不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯對哮喘大鼠肝腎功能的影響

柴茂山,李 鵬,趙 曄,郭智江,鄧 亮

（1.山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西大同037009;2.山西省沁水縣人民醫(yī)院，山西晉城048200）

不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯對哮喘大鼠肝腎功能的影響

柴茂山1,李 鵬2,趙 曄1,郭智江1,鄧 亮1

（1.山西大同大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山西大同037009;2.山西省沁水縣人民醫(yī)院，山西晉城048200）

目的成功制備哮喘大鼠模型，用不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯予以治療，探討其對哮喘大鼠肝腎功能的影響，從而揭示不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯細(xì)辛和整體方劑的安全性，為臨床安全使用細(xì)辛和小青龍湯提供一定的科學(xué)根據(jù)。方法84只健康雄性SD大鼠常規(guī)飼養(yǎng)1周后，將其隨機(jī)分為哮喘模型組、正常對照組、0 g、3 g、9 g、15 g、21 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組，每組12只，造模和治療同步進(jìn)行。治療結(jié)束前一天禁食，麻醉后行腹主動脈采血，用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清ALT、AST、BUN、SCR的濃度。結(jié)果各個(gè)不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯治療組大鼠肝腎功能（ALT、AST、BUN、SCR））與正常組和模型組大鼠比較，均無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論細(xì)辛用量從0 g到21 g，其它藥物藥量不變，對哮喘大鼠的肝腎功能（ALT、AST、BUN、SCR）無明顯影響。

細(xì)辛；小青龍湯；哮喘；肝腎功能

小青龍湯出自張仲景的《傷寒雜病論》，是治療外寒內(nèi)飲咳喘的經(jīng)典名方，由麻黃、桂枝、干姜、芍藥、五味子、半夏、細(xì)辛、炙甘草組成。其治療冷哮的療效與細(xì)辛的用量有一定關(guān)系，本人在30多年的臨床上發(fā)現(xiàn)細(xì)辛用9g時(shí)對冷哮的療效較3g有明顯提高。許多醫(yī)家在臨床上也有類似的臨床經(jīng)驗(yàn)，如周德生等[1]醫(yī)家建議在治療外感傷寒時(shí)，細(xì)辛用3～5 g；當(dāng)治療風(fēng)寒束肺咳喘時(shí)候，細(xì)辛應(yīng)與干姜、五味子同用，構(gòu)成溫肺化飲的常用組合，用量應(yīng)達(dá)到8～10 g；當(dāng)治療脈絡(luò)痹阻之各種痛癥時(shí)，細(xì)辛用量應(yīng)達(dá)到15 g及其以上。但是細(xì)辛歷代有不過錢之說，這樣就限制了細(xì)辛治療效果的發(fā)揮，我國2015版藥典也明確規(guī)定細(xì)辛在煎劑中的用量為1～3 g，致使細(xì)辛在臨床上的使用受到了很大限制。基于以上觀點(diǎn)，制備哮喘大鼠動物模型，通過檢測哮喘大鼠肝腎功能，來探討不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯對哮喘大鼠肝腎功能的影響。從而揭示不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯中細(xì)辛和整體方劑的安全性，為臨床安全使用細(xì)辛和小青龍湯提供一定的科學(xué)根據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

1.1.1 藥品

小青龍湯中的藥物麻黃、芍藥、細(xì)辛、干姜、炙甘草、桂枝、半夏、五味子由同仁堂藥店提供。

1.1.2 主要試劑

卵白蛋白（OVA）干粉（美國Sigma公司，批號A5378），氫氧化鋁粉末（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，批號CNAB 035-Q），0.9%氯化鈉注射液（湖北天藥藥業(yè)股分有限公司，批號20140321），戊巴比妥鈉（美國sigma公司，批號P3761）。

