一種反式脂肪酸的檢測(cè)方法

一種反式脂肪酸的檢測(cè)方法

反式脂肪酸是一種具有反式結(jié)構(gòu)的不飽和脂肪酸，食品中的反式脂肪酸會(huì)加速動(dòng)脈硬化，導(dǎo)致心血管病。反式脂肪酸危害性大，已經(jīng)引起各國(guó)的注意。丹麥政府是世界上第一個(gè)對(duì)食品中反式脂肪酸含量進(jìn)行限制的國(guó)家。2003年7月9日，美國(guó)食品藥品管理局正式公布規(guī)章：自2006年1月1日起，食品營(yíng)養(yǎng)標(biāo)簽中必須標(biāo)注產(chǎn)品的飽和脂肪酸含量及反式脂肪酸的含量，建議每日反式脂肪酸攝取量在每日總攝取能量的1%以下。

目前國(guó)內(nèi)外檢測(cè)反式脂肪酸的方法主要有紅外光譜法、毛細(xì)管電泳法、銀離子高效色譜法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。其中氣相色譜法最常用，例如應(yīng)用在GB/T 22110-2008食品中反式脂肪酸的測(cè)定。與固體提取出來的脂肪不一樣，液態(tài)的植物油含有大量的順式飽和脂肪酸，嚴(yán)重干擾反式脂肪酸的測(cè)定。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道排除順式和反式飽和脂肪酸干擾的主要方法是銀離子固相萃取法，利用Ag+與順式脂肪酸雙鍵間存在微弱的作用力，從而預(yù)分離順式脂肪酸，但此操作增加了實(shí)驗(yàn)的復(fù)雜度。因此,建立氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定反式脂肪酸的新檢測(cè)方法具有重要意義。

材料、試劑、儀器與方法

材料、試劑、儀器：檢測(cè)的樣品為液態(tài)植物油（食用油等）。異辛烷；甲醇；氫氧化鉀；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反 -9- 十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）≥99%。氣相質(zhì)譜儀；電子天平；旋渦混合器。

方法：氣相質(zhì)譜條件。色譜柱：Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)；程序升溫條件：初始溫度60℃，停留5min，以5℃/min升溫至165℃，停留1min，再以2℃/min升溫至225℃，保留17min；總運(yùn)行時(shí)間：74min；載氣：高純氮?dú)猓髁?.2mL/min；進(jìn)樣口溫度：240℃；進(jìn)樣量：1μL；進(jìn)樣方式：不分離進(jìn)樣。質(zhì)譜條件。離子源：電子轟擊源，70Ev；掃描方式：全掃描，50-1000u；離子源溫度：280℃；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）的定量離子、定性離子為：十三烷酸甲酯，228，143，87，74；反-9-十八碳烯酸甲酯，296，264，222，97；反-9,12-十八碳二烯酸甲酯，294，263，95，67；順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯，292，261，108，79。

樣品處理

樣品處理：準(zhǔn)確稱取約60mg植物油于10ml離心管中，加入0.5ml 100mg/L內(nèi)標(biāo)物質(zhì)十三烷酸甲酯溶液，0.2ml 2mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，用異辛烷定容到5ml。在旋渦混合器上劇烈震蕩2-3min，加入1g一水合硫酸氫鈉。在旋渦混合器上劇烈震蕩0.5min后取上清液待氣相色譜—質(zhì)譜儀測(cè)定。

標(biāo)準(zhǔn)曲線配制：稱取適量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)十三烷酸甲酯（C13：0）、反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）、反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）、順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c），用異辛烷配備成各種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)濃度均為10mg/ L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

結(jié)果與討論

色譜分離：順式，反式脂肪酸在物理和化學(xué)性質(zhì)上很相似，選用常用的柱子，例如HP-5MS(30m x 0.25mm x 0.25μm)等無法將其分離。需用特殊的柱子Aglient HP-88柱(100m x 0.25mm x 0.20μm)才能過獲得滿意的分離效果。典型的樣品色譜圖見圖1。

圖1 脂肪酸甲酯的總離子流色譜圖

不同脂肪酸質(zhì)譜圖特征：反-9-十八碳烯酸甲酯（C18：1-9t）的分子量為296，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）分子量為294，順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）分子量為292，為其特征離子峰。反式十八碳二烯酸甲酯包含反-9,12-十八碳二烯酸甲酯（C18：2-9t,12t）等多種同分異構(gòu)體,其分子量均為294，共同的碎片離子為m/z 263, m/z67。反式十八碳三烯酸甲酯包含多種同分異構(gòu)體，其分子量與順-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（C18：3-9c,12c,15c）相同，均為292，共同的碎片離子為m/z 261。

在氣相質(zhì)譜儀中按照上述離子進(jìn)行離子搜索，在樣品中并沒有發(fā)現(xiàn)反式脂肪酸的存在。

定量分析：用面積歸一化法測(cè)定出各反式脂肪酸的相對(duì)含量。

□ 潘金銅 浙江海洋大學(xué)

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