基于IgG抗A（B）效價(jià)梯度及動(dòng)態(tài)差值探討ABO—HDN病情相關(guān)性

沈健++施欣蔚++陳秉宇++王震

[摘要] 目的 探討動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)IgG抗A（B）效價(jià)梯度與ABO-HDN病情嚴(yán)重程度臨床指標(biāo)的相關(guān)性。 方法 選取2017年1～5月間47例ABO溶血病患兒臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，記錄患兒出生后32 h的血清總膽紅素（serum total bilirubin，STB32h）、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）、網(wǎng)織紅細(xì)胞百分比（the percentage of reticulocyte，Ret%）及孕婦第16和37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度。比較各組新生兒臨床指標(biāo)和lgG抗A（B）效價(jià)的相關(guān)性。 結(jié)果 STB32h與37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差呈正相關(guān)（P<0.001）；Hb與第37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度呈負(fù)相關(guān)（r2=0.2074，P=0.0013）；Hb與IgG抗A（B）37-16梯度差值呈負(fù)相關(guān)（r2=0.1831；P=0.0027）；Ret%與37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差值呈正相關(guān)（P<0.001）。 結(jié)論 產(chǎn)前37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度、IgG抗A（B）37-16效價(jià)梯度差值與新生兒ABO-HDN的病情嚴(yán)重程度具有一定相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] ABO溶血??；STB32h；IgG抗A（B）效價(jià)；IgG抗A（B）37-16效價(jià)梯度差

[中圖分類號(hào)] R725.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）29-0035-03

Exploration of the correlation of ABO-HDN disease based on IgG anti-A（B）potency gradient and dynamic difference

SHEN Jian1，2 SHI Xinwei3 CHEN Bingyu1，2 WANG Zhen1，2

1.Department of Blood Transfusion， Zhejiang Provincial People's Hospital， People's Hospital of Hangzhou Medical College， Hangzhou 300014， China； 2.Operating Room， Zhejiang Provincial Ophthalmologic Hospital， Hangzhou 300014， China

[Abstract] Objective To investigate the correlation between dynamic monitoring of IgG anti-A （B）potency gradient and clinical indexes of ABO-HDN severity. Methods A total of 47 patients with ABO hemolytic disease from January to May 2017 were analyzed statistically. The serum total bilirubin（STB32 h）， hemoglobin（hemoglobin， Hb） and the percentage of reticulocyte（Ret%） at 32 h after birth of children， and the 16th and 37th week IgG A（B） potency gradient in pregnant women were recorded. The neonatal clinical indicators and anti-A（B） titers in newborns of each group were compared. Results There was a positive correlation between STB32h and the 37-week IgG A（B）titer gradient， IgG A（B）37-16 gradient difference（P<0.001）. Hb was negatively correlated with the 37th week IgG A（B） potency gradient（r2=0.2074， P=0.0013）. Hb was negatively correlated with IgG A（B）37-16 gradient difference（r2=0.1831， P=0.0027）. Ret% was positively correlated with the IgG A（B） potency gradient at 37th week and IgG A（B）37-16 gradient difference（P<0.001）. Conclusion The IgG anti-A（B） potency gradient at 37 weeks before delivery and IgGA（B）37-16 potency gradient difference have a certain correlation with the severity of neonatal ABO-HDN.

[Key words] ABO hemolytic disease； STB32h； IgG anti-A（B） titer； IgGA（B）37-16 potency gradient difference

新生兒溶血病（heamolytic disease of the fetus and the newborn，HDN）主要是妊娠過程中胎兒的血液通過胎盤與母體發(fā)生血液循環(huán)，從而母體針對(duì)父源顯性血型抗原產(chǎn)生相應(yīng)免疫抗體，最終導(dǎo)致細(xì)胞膜溶解，紅細(xì)胞破壞、崩解進(jìn)一步影響或損傷胎兒[1]。有研究調(diào)查表明現(xiàn)階段在我國(guó)約有85%的新生兒溶血病是由于母嬰ABO血型不合而產(chǎn)生的[2-4]。在ABO-HDN臨床預(yù)防和治療過程中，我們均選用孕婦血型IgG抗A（B）效價(jià)梯度來預(yù)示ABO-HDN發(fā)病率高低[5]。國(guó)內(nèi)相關(guān)研究[6]進(jìn)一步提出產(chǎn)前動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)O型血孕婦IgG抗A（B）抗體效價(jià)更有利于預(yù)示新生兒ABO-HDN是否發(fā)病，本文認(rèn)為這結(jié)論是正確可行的，但同時(shí)也不能忽視產(chǎn)前第37周IgG抗A（B）抗體效價(jià)梯度預(yù)示新生兒ABO-HDN病情嚴(yán)重程度的重要性。因此，本次研究對(duì)47例O型血孕婦進(jìn)行產(chǎn)前IgG抗A（B）抗體效價(jià)的連續(xù)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，并分析產(chǎn)前IgG抗A（B）抗體效價(jià)梯度和動(dòng)態(tài)差值與新生兒ABO-HDN病情嚴(yán)重程度之間的相關(guān)性。endprint

