青海省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查

孫生禎 傅義娟 游瀟倩 林元清 （青海省動物疫病預(yù)防控制中心 青海 西寧 810000）

?

青海省豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查

孫生禎 傅義娟 游瀟倩 林元清 （青海省動物疫病預(yù)防控制中心 青海 西寧 810000）

本次監(jiān)測采用ELISA方法對2012年~2016年青海省西寧市及海東地區(qū)8個市(縣)規(guī)模豬場(戶)3928份豬血清進行了豬偽狂犬病的血清學(xué)檢測，結(jié)果檢出陽性豬271頭，陽性率為55.2%，其中海東地區(qū)(平安19.8%、樂都8.6%、民和13.8%)陽性檢出率高于西寧地區(qū)(湟中0.8%、湟源0.8%)，同時，2014年的陽性率最高，為14.5%，表明青海省西寧市及周邊地區(qū)部分規(guī)模化豬場仍存在豬偽狂犬病感染的潛在危害，因此在當(dāng)前的疾病感染壓力下，使用優(yōu)質(zhì)的gE基因缺失疫苗強化免疫是控制和凈化偽狂犬病的重要手段，同時要加強生物安全措施、注重后備豬的選擇、加強定期監(jiān)測工作，采取綜合防控才能使我國偽狂犬病的流行態(tài)勢得到根本好轉(zhuǎn)。

豬偽狂犬病(Aujeszky’s disease,AD; Pseudorabies, PR)是由偽狂犬病毒(AD virus, ADV; PR virus, PRV)引起的豬的一種高度接觸性傳染病[1]，其典型癥狀為發(fā)熱和腦脊髓炎。豬是偽狂犬病的傳染源和自然宿主。豬偽狂犬病主要引起母豬繁殖障礙，表現(xiàn)為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎和木乃伊胎等；新生仔豬發(fā)生感染時，主要表現(xiàn)為持續(xù)性腹瀉和神經(jīng)癥狀，死亡率可高達50%~100%；肥育豬多為隱性感染，感染后往往致使其生長緩慢，種公豬感染則導(dǎo)致精液品質(zhì)下降甚至喪失種用價值[2]。各種年齡的豬都易感，但隨年齡不同，癥狀和死亡率也有明顯區(qū)別，但一般不呈現(xiàn)瘙癢癥狀。周緒斌等對我國9個省市規(guī)?；B(yǎng)豬場不同豬群進行了偽狂犬病血清學(xué)監(jiān)測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，75個規(guī)?；i場中約有一半豬場(52%)偽狂犬病野毒抗體陽性，所有血清樣品野毒陽性率為16.9%[3]。邢建民等對青海省西寧市及海東地區(qū)9個縣(市)30個規(guī)模養(yǎng)豬場(戶)776頭份血清進行豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，陽性豬35頭，陽性率為4.51% (35/776)[1]，雖然陽性率不高，但還是反應(yīng)出現(xiàn)階段偽狂犬在中國各省仍呈流行性，其凈化仍然任重道遠。近年來，青海省規(guī)?；B(yǎng)豬場數(shù)量不斷增多，這也給豬疫病防控力度加大了困難，為進一步了解近幾年豬偽狂犬病在青海省規(guī)?；i場的分布和流行情況，為防制豬狂犬病作出合理的評估，給今后對該病的防控工作提供依據(jù)，本研究應(yīng)用ELISA方法對2012~ 2016年青海省西寧市及海東地區(qū)8個市(縣)規(guī)模豬場(戶)的豬血樣進行了豬偽狂犬病的血清學(xué)調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 血清來源 青海省西寧市及海東地區(qū)8個市(縣)規(guī)模豬場(戶)3928頭豬，其中西寧市491頭、大通491頭、湟源491頭、湟中491頭、民和491頭、互助491頭、樂都491頭、平安491頭。

1.2 樣品采集 無菌操作，用5ml一次性注射器從被檢豬耳靜脈采集非抗凝血3ml，采集后成斜面置室溫，待血清析出分離血清，在-20℃冷凍保存待檢。

1.3 診斷試劑 美國愛德士(IDEXX)生產(chǎn)的豬偽狂犬病ELISA抗體檢測診斷試劑盒(批號F451)，包括已包被好抗原的96孔酶聯(lián)反應(yīng)板，標準陰、陽性血清，酶標二抗，TMB底物溶液，終止液，稀釋液，洗滌液等。