1.2 主要儀器

大鼠霧化箱（60cm×50cm×50cm），超聲霧化器（江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司，402A型），BS 224S萬分之一天平（德國賽多利斯），HC-2062高速離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司），-80℃超低溫冰箱（日本SANYO公司，MD?FU-281型），全自動生化分析儀（日本東芝公司）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組

將SPF級健康雄性SD大鼠（7～8周齡，180±30 g）84只常規(guī)飼養(yǎng)1周，稱重后，隨機(jī)分為7組，分別為正常組、模型組、0 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組（復(fù)方0 g組）、3 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組（復(fù)方3 g組）、9 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組（復(fù)方9 g組）、15 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組（復(fù)方15 g組）、21 g細(xì)辛配伍的小青龍湯組（復(fù)方21 g組）。

2.2 藥物制備

按《傷寒雜病論》原書的劑量換算為現(xiàn)代劑量：麻黃9 g、芍藥9 g、細(xì)辛3 g、干姜9 g、炙甘草9 g、桂枝9 g、半夏9 g、五味子9 g，此劑量稱為復(fù)方3 g組；細(xì)辛藥量變?yōu)?、9、15、21 g,則分別為復(fù)方0、9、15、21 g組。

中藥給藥劑量按人與大鼠體表面積換算法的有關(guān)公式進(jìn)行換算。計(jì)算方法：成人每日服用量為X克，大鼠每日所需藥量為Xg×0.018／0.2 kg＝0.09Xg∕kg，0.018是依據(jù)《中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》中人與大鼠按體表面積換算藥量時(shí)的轉(zhuǎn)換系數(shù)，0.2 kg為大鼠的標(biāo)準(zhǔn)體重。除細(xì)辛外其它生藥量63 g，復(fù)方0、3、9、15 g，21 g組小青龍湯生藥量分別為 63、66、72、78、84 g，服用量分別為5.67、5.94、5.9、6.48、7.02、7.56 g∕kg。

將上述各組中藥用500 mL水浸泡30 min后，第1次煎煮30 min，過濾。再次向藥鍋中加入300 mL水，煎煮20 min，過濾，將2次過濾出的藥液合并，于60℃恒溫水浴分別濃縮為0.567、0.594、0.648、0.702、0.756 g∕mL的煎液，那么各劑量組大鼠每日服用的藥量為相應(yīng)濃度的煎液1 mL∕100 g，經(jīng)120℃高溫滅菌后冷藏備用。

2.3 哮喘大鼠動物模型的制備

參照文獻(xiàn)[2-3]的造模方法：模型組和復(fù)方治療組大鼠采用致敏和激發(fā)兩步法制備哮喘大鼠模型。具體方法為①致敏階段：分別于實(shí)驗(yàn)的第1天和第8天分2點(diǎn)向除正常組以外的各組大鼠腹腔內(nèi)注射抗原液1 mL（含卵蛋白OVA 100 mg和氫氧化鋁100 mg）使致敏，正常對照組用同樣方法注射1 mL生理鹽水來代替。②激發(fā)階段：在大鼠致敏15 d后，各個(gè)復(fù)方治療組大鼠用不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯灌胃治療，正常組和模型組用生理鹽水代替，灌胃1 h后將大鼠放入自己制作的未完全密閉的透明霧化箱（60 cm×50 cm×50 cm）內(nèi)，每次12只，隨后向超聲霧化器內(nèi)倒入1%卵蛋白生理鹽水150 mL，啟動霧化器讓模型組和復(fù)方治療組大鼠每日自行吸入20 min左右，每天在相同時(shí)間重復(fù)激發(fā)1次，連續(xù)進(jìn)行上述操作14 d，正常組僅吸入不含OVA的生理鹽水。

造模成功的標(biāo)志：在激發(fā)過程中大鼠出現(xiàn)咳嗽、節(jié)律性收腹樣喘促、點(diǎn)頭運(yùn)動、連續(xù)打噴嚏、搔鼻、煩躁、紫紺等癥狀說明大鼠模型制備成功。