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 入選標(biāo)準(zhǔn) 初篩2017年1～5月間于浙江省人民醫(yī)院出生并收治的47例O型孕婦，孕婦身體狀況良好，無輸血史，平均年齡（24.83±4.56）歲；其中O型孕婦在第16周和第37周抽EDTA抗凝靜脈血5 mL，檢測(cè)孕婦第16、37周產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)后，對(duì)O型血孕婦進(jìn)行二次篩選。

1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)[7] ①排除妊娠期存在宮內(nèi)窘迫、窒息的孕婦；排除存在巨細(xì)胞病毒感染、乙肝e抗原陽(yáng)性、丙肝抗體陽(yáng)性等感染性疾病的孕婦；排除存在肝功能異常、低蛋白血癥等肝、腎、血液系統(tǒng)等方面疾病的孕婦；排除存在Rh溶血病、G-6-PD缺乏癥等溶血方面疾病的新生兒；②O型血孕婦分娩后新生兒確診為ABO-HDN，記錄患兒3個(gè)ABO-HDN病情臨床指標(biāo)：STB32h、Hb、Ret%；③孕婦第16周產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)<1∶64，第37周產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)≥1∶64，梯度相差越大優(yōu)先納入研究。

1.2 研究方法

1.2.1 O型血孕婦產(chǎn)前IgG抗體效價(jià)檢測(cè) 具體操作為：①700 μL的10 mM的DTT與100 μL的孕婦靜脈血清混勻密封后，37℃水浴0.5 h，充分破壞血清中血型IgM類抗體，使用標(biāo)準(zhǔn)血清作為對(duì)照；②將水浴破壞IgM類抗體后孕婦血清進(jìn)行倍比稀釋成10管，試管上標(biāo)記為1～10，等同于孕婦IgG抗體效價(jià)梯度。利用微柱凝膠法進(jìn)行檢測(cè)，若紅細(xì)胞未沉降到凝膠卡底部判為陽(yáng)性，以最后一個(gè)陽(yáng)性孔作為孕婦IgG抗體效價(jià)梯度的結(jié)果。本次研究檢測(cè)孕婦第16周和第37周產(chǎn)前IgG抗A（B）效價(jià)后換算為效價(jià)梯度，IgG抗A（B）37-16梯度差值=IgG抗A（B）37w梯度-IgG抗A（B）16w梯度。見表1。

1.2.2 新生兒溶血病三項(xiàng)試驗(yàn) ①新生兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)：利用生理鹽水制備1%濃度新生兒紅細(xì)胞懸液50 μL，利用微柱凝膠法進(jìn)行檢測(cè)，若紅細(xì)胞沒有沉降到凝膠卡底部判為新生兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽(yáng)性。②標(biāo)本制備：將1 mL洗滌后的患兒紅細(xì)胞與等量6%小牛血清牛蛋白混合后，56℃水浴振搖8 min，立即用水平離心機(jī)2200 r/min離心2 min，吸出紅色上清液作為該次實(shí)驗(yàn)的放散液。③放散試驗(yàn)和游離試驗(yàn)：取25 μL放散液加入微柱凝膠卡中，編號(hào)1、2、3；同時(shí)取25 μL患兒血清加入微柱凝膠卡中，編號(hào)4、5、6，在微柱凝膠孔中分別加入1滴0.8%的A、B、O型標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞懸液，孵育離心，若紅細(xì)胞未沉降到凝膠卡底部判為陽(yáng)性。具體方法和試驗(yàn)陽(yáng)性判斷參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[8]。

1.3 新生兒溶血病診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]

①存在母嬰ABO血型不合。②黃疸出現(xiàn)早，加深快，可伴有貧血、肝脾腫大、水腫。③網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和百分比顯著升高。④直接抗人球蛋白實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性。⑤排除其他原因引起的黃疸、貧血。①～⑤條均符合者則確診為新生兒ABO溶血?。坏冖軛l為陰性，其余4條均符合者則臨床診斷為新生兒ABO溶血病。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（x±s）表示，兩因素間的相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

47例O型孕婦平均年齡（24.83±4.56）歲；STB32h平均（283.59±59.48）μmol/L；Hb平均（137.90±15.98）g/L；Ret平均（8.44±2.06）%；IgG抗A（B）37w梯度（6.91±1.43）；IgG抗A（B）37-16梯度差值[IgG A（B）37w梯度-IgG A（B）16w梯度]（3.57±1.75）。見表2。

2.2 臨床指標(biāo)相關(guān)性比較

STB32h、Hb、Ret%，并與IgG抗A（B）37w梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差值進(jìn)行相關(guān)性比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明IgG抗A（B）37w梯度和IgG抗A（B）37-16梯度差值能較好地預(yù)示患兒ABO-HDN的病情嚴(yán)重程度。見表3。

