利用酵母和芽孢桿菌培養(yǎng)海水輪蟲的技術(shù)初探

■ 甘松永 黃錦雄 張敏 林佩玲 石和榮 （廣東省海洋漁業(yè)試驗(yàn)中心）

利用酵母和芽孢桿菌培養(yǎng)海水輪蟲的技術(shù)初探

■ 甘松永 黃錦雄 張敏 林佩玲 石和榮 （廣東省海洋漁業(yè)試驗(yàn)中心）

褶皺臂尾輪蟲屬輪蟲門，單卵巢綱，單巢目，游泳臂尾輪蟲科，臂尾輪蟲屬。具有分布范圍廣，適應(yīng)能力強(qiáng)，生長快，營養(yǎng)豐富，大小適中，適口性好的特點(diǎn),是海水魚苗培育前期的理想餌料。隨著種苗培育密度不斷提高，作為優(yōu)質(zhì)活餌料的海水輪蟲的需求量也不斷增大，能否持續(xù)生產(chǎn)海水輪蟲，已成為種苗培育成敗的關(guān)鍵因素。

輪蟲的食性廣泛，單胞藻，細(xì)菌，酵母，甚至豆?jié){，發(fā)酵魚漿，有機(jī)碎屑，均可作為其培育的餌料。豆?jié){，發(fā)酵魚漿，有機(jī)碎屑一般用作土池培育輪蟲用，易受天氣，水質(zhì)等因子影響，生產(chǎn)不穩(wěn)定。室內(nèi)工廠化培育輪蟲，常見用單胞藻方式進(jìn)行培育，由于輪蟲食量大，受單胞藻培養(yǎng)場地的限制，在進(jìn)行大規(guī)模輪蟲培育時很難做到足量供應(yīng)。雖然采用特有的培育裝置，以濃縮小球藻為餌料，培育的輪蟲密度可達(dá)10,000個／mL以上，但這種輪蟲培育的成本過高，且濃縮小球藻不易獲得，不利于推廣。

在實(shí)際生產(chǎn)中，要進(jìn)行大規(guī)模高密度的輪蟲培育，必然要有高濃度的餌料作為基礎(chǔ)。多種餌料混合培育比單一餌料培育出的輪蟲質(zhì)量要好。利用輪蟲食性廣，濾食性的特點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)方法選取食用酵母與芽孢桿菌作為輪蟲餌料進(jìn)行高密度培養(yǎng)。

褶皺臂尾輪蟲的成蟲

1 材料與方法

1.1 材料

4個1 m3的長方形鋼化桶； 2臺醫(yī)用制氧機(jī)；食用面包酵母和芽孢桿菌（芽孢桿菌≥25億個細(xì)胞／g）；2臺定量泵；4個100 L塑料桶；收集網(wǎng)和顯微鏡，計(jì)數(shù)及水質(zhì)分析用的工具。

1.2 方法

1.2.1 接種前的準(zhǔn)備

培養(yǎng)容器（塑料桶）和所有工具用1 mg／L有效氯濃度消毒，用淡水沖洗干凈備用。

1.2.2 培養(yǎng)海水的處理

4個1 m3的長方形桶加入900L用1 mg／L消毒并曝氣好的過濾海水。

1.2.3 餌料的準(zhǔn)備

預(yù)先用1 mg／L的二氯異氰脲酸鈉消毒并曝氣好的過濾海水，計(jì)算好用量，在1個100 L塑料桶里加一個空氣充氣的氣石,激活好芽孢桿菌。因面包酵母不耐鹽，所以要用淡水在1個100 L塑料桶里加一個空氣充氣的氣石來激活。芽孢桿菌激活后用150目篩絹網(wǎng)過濾，不要?dú)堅(jiān)?。激活后的酵母和芽孢桿菌分裝在另外2個100 L塑料桶，分別加一個氣石充氣保持均勻，使得酵母和芽孢桿菌不會因停放時間長而沉淀，以供定量泵自動投餌用。

1.3 接種

在1 m3長方形桶中接入沖洗干凈，不含有害生物的輪蟲，接種密度為800個/mL。

1.4 日常管理

1.4.1 充氣

醫(yī)用制氧機(jī)調(diào)節(jié)出氣量在4L／min，每部制氧機(jī)分接2個氣石，每個桶放一個氣石在中間位置，平均每個桶的充氧量在2L／min。每個桶再接入2個空氣充氣的氣石，保持微充氣，使輪蟲能均勻分布，不會在某一個地方密集。

