五種常用消毒劑對金黃色葡萄球菌的殺滅效果評價

董 霞, 李培群, 羅 東, 劉 濤, 萬臘根, 陳開森

(1 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006； 2 南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江西 南昌 330006)

·論著·

五種常用消毒劑對金黃色葡萄球菌的殺滅效果評價

董 霞1, 2, 李培群2, 羅 東1, 劉 濤1, 萬臘根1, 陳開森1

(1 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006； 2 南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江西 南昌 330006)

目的研究醫(yī)院常用消毒劑乙醇、三氯片、碘伏、戊二醛、愛護佳免洗手消毒劑對醫(yī)院不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅效果，為有效控制醫(yī)院感染提供科學(xué)依據(jù)。方法收集南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床送檢標(biāo)本和醫(yī)護人員手及醫(yī)院內(nèi)周邊環(huán)境物體表面采集的標(biāo)本分離的金黃色葡萄球菌共48株。通過消毒劑與細(xì)菌直接接觸作用，研究消毒劑在不同稀釋濃度、不同作用時間、體外殺滅不同來源的金色葡萄球菌的效果。結(jié)果常規(guī)使用消毒劑如5 g/L碘伏、20 g/L戊二醛和愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)常溫下作用5 min對不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅率為100%；70%乙醇和1 g/L三氯片常溫下作用5 min對不同來源金黃色葡萄球菌的殺滅率為96.5%～99.8%；但碘伏、戊二醛和免洗手消毒劑被高度稀釋后即使提高作用時間但仍不能完全殺滅金黃色葡萄球菌。結(jié)論該院常規(guī)使用消毒劑能滿足臨床殺菌效果，但需要不斷地監(jiān)測消毒劑的有效濃度，防止殺菌能力降低。

金黃色葡萄球菌; 消毒劑; 殺菌作用

金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，SAU) 是臨床上重要的病原菌，?？蓪?dǎo)致創(chuàng)面?zhèn)?、皮膚軟組織及血流感染[1-2]。該菌適應(yīng)能力強，?？纱嬖谟谌梭w體表及各類環(huán)境中，例如醫(yī)院內(nèi)的水、空氣及物體表面等。由于消毒劑在手部、醫(yī)療器械、物體表面及空氣清潔中的頻繁使用，環(huán)境分離菌可對多種消毒劑產(chǎn)生抗性，表現(xiàn)為現(xiàn)有的消毒劑及消毒方法可能不能完全殺滅該類菌[3-4]，而SAU由于強的抵抗力及環(huán)境適應(yīng)性，常和芽孢用于評價消毒劑的殺滅效果[5]。消毒劑的使用已有相當(dāng)長的歷史，正如細(xì)菌對抗菌藥物的耐藥性一樣，長時間接觸同一種(類)消毒劑的細(xì)菌會對該類消毒劑產(chǎn)生抵抗力，即產(chǎn)生抗性。隨著人類社會的發(fā)展以及人們健康意識的不斷增強，消毒用品的使用越來越廣泛，細(xì)菌對消毒劑的抗性問題也就越加嚴(yán)重，這已引起人們的廣泛關(guān)注與重視[6]。南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院根據(jù)不同的需要，常使用5種消毒劑，包括乙醇、碘伏、戊二醛、三氯片及愛護佳免洗手消毒劑。這些消毒劑能否很好地對醫(yī)院環(huán)境內(nèi)分離的SAU具有殺滅作用，目前并未見評價。為了觀測常用消毒劑對醫(yī)院環(huán)境內(nèi)分離的SAU，本研究通過收集環(huán)境及臨床分離的SAU，隨后進行體外懸液定量殺菌試驗，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌株 均來源于南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院，包括住院患者分離的SAU 20株，環(huán)境分離的SAU 28株。質(zhì)控菌株金黃色葡萄球菌ATCC 25923來源于中國菌種保藏中心。

1.1.2 試驗用消毒劑 乙醇(主要為70%乙醇)、碘伏(主要成分為聚乙烯吡咯烷酮，碘濃度5.0 g/L)、三氯片(主要成分為三氯異氰尿酸，有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒劑及愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70.0%乙醇)。

1.2 試驗方法

1.2.1 SAU的鑒定 將臨床或環(huán)境常規(guī)分離菌進行涂片，革蘭染色為陽性球菌，呈葡萄狀排列，觸酶陽性。采用法國生物梅里埃公司VITEK 2 Compact 全自動細(xì)菌分析儀及對應(yīng)鑒定卡對菌種鑒定。

1.2.2 菌懸液的制備 取分離的SAU接種到LB肉湯中，35℃震蕩培養(yǎng)至對數(shù)生長期，制備濃度為1×106CFU/mL的菌懸液[7]。

1.2.3 中和劑鑒定試驗 用金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC 25923為試驗菌，設(shè)計6組試驗，按懸液定量殺菌試驗程序進行中和劑鑒定試驗。試驗結(jié)果以第1組無菌生長或僅有極少數(shù)生長；第2組遠(yuǎn)較第1組為多，但較第3、4、5組生長菌數(shù)少，其組間差不超過兩組回收菌數(shù)平均值的10%；第6組無菌生長，表明所用中和劑及其濃度適宜。

