高效液相色譜檢測(cè)醬油中乙?；前匪徕?/h1>

2017-12-07 00:56:09劉超陳艷鄒沫君徐陽(yáng)唐琨

中國(guó)果菜訂閱 2017年11期 收藏

關(guān)鍵詞：酸鉀離心管磺胺

劉超，陳艷，鄒沫君，徐陽(yáng)，唐琨

（四川省樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川樂(lè)山 614000）

高效液相色譜檢測(cè)醬油中乙?；前匪徕?/p>

劉超，陳艷，鄒沫君，徐陽(yáng)，唐琨

（四川省樂(lè)山市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川樂(lè)山 614000）

本文改進(jìn)了醬油中乙?；前匪徕浀臋z測(cè)方法。建立了以ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6×100mm，3.5mm）為液相色譜柱；以乙腈、10mmol/L乙酸銨（pH=4.0）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm；流速為1.0mL/min的檢測(cè)方法。討論了濾出液和洗脫液體積的選擇。結(jié)果表明，乙?；前匪徕浽?～0.5μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性，檢出限為1.43μg/mL，加標(biāo)回收率為92.1%～97.5%。與國(guó)標(biāo)方法相比，該方法提高了方法檢出限、準(zhǔn)確度及精密度。

醬油；乙酰磺胺酸鉀；高效液相色譜

乙?；前匪徕浕瘜W(xué)名稱為6-甲基-1,2,3-氧惡嗪-4-(3H)-酮-2,2-二氧鉀鹽；6-甲基-2,2-二氧代-1,2,3-氧硫氮雜；6-甲基-1,2,3-氧惡嗪-4-(3H)-酮-2,2-二氧鉀鹽，又稱為安賽蜜、A-K糖，甜度為蔗糖的200倍。乙酰磺胺酸鉀對(duì)光、熱（能耐225℃高溫），pH值適用范圍較廣，是目前穩(wěn)定性最好的甜味劑之一[1，2]，其生產(chǎn)工藝不復(fù)雜、價(jià)格便宜、性能優(yōu)于阿斯巴甜，被認(rèn)為是最有前途的甜味劑之一。我國(guó)規(guī)定安賽蜜可用于飲料、冰淇淋、糕點(diǎn)、蜜餞、焙烤食品等的生產(chǎn)和制備[3]。

目前我國(guó)發(fā)布的關(guān)于乙?；前匪徕浀臋z測(cè)方法僅有GB/T 5009.140-2003《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》[4]，此檢測(cè)方法是乙?；前匪徕洔y(cè)定的基本方法，但是該方法中使用中性氧化鋁層析柱，會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度、精密度和檢測(cè)效率。因此本文采取市售的中性氧化鋁柱代替中性氧化鋁層析柱，優(yōu)化了前處理過(guò)程，取得了良好的效果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

水：GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水；

乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)品 （0.25g、99.0%，Lot：40409 04/2018Dr.Ehrenstorfer GmbH，06/2018）；中性氧化鋁柱（1000mg/3mL）；

無(wú)水硫酸鎂：研磨后在500℃馬弗爐內(nèi)烘5h，200℃時(shí)取出裝瓶，貯于干燥器中，冷卻后備用；

鍵合硅固相萃取吸附劑PSA：粒度40～70μm；鍵合硅固相萃取吸附劑C18：粒度46μm。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀，島津公司DGU-20A，配有紫外檢測(cè)器；

分析天平（精確度0.01mg），CP225D，德國(guó)賽多利斯集團(tuán)；

固相萃取儀，ASE-12；

高速離心機(jī)，TD420，四川蜀科儀器有限公司；微孔濾膜，水相，0.22μm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

1.3.1 乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

稱取0.01g乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)品，加水溶解并定容至10mL，此溶液濃度為1mg/mL。

1.3.2 乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)中間液

準(zhǔn)確移取25μL乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用水稀釋并定容至25mL，此溶液濃度為1μg/mL。

1.3.3 乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)工作溶液

根據(jù)需要將乙酰磺胺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)中間液，用試樣空白溶液稀釋成濃度為 0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.4 試樣的提取