2.4 給藥方法

各組從造模成功后（激發(fā)的第1天）開始給藥，連續(xù)給藥2周至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每日激發(fā)前1 h給藥，每日1次；給藥劑量和方式：復(fù)方治療組分別按相應(yīng)濃度的水煎液1mL∕100 g的標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行灌胃，正常組和模型組每次用1 mL∕100 g的生理鹽水灌胃。

2.5 待測樣本的制備和指標(biāo)檢測

2.5.1 待測樣本的制備

連續(xù)灌胃給藥2周，末次激發(fā)大鼠哮喘后，停水停食，第2日稱重后用提前配制的10%的水合氯醛（3 mL∕kg）腹腔注射麻醉大鼠，將大鼠仰臥固定于實(shí)驗(yàn)操作臺上，在腹部做一“V”字形切口，顯露腹主動脈，持采血針在腹主動脈下方分叉處進(jìn)針，待針尖刺入血管后，立即將采血針的另一端插入負(fù)壓的真空采血管中，用紅色的普通采血管采血5 mL，在室溫靜置2 h，3 500 r∕min，離心10 min后分離血清，吸取血清置于2 mL的離心管中，凍存于-80℃的冰箱待檢測。

2.5.2 指標(biāo)的檢測

用全自動生化分析儀檢測大鼠血清中ALT、AST、BUN、SCR的濃度。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析組間顯著性差異，以P＜0.05為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯對哮喘大鼠肝功能(ALT、AST）的影響

各組大鼠肝功能檢測結(jié)果顯示：各個(gè)不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯治療組大鼠肝功能（ALT、AST）與正常組和模型組大鼠比較，均無明顯顯著性差異（P＞0.05）,見表1，圖1、2。

表1 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠肝功能的影響

圖1 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠ALT濃度的影響

圖2 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠AST濃度的影響

3.2 不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯對哮喘大鼠腎功能(BUN、SCR）的影響

各組大鼠腎功能檢測結(jié)果顯示：各個(gè)不同劑量細(xì)辛配伍的小青龍湯治療組大鼠腎功能（BUN、SCR）與正常組和模型組大鼠比較，均無明顯顯著性差異（P＞0.05）。

結(jié)果見表2，圖3、4。

表2 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠腎功能的影響

圖3 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠BUN濃度的影響

圖4 不同劑量細(xì)辛的小青龍湯對哮喘大鼠SCR濃度的影響

4 討論

4.1 開展中藥肝腎毒性研究的重要性

隨著國家對藥品的毒副反應(yīng)越來越重視，關(guān)于中藥不良反應(yīng)的報(bào)道也日益增多，中藥安全性的問題已經(jīng)引起了廣大醫(yī)務(wù)工作者的廣泛關(guān)注。湯浩通過對6 903例藥物性肝損害文獻(xiàn)分析發(fā)現(xiàn)，中藥是引起藥源性肝損壞的首要因素，比例占到28.57%[4]。據(jù)研究，可以引起肝損害的中草藥有100多種，中成藥有30多種，比如中藥川楝子、山慈姑，以及中成藥六神丸、首烏片等均可引起藥物性肝中毒或肝損害[5]，中藥引起的腎損害也非常常見。藥物性腎損害疾病的發(fā)生一般都非常迅速，一旦損傷，腎臟的功能很難恢復(fù)，往往在較短的時(shí)間內(nèi)就會進(jìn)展到腎功能衰竭[6]。由于中藥引起腎功能損害主要是由于某些中藥內(nèi)含有較高毒性的馬兜鈴酸，所以有時(shí)我們也將中藥引起的腎病稱為馬兜鈴酸腎病。細(xì)辛與馬兜鈴、關(guān)木通一樣同屬于馬兜鈴科多年生草本植物，關(guān)木通由于其腎毒性已經(jīng)不再作為中藥繼續(xù)使用，細(xì)辛也因此受到牽連，在臨床上的使用受到了很大限制，細(xì)辛[7]化學(xué)成分主要含有萜類（揮發(fā)油的主要成分）、苯丙基及其苷類（如甲基丁香酚、黃樟醚等）、木脂素類（如細(xì)辛脂素）、生物堿及酰胺類（如馬兜鈴內(nèi)酰胺）、有機(jī)酸類及其酯類（如馬兜鈴酸）等。其中細(xì)辛揮發(fā)油中的甲基丁香酚、黃樟醚具有較強(qiáng)的毒副作用，其代謝產(chǎn)物具有抑制呼吸和致癌的作用，非揮發(fā)性成分中的馬究鈴酸具有較強(qiáng)的的腎毒性。