3 討論

ABO-HDN主要是由于父源ABO血型基因的存在導(dǎo)致母嬰血型不合的免疫反應(yīng)。胎兒從父親遺傳而產(chǎn)生的ABO血型抗原恰為孕婦血液中所缺少的，在妊娠后期，母體因胎兒ABO血型抗原不合被致敏產(chǎn)生相應(yīng)的IgM抗體和少量的IgG抗體，導(dǎo)致部分新生兒發(fā)生溶血[10-11]。ABO-HDN發(fā)病率會(huì)隨著IgG抗體效價(jià)的升高相應(yīng)增加[12-13]，F(xiàn)asano RM等[14]研究顯示當(dāng)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)小于1∶64 時(shí)，新生兒很少發(fā)生HDN，而當(dāng)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)大于或等于1∶512時(shí)，HDN發(fā)生率高達(dá)100%。因此我們比較一致的觀點(diǎn)認(rèn)為：監(jiān)測(cè)O型血孕婦產(chǎn)前IgG血型抗體效價(jià)可以預(yù)測(cè)HDN的風(fēng)險(xiǎn)[15]。但在實(shí)際臨床檢測(cè)和咨詢中明確認(rèn)為：動(dòng)態(tài)檢測(cè)孕婦血型IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值能夠更好預(yù)測(cè)ABO-HDN的發(fā)病率。但在預(yù)示ABO-HDN的病情嚴(yán)重程度方面，相關(guān)研究[6]沒有進(jìn)一步談?wù)搫?dòng)態(tài)檢測(cè)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值和第37孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度孰強(qiáng)孰弱？本文就此提出假設(shè)：是否動(dòng)態(tài)檢測(cè)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值越大，預(yù)示ABO-HDN病情嚴(yán)重程度及隨之發(fā)生的貧血、黃疸、肝脾大、膽紅素腦病及水腫等癥狀也越嚴(yán)重[16-18]，且該數(shù)值是否比第37孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度能夠更好地預(yù)示ABO-HDN病情嚴(yán)重程度？本文以患兒出生后STB32h、Hb、Ret%這三個(gè)臨床指標(biāo)與第37孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度和孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值比較后進(jìn)而討論如下。

本研究說明三點(diǎn)：第一，臨床醫(yī)生評(píng)估ABO-HDN的病情嚴(yán)重程度一般基于上訴三個(gè)指標(biāo)，我們發(fā)現(xiàn)上述指標(biāo)兩兩均有一定的相關(guān)性，見表1。STB32h和Ret%臨床指標(biāo)與第37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度、IgG抗A（B）37-16梯度差呈正相關(guān)（P<0.001）；而Hb與第37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度和IgG抗A（B）37-16梯度差呈負(fù)相關(guān)（P<0.05）。第二，有文獻(xiàn)[6]表明動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值比固定孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度更能預(yù)示ABO-HDN的發(fā)病率。但是從表2可知，第37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度比IgG抗A（B）37-16梯度差值對(duì)臨床病情三個(gè)指標(biāo)（STB32h、Hb、Ret%）的相關(guān)性更高，離散度更小，說明在臨床病情嚴(yán)重程度上第37周IgG抗A（B）效價(jià)梯度比IgG抗A（B）37-16梯度差值預(yù)示效果更好。第三，新生兒ABO溶血病引起的臨床表現(xiàn)以黃疸和貧血為主，黃疸出現(xiàn)時(shí)間早，可迅速進(jìn)展為重度甚至極重度高膽紅素血癥[19]，貧血發(fā)生率、輸血率和合并感染率均較高[20]，且新生兒ABO溶血病引起的黃疸多在生后48～72 h出現(xiàn)[19]。因此我們選擇STB32h、Hb、Ret%三個(gè)指標(biāo)來體現(xiàn)新生兒ABO-HDN的臨床病情嚴(yán)重程度，在本次研究中具有一定的可行性。為了提高診斷的準(zhǔn)確性，某些醫(yī)院建議O型血孕婦且夫妻血型不合應(yīng)在孕期第16、28、36周各作1次IgG抗A（B）效價(jià)測(cè)定[21]，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值能更好預(yù)示ABO-HDN發(fā)病率[6]。但就本次研究統(tǒng)計(jì)而言，從預(yù)示ABO-HDN病情的嚴(yán)重程度方向來說，本文首次以數(shù)據(jù)論證第37孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度比動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值預(yù)示ABO-HDN病情嚴(yán)重程度的效果更好，而這是以往研究ABO-HDN沒有明確提出的[5-6，15，20-21]。endprint

綜上所述，對(duì)于ABO-HDN發(fā)病率可以采用動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度差值，而第37孕周的孕婦IgG抗A（B）效價(jià)梯度能夠更好地預(yù)示ABO-HDN病情嚴(yán)重程度。兩個(gè)數(shù)據(jù)相互結(jié)合能夠?qū)BO-HDN發(fā)病率和病情嚴(yán)重程度有個(gè)更全面的判斷。

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（收稿日期：2017-07-12）endprint