吸取2.5mL醬油試樣置于10mL離心管中，加水定容至刻度，取5mL試樣溶液至10mL離心管中，稱取150mg PSA、300mg無(wú)水硫酸鎂、300mg C18粉末至此離心管中，渦旋混勻1min，混勻后于4000r/min離心10min，上清液全部轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱中，收集全部濾出液，用10mL流動(dòng)相（1+1）洗脫，收集全部洗脫液，合并濾出液和洗脫液，用水定容至25mL容量瓶中，過(guò)0.22μm濾膜，供液相色譜儀測(cè)定使用。

1.4 色譜條件

1.4.1 液相色譜條件

色譜柱為ZORBAX Eclipse PlusC18（4.6mm×100mm，3.5mm）；進(jìn)樣體積 10μL；流速 1.0mL/min；柱溫 40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)280nm；流動(dòng)相A為10mmol/L乙酸銨（pH=4），流動(dòng)相B為乙腈。梯度洗脫條件見表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

1.4.2 色譜分析

由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取凈化后的樣品溶液10μL，注入色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果討論

2.1 濾出液體積的選擇

試驗(yàn)中采用接收濾出液體積分別為全部接收、接收5mL、接收0mL來(lái)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見圖1。由圖可知，當(dāng)全部接收濾出液時(shí)，回收率最高，為96.8%；當(dāng)接收濾出液為5mL時(shí)，回收率為64%；當(dāng)接收體積為0mL時(shí)，回收率為37.6%?？赡艿脑蚴窃嚇又械囊阴；前匪徕浗?jīng)過(guò)中性氧化鋁柱，除少部分殘留在小柱上，其余全部流出，而干擾物則全部留在中性氧化鋁柱上。因此，本試驗(yàn)采用全部接收濾出液體積。

圖1 不同濾出液體積對(duì)應(yīng)的回收率

2.2 流動(dòng)相的選擇

不同實(shí)驗(yàn)室配備的設(shè)備型號(hào)不同，因此只有摸索出適合本實(shí)驗(yàn)室最佳色譜條件才能保證最佳的分析效果。同時(shí)比較了GB/T 5009.140-2003[4]中流動(dòng)相A：10mmol/L乙酸銨（pH=4）和B：乙腈作為流動(dòng)相，從峰型、靈敏度、配置流動(dòng)相的方便性和經(jīng)濟(jì)性、節(jié)約試劑等方面考慮，最終選擇A：10mmol/L乙酸銨（pH=4）、B：乙腈作為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，這與20mmol/L乙酸銨溶液-甲醇（體積比95∶5）文獻(xiàn)報(bào)告相吻合[5]。

2.3 洗脫液體積的選擇

吸取2.5mL醬油試樣置于10mL離心管中，加水定容至刻度，混勻后于4000r/min離心10min，上清液全部轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱中，收集全部濾出液，試驗(yàn)中采用洗脫液體積分別為 0mL、3mL、5mL、10mL、15mL 流動(dòng)相洗脫，做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見圖2。由圖可知，洗脫液體積為0mL時(shí)，回收率為82.5%；3mL時(shí)，回收率為88.4%；5mL時(shí)，回收率為93.3%；10mL時(shí)，回收率為98.9%；15mL時(shí)，回收率為98.3%。由此可見，當(dāng)洗脫體積10mL時(shí)，已經(jīng)完全將乙?；前匪徕浵疵撓聛?lái)。從節(jié)約的角度出發(fā)，流動(dòng)相的洗脫體積選擇10mL。

圖2 不同洗脫液體積對(duì)應(yīng)的回收率

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性范圍的確認(rèn)

以峰面積為縱坐標(biāo)，以對(duì)照品溶液濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程如表2所示。

表2 乙?；前匪徕洏?biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程

由本試驗(yàn)線性相關(guān)系數(shù)（0.9994）＞0.999可知，試驗(yàn)在0～0.5μg/mL濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.4.2 方法檢出限的確認(rèn)

