使用竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對CB模型大鼠肺組織中SOD活性、MDA水平和HP水平的影響

王 芳，熊培政，馮雪梅

（成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611137）

使用竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對CB模型大鼠肺組織中SOD活性、MDA水平和HP水平的影響

王 芳，熊培政，馮雪梅?

（成都中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，四川 成都 611137）

目的：探討竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對慢性支氣管炎（Chronic bronchitis，CB）模型大鼠肺組織中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD)活性、丙二醛（malondiadehyde，MDA）水平和羥脯氨酸（hydroxyproline，HP）水平的影響。方法：將40只SD大鼠隨機(jī)分為對照組（10只）、模型組（10只）、鮮竹瀝組（10只）和竹瀝顆粒組（10只）。將模型組大鼠、鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠制成CB模型。使用濃度為0.7%的氯化鈉溶液對模型組大鼠進(jìn)行灌胃，使用鮮竹瀝口服液對鮮竹瀝組大鼠進(jìn)行灌胃，使用竹瀝顆粒對竹瀝顆粒組大鼠進(jìn)行灌胃，并對比四組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平。結(jié)果：與對照組大鼠相比，模型組大鼠肺組織中SOD的活性更低，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組大鼠相比，鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性更高，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：使用竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對CB模型大鼠進(jìn)行灌胃，可有效地提高其肺組織中SOD的活性，降低其肺組織中MDA的水平和HP的水平。

慢性支氣管炎；竹瀝顆粒；鮮竹瀝口服液；SOD活性；MDA水平；HP水平

鮮竹瀝口服液和竹瀝顆粒均具有清熱、止咳、化痰等功效。這兩種藥物在臨床上常被用于治療肺熱、咳嗽痰多、氣喘胸悶、中風(fēng)舌強(qiáng)、痰涎壅盛和痰熱驚風(fēng)諸證[1]。在本文中，筆者應(yīng)用鮮竹瀝口服液和竹瀝顆粒對CB模型大鼠進(jìn)行灌胃。然后，對比CB模型大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 研究材料

1.1 動物模型

選取健康的SPF級SD大鼠40只（由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號：SCXK（川）2015-030）。這些SD大鼠的平均體重為（200±20）g。

1.2 儀器和藥物

進(jìn)行本次研究需要用到的儀器和藥物主要包括[2]：1）XZB-V5100型可見光分光光度計(jì)（由深圳市信之邦儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)）。2）BS-1101型酶標(biāo)儀（由南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)）。3）鮮竹瀝口服液（由四川省通圓制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：150108）。4）竹瀝顆粒（由四川奧邦藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：150102）。5）SOD測定試劑盒（由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20151118）。6）MDA測定試劑盒（由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20151007）。7）HP測定試劑盒（由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20151114）。8）濃度為0.563g/L的考馬斯亮藍(lán)蛋白標(biāo)準(zhǔn)品（由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20150814）。

2 研究方法

2.1 造模方法和灌胃方法

將40只SD大鼠隨機(jī)分為對照組（10只）、模型組（10只）、鮮竹瀝組（10只）和竹瀝顆粒組（10只）。采用改良的煙熏法[3]將模型組大鼠、鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠制成CB模型。造模方法是：1）將10只SD大鼠置于60 cm×60 cm×60 cm的煙室中，煙室上方開4個(gè)直徑為3cm的正方形小孔，煙室下方開4個(gè)直徑為1cm的正方形小孔。2）將點(diǎn)燃的天下秀牌香煙置于煙室下方的小孔中（每次點(diǎn)燃10支），對SD大鼠進(jìn)行煙熏30min，每天煙熏2次，連續(xù)煙熏30天。在對這三組大鼠進(jìn)行煙熏后的第15天起，對其進(jìn)行灌胃，直至煙熏造模結(jié)束。進(jìn)行灌胃的方法是：1）使用濃度為0.7%的氯化鈉溶液對模型組大鼠進(jìn)行灌胃。2）使用鮮竹瀝口服液對鮮竹瀝組大鼠進(jìn)行灌胃。3）使用濃度為0.2g/ml的竹瀝顆粒溶液（由竹瀝顆粒和濃度為0.7%的氯化鈉溶液配制而成） 對竹瀝顆粒組大鼠進(jìn)行灌胃。

2.2 檢測方法

2.2.1 肺組織勻漿的制備方法 1）使用生理鹽水對大鼠的肺組織塊進(jìn)行漂洗，然后對其肺組織塊進(jìn)行稱量。2）在大鼠的肺組織塊中加入適量的生理鹽水（肺組織塊與生理鹽水的重量比為1：9）。3）剪碎肺組織塊，然后采用冰水浴法將肺組織塊制成勻漿。4）對肺組織勻漿進(jìn)行離心處理，并取勻漿的上清液待用（離心速度為3000轉(zhuǎn)/min，離心時(shí)間為 10min）。

2.2.2 進(jìn)行SOD檢測、MDA檢測和HP檢測的方法 1）采用黃嘌呤氧化酶法對肺組織勻漿上清液中SOD的活力單位值進(jìn)行檢測。2）采用硫代巴比妥酸比色法對肺組織勻漿上清液中MDA的含量進(jìn)行檢測。3）采用樣本堿水解法對肺組織勻漿上清液中HP的含量進(jìn)行檢測。4）采用考馬斯亮藍(lán)法對肺組織勻漿上清液中總蛋白的含量進(jìn)行檢測。5）嚴(yán)格按照試劑盒上的操作說明進(jìn)行檢測。為了規(guī)避檢測干擾因素的影響，肺組織勻漿中SOD的活性以SOD活力單位值與總蛋白含量比值的形式表示，肺組織勻漿中MDA的水平、HP的水平以MDA含量或HP含量與總蛋白含量比值的形式表示。