1.2.4 懸液定量殺菌試驗 將試驗菌懸液(100 μL/孔)和每種不同濃度(2倍稀釋、5倍稀釋、10倍稀釋)消毒劑(100 μL/孔)置于96孔微孔板中，于35℃作用不同時間(1、5、10 min)。取出混合液(20 μL/孔)隨后加入對應(yīng)中和劑(180 μL/孔)，作用10 min后，取0.2 mL傾注90 mm平板上，L棒劃開進行活菌計數(shù)培養(yǎng)48 h后觀察結(jié)果，陽性對照為加菌懸液的生理鹽水組，重復(fù)3次取平均值，計算殺菌率[7]。

1.3 統(tǒng)計分析 不同消毒劑對不同來源SAU的殺滅率采用χ2檢驗，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 中和劑鑒定試驗結(jié)果 經(jīng)中和劑鑒定試驗確定，乙醇的中和劑為10 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，碘伏的中和劑為10 g/L 硫代硫酸鈉+10 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，戊二醛的中和劑為10 g/L甘氨酸+ 5.0 g /L吐溫80的磷酸鹽緩沖液，三氯片的中和劑為5.0 g/L硫代硫酸鈉+5.0 g/L吐溫80的營養(yǎng)肉湯，愛護佳免洗手消毒劑的中和劑為20 g/L卵磷脂+20 g/L吐溫80的磷酸鹽緩沖液[8]。

2.2 殺菌試驗結(jié)果

2.2.1 5種消毒劑不同作用時間對SAU的殺滅效果 以70%乙醇、碘伏(5.0 g/L)、三氯片(有效氯1 g/L)、20 g/L戊二醛消毒劑及愛護佳免洗手消毒劑(0.5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)作用1 min，對金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)株殺滅率均為100%。在上述相同濃度和作用時間條件下，各消毒劑對28株環(huán)境分離的SAU和20株臨床分離的SAU的殺滅率均達(dá)到90%以上。常規(guī)劑量作用1 min以上，該院常用的3種消毒劑(碘伏、戊二醛和愛護佳免洗手消毒劑)可完全殺滅不同來源的48株SAU，但70%乙醇及三氯片不能完全殺滅該菌，其中作用5 min時SAU的殺滅率達(dá)到90%以上。70%～75%乙醇對除芽孢外的革蘭陽性菌與陰性菌殺菌效果最好，所以臨床及實驗室長期將其作為皮膚等消毒劑的首選，但有結(jié)果表明SAU對70%乙醇具有抗藥性[9]，這與本次研究結(jié)果相符。即使乙醇及三氯片作用5 min，仍有部分SAU未被殺滅；從標(biāo)本的不同來源看，環(huán)境分離的28株SAU抗乙醇及三氯片殺滅能力較強，而臨床分離的20株SAU低于前者。見表1。

表15種消毒劑不同作用時間對SAU的殺滅效果

Table1Killing efficacy of 5 kinds of disinfectant onS.aureusat different contact time

消毒劑作用時間(min)標(biāo)準(zhǔn)菌殺滅率(%)環(huán)境分離菌殺滅率(%)臨床分離菌殺滅率(%)70%乙醇1100．092．094．35100．096．698．610100．0100．0100．0三氯片(1g/L)1100．093．494．75100．096．599．810100．0100．0100．0碘伏(5g/L)1100．098．099．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0戊二醛(20g/L)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0愛護佳免洗手消毒劑(0．5%葡萄糖酸氯己定+70%乙醇)1100．0100．0100．05100．0100．0100．010100．0100．0100．0

2.2.2 3種常用消毒劑稀釋后對SAU的殺滅效果 當(dāng)常用的碘伏、戊二醛及愛護佳免洗手消毒劑被不同程度稀釋后，其殺菌能力逐漸下降，在對不同來源的SAU殺滅中表現(xiàn)為愛護佳免洗手消毒劑殺滅SAU能力強于戊二醛，而戊二醛殺滅SAU能力強于碘伏。見表2。