由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取0.3μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液10μL，注入色譜儀中，平行進(jìn)樣3次，計(jì)算信噪比的平均值。

進(jìn)樣量為 3ng，信噪比分別為（1）32.8；（2）31.2；（3）30.8

儀器檢出限：

由本試驗(yàn)的方法檢出限可知，相比較GB/T 5009.140-2003《飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定》[4]，本方法提高了靈敏度。

2.4.3 加標(biāo)回收率

將乙?；前匪徕泝?chǔ)備液稀釋至10μg/mL，準(zhǔn)確吸取9份混勻的試樣各2.5mL醬油試樣置于10mL離心管中，分別準(zhǔn)確移取0.05mL、0.3mL、0.6mL上述乙酰磺胺酸鉀溶液各3份至9份試樣中，加水定容至刻度，混勻后，取5mL試樣溶液至10mL離心管中，稱取150mg PSA、300mg無(wú)水硫酸鎂、300mgC18粉末至此離心管中，渦旋混勻1min，混勻后于4000r/min離心10min，上清液全部轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱中，收集全部濾出液，用10mL流動(dòng)相（體積比1∶1）洗脫，收集全部洗脫液，合并濾出液和洗脫液，用水定容至25mL容量瓶中，過(guò)0.22μm濾膜，供液相色譜儀測(cè)定。

式中：C1-測(cè)得的加標(biāo)樣品中乙?；前匪徕浀臐舛?，ng/mL；

C2-測(cè)得的空白基質(zhì)樣品中乙?；前匪徕浀臐舛?，ng/mL；

M-稀釋向的加標(biāo)質(zhì)量，ng。

由表3可知，該方法回收率為92.1%～97.5%。由回收率可知，本試驗(yàn)在加標(biāo)質(zhì)量在0.5～6.0μg范圍內(nèi)，回收率良好。

2.4.4 精密度

乙?；前匪徕浿虚g液稀釋成0.1μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，由自動(dòng)進(jìn)樣器吸取凈化后的樣品溶液10μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖，測(cè)定峰面積，計(jì)算出RSD值，結(jié)果如表4所示。由表4可知，該方法精密度RSD為0.57%，這表明精密度良好。

表3 乙?；前匪徕浖訕?biāo)回收率

表4 乙?；前匪徕浘芏?/p>

[1]盧麗明,黃誠(chéng),周日東.飲料中乙酰磺胺酸鉀的高效液相色譜測(cè)定法[J].職業(yè)與健康,2008,24(15)∶1520-1521.

[2]關(guān)瑾.甜味劑的應(yīng)用現(xiàn)狀及發(fā)展前景 [J].當(dāng)代化工,2002,31(2)∶89-91.

[3]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB2760-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)[S].北京∶中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,2014.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.GB/T5009.140-2003飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定[S].北京∶中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,2003.

[5]郭友珍,王志宏.同時(shí)測(cè)定碳酸飲料中苯甲酸鈉、山梨酸鉀和安賽蜜的高效液相色譜法[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2001,20(4)∶67-68.

The Determination of Acesulfame Potassium in Soy Sauce Using HPLC

LIU Chao,CHEN Yan,ZOU Mo-jun,XU Yang,TANG Kun
(Leshan Institute for Food and Grug Control,of sichuan province,Leshan 614000,China)

The determination of Acesulfame potassium in soy sauce was improved.The method in this paper was developed based on paper HPLC column ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6×100mm,3.5mm)with acetonitrile and 10mmol/L ammonium acetate (pH=4.0)as mobile phase,with flow rate at 1.0mL/min and UV detection wavelength at 280nm.A good linear was between 0～0.5μg/mL.The detection limit was 1.43μg/mL.Adding standard recoveries were between 92.1%～97.5%.The recovery and detection limit were improved.

Soy sauce;acesulfame potassium;HPLC

O657.7+2

A

1008-1038(2017)11-0030-04

10.19590/j.cnki.1008-1038.2017.11.008

2017-07-03

劉超（1984—），男，工程師，研究方向?yàn)槭称钒踩?/p>

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