架（NCSS）聯(lián)合ADSCs作用于小鼠創(chuàng)面，發(fā)現(xiàn)在7、10、14 d時(shí)血管密度、創(chuàng)面面積等指標(biāo)都優(yōu)于單純ADSCs組?？讖酱?，孔隙率高的支架為新生血管提供有利環(huán)境，可提高血管形成速度，對創(chuàng)面早期愈合十分有利。Alessandra等[31]制備了高孔隙率、大孔徑、機(jī)械強(qiáng)度高的3-羥基丁酸-co-羥基戊酸（PHBV）作生物支架聯(lián)合ADSCs移植，PHBV支架的孔隙率為（82.2±0.5）%，平均孔徑（122.4±58.1） μm，同時(shí)具有很高的保水能力（約可保留創(chuàng)面38%水分），不僅能夠保持傷口的濕潤環(huán)境并加強(qiáng)ADSCs的分泌功能，還可自我降解、誘導(dǎo)自身ECM沉積，促進(jìn)創(chuàng)面愈合及改善瘢痕。此外，還有透明質(zhì)酸、Ⅰ型膠原及人脫細(xì)胞基質(zhì)等多種細(xì)胞支架。

3.3 聯(lián)合血小板濃縮物：PRP、PRF是人外周血經(jīng)離心處理后得到的血液產(chǎn)物，富含血小板、PDGF、VEGF及IGF等活性物質(zhì)。PRP本身可通過釋放細(xì)胞因子、抗菌、血管生成等方式促進(jìn)創(chuàng)面愈合，當(dāng)與ADSCs聯(lián)合后，它可作為天然的生物支架促進(jìn)ADSCs釋放VEGF、bFGF等細(xì)胞因子改善皮膚厚度及膠原排列，上調(diào)血管形成因子，改善創(chuàng)面基質(zhì)條件[32]。丁寅佳[33]等將ADSCs聯(lián)合PRF作用于糖尿病鼠模型中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在7、10、14 d時(shí)ADSCs組的創(chuàng)面愈合時(shí)間、毛細(xì)血管生成速度及CD31表達(dá)顯著優(yōu)于對照組。Chen等[34]將ADSCs聯(lián)合PRP作用于小鼠下肢缺血性損傷模型中，測得缺氧誘導(dǎo)因子、CD31、VEGF和內(nèi)皮細(xì)胞一氧化氮合酶的表達(dá)增加，激光多普勒灌注掃描缺血肢體的灌注比較正常的灌注比高5%，同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)5%和7.5%的PRP聯(lián)合ADSCs治療效果最佳。

3.4 臨床應(yīng)用：目前，已有學(xué)者將ADSCs單獨(dú)或聯(lián)合其他方法應(yīng)用于創(chuàng)面的治療，但此研究尚處于起步階段，國內(nèi)外文獻(xiàn)資料對臨床應(yīng)用的報(bào)道存在病例數(shù)少，缺乏大量隨機(jī)對照數(shù)據(jù)支持的問題。再者，ADSCs無統(tǒng)一制作流程，這對其療效判斷存在一定影響。趙月強(qiáng)等[35]在慢性創(chuàng)面運(yùn)用皮瓣移植修復(fù)中聯(lián)合ADSCs治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組患者治療后，創(chuàng)面明顯縮小，患者進(jìn)行皮瓣移植術(shù)后創(chuàng)面感染率明顯下降，同時(shí)患肢經(jīng)皮氧分壓較術(shù)前明顯提高。Stessuk等[36]將ADSCs聯(lián)合PRP應(yīng)用于Ⅱ型糖尿病患者的慢性傷口，7 d后傷口出現(xiàn)紅潤肉芽組織，潰瘍面積減小明顯，且尚未觀察到瘢痕增生或收縮。Bura等[37]通過抽取患者自身腹部脂肪提取ADSCs，將其應(yīng)用于嚴(yán)重肢體缺血患者，結(jié)果顯示治療后患肢皮下氧分壓上升，潰瘍好轉(zhuǎn)，傷口明顯改善。值得注意的是不同部位提取的ADSCs其生物學(xué)性質(zhì)可能有所不同，腹部脂肪獲取的ADSCs要比其他位置（包括手臂、臀部及下肢）有更好的抗凋亡特性。

4? 討論

慢性創(chuàng)面機(jī)制復(fù)雜，涉及多個(gè)學(xué)科，是目前尚未攻克的醫(yī)學(xué)難題之一。作為組織工程技術(shù)熱點(diǎn)之一的間充質(zhì)干細(xì)胞技術(shù)，在創(chuàng)面愈合、改善瘢痕、面部年輕化、毛發(fā)移植、骨及軟骨再生等多個(gè)方面顯示其巨大的優(yōu)勢和潛能[38]，已在心梗、肛瘺、改善膚質(zhì)、硬皮病及炎性腸病等方面取得了一定效果。

