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    海鮮菇工廠化瓶栽優(yōu)良菌株的篩選

    2017-11-30 07:59:55黃亮王玉班立桐楊紅澎張利強(qiáng)楊華
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2017年20期

    黃亮+王玉+班立桐+楊紅澎+張利強(qiáng)+楊華

    摘要:利用拮抗試驗(yàn)和酯酶同工酶電泳試驗(yàn)考察國內(nèi)外常見的5個(gè)海鮮菇主栽品種(編號(hào)1~5分別對(duì)應(yīng)的是菌株來源為日本、日本、市售、市售、福建三明真菌研究所),并對(duì)其進(jìn)行出菇比較,以期篩選出適宜工廠化的優(yōu)良菌株。結(jié)果表明,5種菌株間均有拮抗現(xiàn)象;酯酶同工酶試驗(yàn)表明,這5種海鮮菇菌株可以分為4類,即2、3號(hào)為一類,1、4、5號(hào)各為一類。5種菌株瓶栽出菇后的農(nóng)藝性狀差異較大,其中4號(hào)菌株菇形最好、叢高一致、菇蓋均一性最好,且子實(shí)體產(chǎn)量居第2,生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)到77.5%;5號(hào)菌株菇形較好,子實(shí)體產(chǎn)量最高,生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高,為78.1%。因此可見,4號(hào)、5號(hào)菌株是適合工廠化瓶栽的海鮮菇菌株。

    關(guān)鍵詞:海鮮菇;拮抗試驗(yàn);酯酶同工酶;出菇試驗(yàn);工廠化瓶栽;優(yōu)良菌株

    中圖分類號(hào): S646.904 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2017)20-0135-03

    海鮮菇(Hypsizygus marmoreus)別稱真姬菇、玉蕈等,其菇形優(yōu),質(zhì)地脆,味道鮮,具有海蟹味,在日本被稱為“蟹味菇”,是一種藥食兩用的珍稀菌,深受廣大消費(fèi)者喜愛[1-2]。海鮮菇中蛋白質(zhì)含量高,且含有豐富的礦物質(zhì)及多種維生素,在食用菌中有“金枝玉葉”之稱[3]。其中含有的大量必需氨基酸、各種維生素、粗纖維、木質(zhì)素,長(zhǎng)期食用能起到良好的保健和預(yù)防疾病的作用[4-5]。我國海鮮菇工廠化生產(chǎn)起步較晚,近幾年才出現(xiàn)瓶栽模式,對(duì)海鮮菇的研究不夠系統(tǒng)和深入,導(dǎo)致我國海鮮菇工廠化生產(chǎn)出來的蘑菇產(chǎn)量、質(zhì)量都與國外水平先進(jìn)的國家如日本、美國等相比還有很大的差距。我國對(duì)于海鮮菇菌種工廠化管理比較混亂,各個(gè)工廠的技術(shù)水平和管理水平參差不齊,經(jīng)常出現(xiàn)同種異名或者異名同種的現(xiàn)象。由于菌種的管理到位有利于工廠化生產(chǎn)海鮮菇的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì),鑒于此,對(duì)于海鮮菇工廠化優(yōu)良菌株的選育很有必要。

    1 材料與方法

    1.1 菌種

    本試驗(yàn)采用拮抗試驗(yàn)和酯酶同工酶電泳試驗(yàn)考察國內(nèi)外常見的5個(gè)海鮮菇主栽品種,詳見表1。

    1.2 培養(yǎng)基

    馬鈴薯綜合培養(yǎng)基[6]:200 g馬鈴薯,1.5 g硫酸鎂,20 g瓊脂,1.0 g磷酸二氫鉀,20 g葡萄糖,水1 000 mL。

    栽培瓶培養(yǎng)基:70 %木屑,10 %棉籽殼,10 %米糠,9%玉米粉,1%石灰。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 海鮮菇拮抗試驗(yàn) 參照NY/T 1845—2010《食用菌菌種區(qū)別性鑒定 拮抗反應(yīng)》操作:將5種海鮮菇菌株兩兩接種到預(yù)先配制好的馬鈴薯綜合培養(yǎng)基平板上,2株菌株同時(shí)接種于同一平板上,間距約3 cm,24 ℃恒溫培養(yǎng)20 d左右。待菌絲體長(zhǎng)滿平板后觀察海鮮菇2個(gè)接種塊交界處是否有褐色的拮抗線出現(xiàn)。

    1.3.2 海鮮菇酯酶同工酶電泳試驗(yàn) 將不同海鮮菇菌株于馬鈴薯綜合培養(yǎng)基上培養(yǎng)20 d,培養(yǎng)溫度24 ℃,稱取0.5 g菌絲,放于預(yù)冷研缽中,加入液氮研磨至乳白色疏松狀,加入2倍體積樣品緩沖液,4 ℃、10 000 r/min離心10 min。取上清液,經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳后,顯影觀察測(cè)量,并計(jì)算相對(duì)遷移率Rf,Rf=蛋白條帶移動(dòng)距離/溴酚藍(lán)移動(dòng)距離。