2.3 觀察指標(biāo)

觀察并對比四組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件對文中數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，所有數(shù)據(jù)均用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

與對照組大鼠相比，模型組大鼠肺組織中SOD的活性更低，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組大鼠相比，鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性更高，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 對比四組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平 （ n=10，±s）

表1 對比四組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平 （ n=10，±s）

注：與對照組比較：△△P＜0.01；與模型組比較：▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與鮮竹瀝組比較★P＞0.05。

組別 對照組 模型組 鮮竹瀝組 竹瀝顆粒組SOD （U/mgprot）163.92±16.04109.98±10.81△△144.65±9.71▲155.64±14.67▲★MDA（nmol/mgprot） 2.23±0.42 4.32±0.72△△ 2.81±0.61▲ 2.74±0.60▲★HP（μg/mgprot） 306.91±20.68 476.14±35.83△△ 367.61±22.74▲ 321.47.61±19.75▲▲★

4 討論

4.1 CB模型大鼠的臨床表現(xiàn)及其肺組織的病理變化特點(diǎn)

在本文中，筆者采用改良的煙熏法制作CB大鼠模型。在進(jìn)行造模的過程中，大鼠出現(xiàn)了咳嗽、哮鳴音、呼吸困難、呼吸道分泌物增多、體瘦、毛枯和蜷臥少動等癥狀。光學(xué)顯微鏡

下可見模型組大鼠的支氣管有不同程度的中性粒細(xì)胞浸潤、黏膜上皮細(xì)胞受損、杯狀細(xì)胞增多和充血等表現(xiàn)。這些CB模型大鼠的臨床表現(xiàn)及其肺組織的病理變化與任勃、陶慶豐、馬淑揚(yáng)等學(xué)者的研究結(jié)果[4]相似。

4.2 CB的發(fā)生、發(fā)展與大鼠SOD活性、MDA水平和HP水平的關(guān)系

SOD廣泛存在于需氧代謝細(xì)胞中。它不但可以清除動物體內(nèi)過多的超氧陰離子自由基（O2-），同時(shí)還能保護(hù)其他抗氧化酶（如CAT、GSH-Px等）免受O2-的滅活，從而起到減輕細(xì)胞損傷的作用[5]。

MDA是反映機(jī)體氧化損傷程度的重要指標(biāo)之一[6]。CB模型大鼠體內(nèi)炎性細(xì)胞產(chǎn)生的O2-能攻擊其生物膜中的多價(jià)不飽和脂肪酸，進(jìn)而產(chǎn)生MDA等脂質(zhì)過氧化物。因此，CB模型大鼠體內(nèi)MDA水平的高低可間接反映其機(jī)體細(xì)胞受O2-攻擊的嚴(yán)重程度。

HP是膠原蛋白的代謝產(chǎn)物，其含量的高低可反映膠原蛋白的降解情況，從而間接反映肺泡壁損傷的程度[7]。由此可見，HP可作為判斷CB模型大鼠病情嚴(yán)重程度的指標(biāo)[8]。

4.3 用竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對CB模型大鼠進(jìn)行灌胃的效果

本次研究的結(jié)果顯示，與對照組大鼠相比，模型組大鼠肺組織中SOD的活性更低，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更高。與模型組大鼠相比，鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性更高，其肺組織中MDA的水平和HP的水平更低。鮮竹瀝組大鼠和竹瀝顆粒組大鼠肺組織中SOD的活性、MDA的水平和HP的水平相比差異不大。

總之，使用竹瀝顆粒和鮮竹瀝口服液對CB模型大鼠進(jìn)行灌胃，可有效地提高其肺組織中SOD的活性，降低其肺組織中MDA的水平和HP的水平。

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Effect of Zhuli Granule and Xianzhuli Decoction on SOD activity, MDA level and HP level in rats lung tissue model of CB

Wang Fang Xiong Peizheng Feng Xuemei
(School of Basic Medicine of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine Chengdu Sichuan 611137)

Objective:To study effect of Zhuli Granule and Xianzhuli Decoction on SOD(superoxide dismutase) activity, MDA(malondiadehyde )level and HP(hydroxyproline) level in rats lung tissue model of CB(Chronic bronchitis).Methods 40 rats were randomly divided into 4 groups:control group, chronic bronchitis (CB)group, Xianzhuli group and Zhuli group.Make model group, Zhuli group and Xianzhuli group into CB model.Model group were given normal saline(concentration is 0.7%)by gavage, Xianzhuli group were given Xianzhuli decoction by gavage, Zhuli group were given Zhuli granule by gavage ,compare SOD activity, MDA level and HP level of 4 groups rats.Results Compare with control group, SOD activity of model group was lower, MDA level and HP level were higher, discrepancy of research results were statistically significant (P＜0.05).Compare with model group,SOD activity of Xianzhuli group and Zhuli group were higher, MDA level and HP level, discrepancy of research results were statistically significant (P＜0.05).Discrepancy of SOD activity, MDA level and HP level of Xianzhuli group and Zhuli group were no statistically significant (P＞0.05).Conclusion Give Zhuli granule or Xianzhuli decoction by gavage to rats model of CB can improve SOD activity and decrease MDA level and HP level in lung tissue.

chronic bronchitis , Zhuli granule, Xianzhuli decoction, SOD activity, MDA level, HP level

R562.2+1

B

2095-7629-（2017）8-0061-03

王芳，四川涼山人，碩士研究生，研究方向?yàn)橹形麽t(yī)結(jié)合基礎(chǔ)，郵箱：296624143@qq.com

＊通訊作者：馮雪梅，四川成都人，教授，碩士研究生導(dǎo)師，郵箱：fxmcd@aliyun.com