4.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的選擇及意義

4.2.1 肝功能測定的指標(biāo)

本實(shí)驗(yàn)主要研究藥物的肝損害，因此選擇了反映肝實(shí)質(zhì)損害的指標(biāo)ALT、AST。

ALT(丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶)主要分布于肝細(xì)胞漿中，而血清中ALT的含量很低，肝臟中ALT的濃度是血中的1 000～5 000倍。ALT是肝細(xì)胞受損非常敏感的指標(biāo)，并且與肝細(xì)胞受損的嚴(yán)重程度成正相關(guān)[5]，當(dāng)藥物性肝損害發(fā)生時(shí)，ALT可超過正常值的5～20倍，因此目前將ALT作為評價(jià)藥物性肝損害的指標(biāo)之一。

AST是天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的簡稱，主要分布于肝細(xì)胞線粒體中，肝細(xì)胞漿中僅占20%。當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生輕微的損害時(shí)，血中AST的濃度一般不會升高，只有當(dāng)肝細(xì)胞嚴(yán)重病變使肝細(xì)胞線粒體遭到嚴(yán)重破壞時(shí)，AST才從肝細(xì)胞的線粒體和細(xì)胞漿中釋放到血液，使血清AST濃度升高，其敏感性不如ALT高。

4.2.2 腎功能測定的指標(biāo)

BUN和SCR是反映腎小球功能好壞的重要指標(biāo)，是評價(jià)藥物性腎損害的檢查指標(biāo)之一。正常情況下，BUN和SCR主要均從腎小球?yàn)V過后隨尿排出，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受損使腎小球的排泄功能受到障礙時(shí)，血BUN和SCR就會增加。

BUN是指血清尿素氮，是蛋白質(zhì)分解代謝的終產(chǎn)物，其90%以上是通過腎臟排泄，僅有一小部分通過腸道和皮膚排出，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受損使腎小球的濾過功能受到障礙時(shí)，BUN就會升高，是評價(jià)腎功能的重要指標(biāo)之一。BUN增高主要見于各種腎實(shí)質(zhì)性病變，如腎小球腎炎、急慢性腎功能衰竭、腎內(nèi)占位性病變和腎外因素引起的各種病變。腎功能輕度受損時(shí)，BUN可在正常范圍，只有當(dāng)腎單位受損大于50%時(shí)，BUN濃度才開始增加[6]。所以BUN不能作為腎功能早期損害的特異性指標(biāo)，其對腎臟病早期損害的敏感性不高。

SCR是血清肌酐的英文簡稱，是肌酸的代謝產(chǎn)物。當(dāng)每天攝入的蛋白量和運(yùn)動相對穩(wěn)定時(shí)，肌酐的生成量就比較恒定。由于SCR在腎小球?yàn)V過后，腎小管基本不重吸收，所以測定SCR濃度即可以反映腎小球的濾過能力，其敏感性優(yōu)于BUN，是臨床上評價(jià)腎功能損壞的重要指標(biāo)。