但ADSCs在顯示其令人鼓舞的應(yīng)用前景的同時(shí)，其安全性依然有待進(jìn)一步探討，如人們最關(guān)心的問題：ADSCs移植是否具有致癌性？經(jīng)體外多代培養(yǎng)且高濃度的ADSCs植入人體后其表型及生物學(xué)行為會否改變？基礎(chǔ)科學(xué)和動物研究已經(jīng)證明了多能干細(xì)胞可通過細(xì)胞因子與癌細(xì)胞作用來刺激腫瘤生長，因此，ADSCs的致癌性依然是個(gè)未知數(shù)，需要引起高度警惕。同時(shí)，目前缺乏不同年齡、病因及基礎(chǔ)情況等對ADSCs療效的研究，且臨床應(yīng)用病例數(shù)較少，缺乏長期效果追蹤及循證醫(yī)學(xué)證據(jù)，再者，ADSCs提取、制備尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)流程以及如何最大限度地利用ADSCs的多向分化能力等，都是學(xué)者們需考慮及解決的問題，有待進(jìn)一步探討與研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Cheng B，F(xiàn)u X.The focus and target： angiogenesis in refractory wound healing[J]. Int J Low Extrem Wounds，2018，17（4）：301-303.

[2]Xia G，Zhai D，Sun Y，et al.Preparation of a novel asymmetric wettable chitosan-based sponge and its role in? promoting chronic wound healing[J]. Carbohydr Polym，2020，227：115296.

[3]Hutchings G，Janowicz K，Moncrieff L，et al.The proliferation and differentiation of adipose-derived stem cells in neovascularization and angiogenesis[J].Int J Mol Sci，2020，21（11）：3790.

[4]Han Y，Ren J，Bai Y，et al.Exosomes from hypoxia-treated human adipose-derived mesenchymal stem cells enhance angiogenesis through VEGF/VEGF-R[J].Int J Biochem Cell Biol，2019，109：59-68.

[5]Annamalai R T，Turner P A，Carson W T，et al.Harnessing macrophage-mediated degradation of gelatin microspheres for spatiotemporal control of BMP2 release[J]. Biomaterials，2018，161：216-227.

[6]Gurtner G C，Werner S，Barrandon Y，et al.Wound repair and regeneration[J]. Nature， 2008，453（7193）：314-321.

[7]Zhao R，Liang H，Clarke E，et al.Inflammation in chronic wounds[J].Int J Mol Sci， 2016，17（12）：2085.

[8]Edwards G A，Shymanska N V，Pierce J G.5-benzylidene-4-oxazolidinones potently inhibit biofilm formation in methicillin-resistant staphylococcus aureus[J].Chem Commun （Camb），2017，53（53）：7353-7356.

[9]Chen Z，Haus J M，Chen L，et al.CCL28-induced CCR10/eNOS interaction in angiogenesis and skin wound healing[J].FASEB J，2020，34（4）：5838-5850.

[10]Frykberg R G，Banks J.Challenges in the treatment of chronic wounds[J].Adv Wound Care （New Rochelle），2015，4（9）：560-582.

[11]Luck J，Weil B D，Lowdell M，et al.Adipose-derived stem cells for regenerative wound healing applications：understanding the clinical and regulatory environment[J].Aesthet Surg J，2020，40（7）：784-799.

[12]Ivanova-Todorova E，Bochev I，Mourdjeva M，et al.Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells are more potent suppressors of dendritic cells differentiation compared to bone marrow-derived mesenchymal stem? cells[J]. Immunol Lett，2009，126（1-2）：37-42.

[13]中國醫(yī)藥生物技術(shù)協(xié)會皮膚軟組織修復(fù)與重建技術(shù)分會.脂肪組織來源的干細(xì)胞提取、制備及儲存質(zhì)量管理專家共識[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志， 2018，43（10）：811-815.

[14]Bourin P，Bunnell B A，Casteilla L，et al.Stromal cells from the adipose tissue-derived stromal vascular fraction and culture expanded adipose tissue-derived stromal/stem cells： a joint statement of? the International Federation for Adipose Therapeutics and Science （IFATS） and the International Society for Cellular Therapy （ISCT）[J].Cytotherapy，2013，15（6）：641-648.

[15]Zhang W，Bai X，Zhao B，et al.Cell-free therapy based on adipose tissue stem cell-derived exosomes promotes wound healing via the PI3K/Akt signaling pathway[J]. Exp Cell Res，2018，370（2）：333-342.

[16]田新立，江波，顏洪.脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源外泌體對角質(zhì)形成細(xì)胞增殖和遷移的影響與機(jī)制[J].中國組織工程研究，2019，23（1）：68-73.

[17]Kim W S， Park B S，Sung J H，et al.Wound healing effect of adipose-derived stem cells： a critical role of secretory? factors on human dermal fibroblasts[J].J Dermatol Sci，2007，48（1）：15-24.

[18]Recalcati S，Gammella E，Buratti P，et al.Macrophage ferroportin is essential for stromal cell proliferation in wound healing[J].Haematologica，2019，104（1）：47-58.