1.4.2 培養(yǎng)條件控制

溫度25～32℃，鹽度15‰～25‰，溶解氧≦2 mg/L，非離子氨≦1 mg/L，pH 7～9。

1.5 投餌料

按100萬個輪蟲每天1 g酵母和1 g利生素的用量投餌。在剛接種給餌時，先人工加入1 d投餌量的10%，防止剛開始就出現(xiàn)餌料不足的情況，然后用定量泵少量多次自動給餌。在整個培養(yǎng)周期內(nèi)，計(jì)算好投餌時的用水量，72h內(nèi)不超過100 L，確保不會溢出培養(yǎng)桶。

1.6 觀察與檢查

在培養(yǎng)周期內(nèi)，每天2次檢測輪蟲的生長情況和水質(zhì)因子。計(jì)算輪蟲密度，做好餌料供給。

1.7 收集蟲體

采用一次性培養(yǎng)的方法。在收集輪蟲時，注意小心操作，尤其在水位較高時，注意水壓過大沖擊網(wǎng)袋，造成輪蟲死亡。收集完成后，沖洗好培養(yǎng)桶，加入消毒好的海水，接種輪蟲，進(jìn)行下一周期的培養(yǎng)。

表1 輪蟲生長曲線

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

運(yùn)用市場上所售的面包酵母和芽孢桿菌當(dāng)餌料，通過醫(yī)用制氧機(jī)制氧供給，加大水體含氧量，接種密度為800個／mL，經(jīng)24h，36h，48h，72h培養(yǎng)，分別達(dá)到965個/mL，1,178個/mL，1,206個／mL，1,650個／mL（見表1）。

利用4個1 m3的長方形桶，采用一次性培養(yǎng)的方法，每天能收獲9億左右的輪蟲供給石斑魚育苗使用。

2.2 討論與小結(jié)

在利用濃縮小球藻培養(yǎng)輪蟲時，很多研究表明會產(chǎn)生大量泡沫，需要在培養(yǎng)水體中加入有吸附力的東西去除泡沫，防止泡沫溢出帶走輪蟲。利用濃縮小球藻培養(yǎng)輪蟲，大量產(chǎn)生泡沫這個問題很難得到有效的解決。本研究表明控制好充氣量，利用面包酵母和芽孢桿菌作餌料，不會像利用濃縮小球藻培育輪蟲那樣產(chǎn)生泡沫需加吸附的東西，輪蟲的排泄物和少量多余的殘餌，并不會漂浮在水體中，而是沉入桶底和吸附在桶壁，整個培養(yǎng)水體是干凈無雜質(zhì)的。

激活后的酵母和芽孢桿菌，保存時間不能過長，每天分2次激活為好。

利用酵母和芽孢桿菌培育輪蟲和利用濃縮小球藻培育輪蟲比較，具有很多優(yōu)越性。來源廣，生產(chǎn)酵母和芽孢桿菌的企業(yè)眾多，在市場上能方便買到，而生產(chǎn)濃縮小球藻的廠家屈指可數(shù)；保存方便，酵母和芽孢桿菌能在常溫下保存，濃縮小球藻需冷藏甚至冷凍條件下才能保存；保存時間長；成本低。

用酵母和芽孢桿菌作餌料培養(yǎng)的輪蟲 ，在不經(jīng)強(qiáng)化的情況下，經(jīng)過育苗生產(chǎn)實(shí)際的檢測，在魚苗生長前期過程中，并沒有出現(xiàn)營養(yǎng)不足現(xiàn)象。在后期，隨著魚苗生長，口徑增大，對輪蟲的需求減少，增加投喂枝角類，完全能正常生長。

本實(shí)驗(yàn)在培養(yǎng)輪蟲時，關(guān)鍵的管理工作是防止感染原生動物,必須做到工具的徹底消毒和用水的安全，可以將危害降到最低。如果發(fā)現(xiàn)感染原生動物，有效而簡單的方法就是在收集好輪蟲后，在300目的網(wǎng)袋里用消毒處理好的海水反復(fù)小心沖洗，能將原生動物去除干凈。（參考文獻(xiàn)略）