    1.3.3 子實(shí)體農(nóng)藝性狀調(diào)查 將5種海鮮菇菌株分別接種在相同培養(yǎng)基的栽培瓶中培養(yǎng)至出菇,每個(gè)菌株接32瓶,在相同的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng),待海鮮菇子實(shí)體生長(zhǎng)至八分熟即進(jìn)行采收,測(cè)定這5種海鮮菇的叢高、單株質(zhì)量、子實(shí)體數(shù)、菌蓋厚度、菌蓋直徑、生物學(xué)轉(zhuǎn)化率等相關(guān)數(shù)據(jù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 海鮮菇菌株間的拮抗反應(yīng)

    拮抗反應(yīng)是異宗結(jié)合食用菌品種鑒定的常用方法,已經(jīng)在許多食用菌菌種鑒定中使用。待不同菌株的菌絲生長(zhǎng)邊緣靠近時(shí),從正面觀察其繼續(xù)生長(zhǎng)情況,從反面觀察色素沉著情況。由表2可知,這5種菌株兩兩相互為1個(gè)對(duì)比組,共有10個(gè)對(duì)比組。由圖1可以看出,所有對(duì)比組正面菌絲都不融合,且背面全部都產(chǎn)生了拮抗線,可以初步確定這5種菌株是海鮮菇的5個(gè)不同品種。

    2.2 不同菌株的酯酶同工酶檢驗(yàn)

    2.2.1 海鮮菇酯酶同工酶電泳結(jié)果 由圖2可以看出,這5個(gè)樣品有互不相同的電泳條帶類型與條帶數(shù),可以說明這5個(gè)菌株間沒有親緣關(guān)系,為不同的海鮮菇品種。

    從圖2還可以看出,供試5個(gè)菌株的酯酶同工酶的酶譜條帶的Rf值位于0.08~0.71之間,條帶數(shù)4~7條不等,并且每個(gè)條帶的寬窄度、顏色的深淺均表現(xiàn)出一定的差異。其中1號(hào)、3號(hào)有5條帶,2號(hào)、5號(hào)有4條帶,4號(hào)條帶數(shù)最多,為7條。因此可以看出,這5個(gè)品種都有部分條帶是相同的,但沒有2個(gè)是完全相同的,可以確定它們有一定的親緣關(guān)系,但關(guān)系較遠(yuǎn)。

    2.2.2 海鮮菇酯酶同工酶聚類分析 在酶譜中,相應(yīng)位置有酶帶表示為1,沒有酶帶表示為0,根據(jù)表2統(tǒng)計(jì)各海鮮菇菌株的酯酶同工酶信息,用SPSS軟件進(jìn)行聚類分析,得到各海鮮菇菌株酯酶同工酶的聚類樹(圖3),然后對(duì)各菌株進(jìn)行遺傳分析。

    由圖3可知,1號(hào)、4號(hào)、5號(hào)樣品與其他樣品遷移率和條帶數(shù)的差異較大。將5種海鮮菇菌株分為4類:1號(hào)、4號(hào)、5號(hào)各為一類,2號(hào)、3號(hào)為一類。酯酶同工酶結(jié)果表明,這種分析方法在研究海鮮菇的分類地位及親緣關(guān)系方面較其拮抗反應(yīng)的結(jié)果更細(xì)微。

    2.3 5種海鮮菇菌株的出菇比較

    2.3.1 5種海鮮菇生產(chǎn)周期比較 由表3可知,后熟時(shí)間最短的是5號(hào)菌株,為56 d,其次為4號(hào)菌株,為57d,較長(zhǎng)的是1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株,其中1號(hào)、2號(hào)菌株為62 d,3號(hào)菌株為60 d。由此可見,若用4號(hào)、5號(hào)菌株,則可以有較短的后熟時(shí)間,從而縮短整個(gè)培養(yǎng)周期。4號(hào)、5號(hào)菌株的現(xiàn)蕾時(shí)間最短都出現(xiàn)在進(jìn)入出菇房后8 d,而現(xiàn)蕾最遲的為1號(hào),在進(jìn)入出菇房后12 d才現(xiàn)蕾。從成本、周期角度考慮,4號(hào)、5號(hào)菌株為最佳選擇。endprint

    2.3.2 5種海鮮菇子實(shí)體農(nóng)藝性狀比較 菇蓋基本展開后,海鮮菇菌株隨機(jī)抽取8瓶,觀察記錄采收時(shí)間、后熟時(shí)間、現(xiàn)蕾時(shí)間、子實(shí)體叢質(zhì)量、子實(shí)體個(gè)數(shù)、叢高、子實(shí)體單個(gè)質(zhì)量、菌蓋厚度、菌蓋直徑等子實(shí)體形態(tài)、菇形等,并計(jì)算其平均值,結(jié)果見表4。