[19]Yu T，Gao M，Yang P，et al.Insulin promotes macrophage phenotype transition through PI3K/Akt and PPAR-gamma? signaling during diabetic wound healing[J]. J Cell Physiol，2019，234（4）：4217-4231.

[20]Manning C N，Martel C，Sakiyama-Elbert S E，et al.Adipose-derived mesenchymal stromal cells modulate tendon fibroblast responses to macrophage-induced inflammation in vitro[J].Stem Cell Res Ther，2015，6：74.

[21]Jaiswal A，Reddy S S，Maurya M，et al.MicroRNA-99a mimics inhibit M1 macrophage phenotype and adipose tissue inflammation by targeting TNFalpha[J]. Cell Mol Immunol， 2019，16（5）：495-507.

[22]Navone S E，Pascucci L，Dossena M，et al.Decellularized silk fibroin scaffold primed with adipose mesenchymal stromal cells improves wound healing in diabetic mice[J].Stem Cell Res Ther，2014，5（1）：7.

[23]Zografou A，Tsigris C，Papadopoulos O，et al. Improvement of skin-graft survival after autologous transplantation of adipose-derived stem cells in rats[J].J Plast Reconstr Aesthet Surg，2011，64（12）：1647-1656.

[24]Chai C Y，Song J，Tan Z，et al.Adipose tissue-derived stem cells inhibit hypertrophic scar （HS） fibrosis via p38/MAPK pathway[J].J Cell Biochem， 2019，120（3）：4057-4064.

[25]Ren S，Chen J，Duscher D，et al.Microvesicles from human adipose stem cells promote wound healing by optimizing cellular functions via AKT and ERK signaling pathways[J]. Stem Cell Res Ther，2019，10（1）：47.

[26]Kim W S，Park B S，Sung J H，et al.Wound healing effect of adipose-derived stem cells： a critical role of secretory? factors on human dermal fibroblasts[J].J Dermatol Sci，2007，48（1）：15-24.

[27]李江璇.VEGF基因修飾后人脂肪干細(xì)胞上清對成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的影響[D].廣州：暨南大學(xué)，2015.

[28]王先成.EGF基因轉(zhuǎn)染人脂肪干細(xì)胞體外誘導(dǎo)表皮細(xì)胞修復(fù)創(chuàng)面的實(shí)驗(yàn)研究[D].北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2006.

[29]Shafei S，Khanmohammadi M，Heidari R，et al.Exosome loaded alginate hydrogel promotes tissue regeneration in full-thickness skin wounds： An in vivo study[J]. J Biomed Mater Res A，2020，108（3）：545-556.

[30]Zhang A J，Jiang T，Li Q，et al.Experimental research on ADSCs-NCSS in wound repair[J].Exp Ther Med，2018，16（6）：4429-4436.

[31]Zonari A，Martins T M，Paula A C，et al.Polyhydroxybutyrate-co-hydroxyvalerate structures loaded with adipose stem cells? promote skin healing with reduced scarring[J].Acta Biomater，2015，17：170-181.

[32]Gao Y，Gao B，Zhu H，et al.Adipose-derived stem cells embedded in platelet-rich plasma scaffolds improve the texture of skin grafts in a rat full-thickness wound model[J].Burns，2020，46（2）：377-385.

[33]丁寅佳，崔磊，趙旭，等.富血小板纖維蛋白聯(lián)合脂肪干細(xì)胞對糖尿病小鼠皮膚創(chuàng)面愈合的影響研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（2）：8-13.

[34]Chen C F，Liao H T.Platelet-rich plasma enhances adipose-derived stem cell-mediated angiogenesis in? a mouse ischemic hindlimb model[J].World J Stem Cells，2018，10（12）：212-227.

[35]趙月強(qiáng)，朱占永，李愛林，等.自體脂肪干細(xì)胞在糖尿病足創(chuàng)面治療中的應(yīng)用[J].臨床外科雜志，2018，26（01）：63-66.

[36]Stessuk T，Ribeiro-Paes J T，Colpas P T，et al.A topical cell therapy approach for diabetic chronic ulcers： Effects of mesenchymal stromal cells associated with platelet-rich plasma[J].J Cosmet Dermatol，2020，19（10）：2669-2678.

[37]Bura A，Planat-Benard V，Bourin P，et al.Phase I trial： the use of autologous cultured adipose-derived stroma/stem cells to treat patients with non-revascularizable critical limb ischemia[J].Cytotherapy，2014，16（2）：245-257.

[38]李嘉欣，陳偉華.脂肪來源干細(xì)胞在改善老化皮膚質(zhì)地中的作用及其臨床應(yīng)用[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2020，29（5）：187-189.

[收稿日期]2020-12-30

本文引用格式：李展鵬，周志紅，黃海燕，等.脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在慢性創(chuàng)面治療中的研究進(jìn)展[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2022，31（3）：176-180.