5 結(jié)論

在本實(shí)驗(yàn)中復(fù)方治療組大鼠ALT、AST、BUN、SCR與正常組和模型組大鼠比較，均無明顯顯著性差異（P＞0.05），提示復(fù)方配伍中的細(xì)辛經(jīng)過煎煮后，對肝腎功能沒有影響，同時(shí)也提示小青龍湯整體煎劑對肝腎功能沒有影響。

這樣從一個(gè)側(cè)面證實(shí)了小青龍湯中細(xì)辛和整體方劑的安全性，為臨床安全使用細(xì)辛和青龍湯提供了一定的科學(xué)根據(jù)。細(xì)辛在復(fù)方煎劑中可以突破不過錢這一傳統(tǒng)說法，以在臨床上發(fā)揮其應(yīng)有的治療效果。

[1]周德生,黃仁忠.常用中藥特殊配伍精要[M].太原:山西科學(xué)技術(shù)出版社.2007.

[2]呂國平,崔德健,郭英江,等.介紹一種建立大鼠哮喘模型的實(shí)驗(yàn)方法[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,1995,18（6）:377-378.

[3]崔龍平,楊永清,陳漢平,等.過敏性哮喘大鼠模型的制備[J].上海實(shí)驗(yàn)動物科學(xué),2000,20（22）:69.

[4]湯浩,楊晶露,李磊.6903例藥物性肝損害文獻(xiàn)分析[J].華南國防醫(yī)學(xué)雜志,2014,28(9):172-173.

[5]黃道林,向娟,劉曉東,等.藥源性肝損傷中藥的研究進(jìn)展[J].海峽醫(yī)學(xué),2012,24(10):13-15.

[6]劉平.中草藥的肝損傷的問題[J].中華肝臟病雜志,2004,12(4):243.

[7]呂崇山.中藥的腎毒性和腎保護(hù)淺談[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2003,31(3):24.

〔責(zé)任編輯 楊德兵〕

Study the Effects of Asarum Dosage Conversion of Xiaoqinglong Decoctionon on Asthma Rat Liver and Kidney Function

CHAI Mao-Shan1,LI Peng2,ZHAO Ye1,GUO Zhi-Jiang1,DENG Liang1
（1.School of Medicine，Shanxi Datong University,Datong Shanxi,037009；2.The People's Hospital of Qingshui,Jincheng Shanxi,048200)

ObjectiveBased on the replication of rat model of asthma,we investigate its effect on the liver and renal function in asthmatic rats by treating with different dosage of Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction,to reveal the different dosage of Asa?rum compatibility of Xiaoqinglong Decoction whether there is a dose-response relationship,to reveal the safety of the Asarum and Xiao?qinglong Decoction,which provides a scientific basis for the clinical safe and efficient use of Asarum.Method84 healthy male SD rats are fed one week after routine and divided into model group,0 grams of Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction group,3 grams Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction group,9 grams of Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction group,15 grams of Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction group,21 grams of Asarum compatibility of Xiaoqinglong Decoction group,normal group,with 12 rats in each group.The modeling and treatment are carried out simultaneously.After the treatment,all rats are fasted for one night,collect blood samples from abdominal aorta.Measure ALT,AST,BUN,SCR content with automatic biochemistry ana?lyzer.ResultsCompared with the normal group and model group,there is no significant difference in the ALT、AST、BUN 、SCR serum content of each compound treatment group（P＞0.05）；ConclusionIn accordance with the fifth edition of prescriptions dose of Xiaoqin?glong Decoction,when Asarum uses from 0 g to 21 grams and other medication unchanged,Xiaoqinglong Decoction has no obvious ef?fect on liver and kidney function(ALT,AST,BUN,SCR)of asthmatic rats.

asarum;xiaoqinglong decoction;asthma;liver and renal function

R285.5

A

1674-0874(2017)05-0042-05

2017-05-16

大同市科技攻關(guān)項(xiàng)目[2015097]

柴茂山(1962-)，男，山西懷仁人，碩士，教授，研究方向：方劑學(xué)。