3 討論

SAU為醫(yī)院最為常見的病原菌之一，長期處于革蘭陽性菌感染的首位[10-11]。SAU感染的來源包括患者局部定植菌的移位及SAU的傳播。細(xì)菌在病區(qū)間的傳播包括通過醫(yī)務(wù)人員手、醫(yī)療器械、空氣、物體表面等媒介。阻斷細(xì)菌間傳播除了正確的醫(yī)療操作外，各種易存儲細(xì)菌的環(huán)境的消毒也非常必要，臨床上根據(jù)需要常選擇消毒能力不同的各類消毒劑進行處理。本研究發(fā)現(xiàn)環(huán)境分離SAU對低效消毒劑的抗性略大于臨床菌株，可能的原因是醫(yī)院環(huán)境中常存在這些低濃度的消毒劑，無形中促使環(huán)境SAU對消毒劑的抗性增大[12]；細(xì)菌對抗生素耐藥可能與消毒劑耐藥有關(guān)，因為細(xì)菌基因的改變可獲得抗性，因而可能使細(xì)菌獲得耐消毒劑基因從而抗性增加[13]，研究證明，SAU含有多種抗生素和消毒劑抗藥性質(zhì)粒，并發(fā)現(xiàn)他們之間存在一定聯(lián)系[14-15]；選擇壓力在細(xì)菌對消毒劑抗性中的作用不容忽視，因為只要有消毒劑的存在，細(xì)菌就會受到選擇壓力的作用，此作用可產(chǎn)生抗性突變株。但整體而言，常規(guī)劑量在有效的作用時間內(nèi)足夠殺滅環(huán)境來源SAU及臨床分離SAU，提示目前該院常規(guī)使用濃度的消毒劑對醫(yī)院感染的SAU能夠有效殺滅。然而，由于消毒劑產(chǎn)品的質(zhì)量不過關(guān)或認(rèn)為常規(guī)使用的消毒劑濃度降低時則殺菌能力降低，殺菌能力受到影響，故有必要固定時間內(nèi)對常規(guī)使用的消毒劑或新購消毒劑進行隨機抽查，嚴(yán)格把控使用消毒劑產(chǎn)品的質(zhì)量，為有效地發(fā)揮消毒劑在控制病原體醫(yī)院感染中的作用。目前認(rèn)為，消毒劑的濫用、處理方法不當(dāng)及用量不足是消毒劑抗性產(chǎn)生的主要原因。因此，在應(yīng)用消毒劑時，提倡科學(xué)、合理和有效使用是避免消毒劑抗性菌株形成的最重要途徑。此外，細(xì)菌在長時間脫離接觸某消毒劑后，對該藥的抗性可能不會立刻消失，故對低效消毒劑最好幾種交替使用[16]。

表2 3種常用消毒劑稀釋后對SAU的殺滅效果

綜上所述，可通過進一步加強醫(yī)院環(huán)境內(nèi)的消毒從而控制醫(yī)院感染減少其發(fā)生率，因而消毒劑的合理使用以及管理對控制醫(yī)院感染顯得尤為重要。

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BactericidalefficacyoffivekindsofdisinfectantonStaphylococcusaureus

DONGXia1,2,LIPei-qun2,LUODong1,LIUTao1,WANLa-gen1,CHENKai-sen1

(1TheFirstAffiliatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006; 2SchoolofPublicHealth，NanchangUniversity,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo study the bactericidal efficacy of hospital commonly used disinfectants such as ethanol, 3" chlorine tablets, iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic onStaphylococcusaureus(S.aureus) from different sources of hospital, and provide scientific basis for effective control of healthcare-associated infection(HAI).MethodsA total of 48 strains ofS.aureusfrom inpatients, hands of health care workers, and environment surface in the First Affiliated Hospital of Nanchang University were collected. Disinfectant was directly contacted with bacteria, in vitro killing efficacy of disinfectant onS.aureusfrom different sources at different diluted concentrations, and different contact time were studied.ResultsThe killing rate of 5g/L iodophor, 20g/L glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic(0.5% chlorhexidine+70% ethanol) toS.aureuswith a 5-minute contact time was 100%; killing rates of 70% ethanol and 1g/L 3" chlorine tablets toS.aureuswith a 5-minute contact time were 96.5%-99.8%；but highly diluted iodophor, glutaraldehyde, and avagard instant hand antiseptic still could not completely killS.aureuseven the contact time was extended.ConclusionThe routine use of disinfectants in the hospital can meet the clinical bactericidal efficacy, it is necessary to monitor concentration routinely, avoid decreasing sterilization ability.

Staphylococcusaureus; disinfectant; bactericidal efficacy

[Chin J Infect Control，2017，16(12)：1116-1119]

2017-04-08

國家自然科學(xué)基金資助項目(81660555)；南昌大學(xué)大學(xué)生科技創(chuàng)新基金(2016213)

董霞(1993-)，女(漢族)，甘肅省白銀市人，醫(yī)學(xué)生，主要從事公共衛(wèi)生管理研究。

陳開森 E-mail:chenks100@126.com

10.3969/j.issn.1671-9638.2017.12.003

R187+.2

A

1671-9638(2017)12-1116-04

陳玉華)