    由表4可知,1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株的子實(shí)體數(shù)量比較接近,都很少,平均都不超過17個(gè),而4號(hào)子實(shí)體數(shù)量最多,平均達(dá)到50個(gè)以上,5號(hào)子實(shí)體平均數(shù)量也達(dá)到了35個(gè)左右;5號(hào)叢高具有明顯的優(yōu)勢(shì),平均達(dá)到14.53 cm,其他4種都比較矮,其中4號(hào)最矮,平均只有8.55 cm;3號(hào)菌蓋平均厚度最大,達(dá)到了1.15 cm,1號(hào)菌蓋厚度最小,為0.68 cm,其他3種子實(shí)體平均厚度適中;5號(hào)菌蓋平均直徑最小,為1.87 cm,2號(hào)、3號(hào)菌株平均直徑最大,都超過了2.40 cm,由于在商品轉(zhuǎn)運(yùn)過程中,菌蓋大容易被碰掉,因此菌蓋小的子實(shí)體商品性能較好。

    從菇的外形來看,4號(hào)最佳,菇形緊湊,比較整齊;其次為5號(hào),菇形為細(xì)長(zhǎng)狀,菇蓋小,菇形比較整齊;1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菇形參差不齊,而且部分有瘤狀物出現(xiàn)(圖片未顯示),從而影響了外觀。從子實(shí)體單個(gè)質(zhì)量來說,3號(hào)比較突出,子實(shí)體平均單個(gè)質(zhì)量達(dá)到8.86 g,但整齊度較差。

    經(jīng)直觀分析,1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體農(nóng)藝性狀不佳,不適合工廠化栽培推廣;4號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體的菇形整齊,產(chǎn)量也高,子實(shí)體數(shù)量也多,5號(hào)菌株菌柄比較高,產(chǎn)量同樣也不低,值得推薦。

    2.3.3 5種海鮮菇菌株子實(shí)體產(chǎn)量及生物學(xué)轉(zhuǎn)化率 由表5可知,5號(hào)菌株出菇的產(chǎn)量最高,為164.13 g,生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)78.1%,其次為4號(hào)菌株,平均生物學(xué)轉(zhuǎn)化率為77.5%,與1、2、3號(hào)菌株之間存在顯著差異。

    3 討論與結(jié)論

    真姬菇有灰色、白色品系,灰色品系被稱為蟹味菇,而通體雪白,叢生,長(zhǎng)度5~8 cm的白色品系,人們稱之為白玉菇。我國在白玉菇菇蕾形成后,通過調(diào)控栽培環(huán)境的溫、光、氣、濕,主要是對(duì)二氧化碳濃度進(jìn)行控制,促使菇柄伸長(zhǎng)至8~16 cm,為了與白玉菇區(qū)別,商品名改稱為海鮮菇。以上三者單位體積栽培料轉(zhuǎn)化率通常以海鮮菇較高,其次是蟹味菇,白玉菇最低[7]。

    由于在拮抗試驗(yàn)中,5種海鮮菇菌株兩兩之間都出現(xiàn)了拮抗線,可以初步判定為海鮮菇的5個(gè)不同品種,它們之間的親緣關(guān)系不明顯。再通過對(duì)這5種菌株酯酶同工酶酶譜比較發(fā)現(xiàn),它們的酯酶同工酶酶譜相差較大,條帶差異性也較大,進(jìn)一步證明其親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。經(jīng)聚類分析,將5個(gè)海鮮菇菌株分為4組。以出菇情況為主要篩選指標(biāo),比較這5種菌株在工廠化瓶栽中的表現(xiàn),結(jié)果表明,1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)均具有產(chǎn)量低、菇形差、培養(yǎng)周期長(zhǎng)等缺點(diǎn),其中3號(hào)菌株菇蓋出現(xiàn)脫分化的瘤狀物,影響蘑菇的外觀;而4號(hào)、5號(hào)菌株則明顯優(yōu)于前3種,具周期短、產(chǎn)量高、外形美觀等優(yōu)點(diǎn)。

    對(duì)子實(shí)體的農(nóng)藝性狀調(diào)查顯示,4號(hào)菌株產(chǎn)子實(shí)體雖然叢高不是最高的,但是菇形好、叢高一致、菇蓋均一性好,且子實(shí)體產(chǎn)量較高,生物學(xué)轉(zhuǎn)化率達(dá)到77.5%;5號(hào)菌株菇形較好,子實(shí)體產(chǎn)量最高,生物學(xué)轉(zhuǎn)化率最高,為78.1%。綜合分析可知,選取4號(hào)、5號(hào)菌株作為優(yōu)良菌株規(guī)模化種植,可以提高海鮮菇的產(chǎn)量、質(zhì)量,是適合工廠化瓶栽的菌株。

    參考文獻(xiàn):

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    [7]黃 毅. 圖解海鮮菇袋式栽培技術(shù)(一)[J]. 食藥用菌,2015,23(3):143-146.endprint

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