1.4 主要儀器 酶聯(lián)免疫檢測儀、恒溫箱、移液器(0.1~ 20μl、20~200μl、50~1000μl)、與移液器匹配的吸頭等。

1.5 檢測方法 豬偽狂犬病酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)：（1）取出抗原包被板，在記錄表上記錄樣品的位置。（2）在A1，A2和A3孔內(nèi)加入100μl兩倍稀釋(1:2)的陰性對照。（3）在A4，A5孔內(nèi)加入100μl兩倍稀釋(1:2)的陽性對照。（4）在其余的孔內(nèi)分別加入100μl已稀釋好的被檢樣品。室溫下孵育1h或2~7℃孵育過夜(可以將微量反應(yīng)板用封條封閉)。（5）用大約300μl洗滌液洗滌板孔，重復(fù)3~5次。每次洗滌時洗滌液都應(yīng)吸出丟棄。在洗板和加入標記物之間應(yīng)避免包被板變干。在最后一次洗滌液吸出后，將板中殘留洗滌液扣拍到吸水材料上。（6）每孔加入100μl辣根過氧化物酶標記抗PRV gpI抗體，室溫下孵育20min。（7）重復(fù)步驟5。（8）每孔加入100μl TMB 底物液，室溫下孵育15min。（9）每孔加入50μl終止液，使反應(yīng)終止。（10）分光光度計調(diào)零，測量并且記錄被檢樣品和對照的A(650)。陰性對照A(650)的平均值減去陽性對照A(650)的平均值必須大于或等于0.3，試驗方能有效。

1.6 結(jié)果判斷 通過計算樣品與陰性對照的比例(S/N)來確定豬偽狂犬病病毒抗體的有無。S/N=樣本A(650)/陰性對照平均值，如果S/N值低于或等于0.60，樣品應(yīng)判定為PRV gpI抗體陽性。如果S/N值大于0.60但小于或等于0.70，樣品應(yīng)重測。如果試驗結(jié)果不變，間隔一定時間后重新采樣、檢測。如果S/N值大于0.70，樣品應(yīng)判定為PRV gpI抗體陰性。

2 結(jié)果

2.1 不同地區(qū)豬偽狂犬病感染抗體情況 2012~2016年，對西寧及海東地區(qū)8個市(縣)共3928份豬血清樣本進行偽狂犬病感染抗體檢測，結(jié)果顯示，3928份血清樣本共檢出陽性血清271份，陽性率為55.2%(表1)。其中，平安、樂都、民和與其它地區(qū)陽性率差異明顯，陽性率分別為19.8%、8.6%和13.8%。

2.2 2012~2016年部分地區(qū)規(guī)模豬場偽狂犬病感染情況 2012~2016年，連續(xù)5年對西寧及海東地區(qū)8個市(縣)規(guī)模豬場進行了偽狂犬病感染抗體監(jiān)測，結(jié)果表明，從2012年到2014年豬偽狂犬病感染陽性率呈逐年上升趨勢，陽性率分別為1.9%、5.8%和14.5%，其中2014年陽性率最高。從2015~2016年豬偽狂犬病感染陽性率又逐漸下降，陽性率分別為8.5%和6.5%(表2)。

表1 青海省部分地區(qū)偽狂犬病感染抗體情況 (頭、%)

表2 2012~2016年豬場偽狂犬病感染情況 (頭、%)

3 討論

（1）偽狂犬病病毒為皰疹病毒，而皰疹病毒的最大特性是可以在機體內(nèi)形成潛伏感染(1atent infectioI1)，從而長期存在于畜群中。當(dāng)存在應(yīng)激等因素時，病毒可由潛伏感染變?yōu)榛钚愿腥?，?dǎo)致潛伏感染的帶毒動物發(fā)病，并將病毒傳播給其他易感動物，因此防止?jié)摲腥疽渤蔀榭刂苽慰袢〉碾y點和關(guān)鍵環(huán)節(jié)[4]。本次對西寧及周邊8個地區(qū)規(guī)模豬場3928份豬血清進行了偽狂犬感染抗體檢測，共檢出陽性血清271份，陽性率為55.2%，其中，平安、樂都、民和與其它地區(qū)陽性率差異明顯，陽性率分別為19.8%、8.6%和13.8%。湟中、湟源陽性率最低，陽性率都是0.8%。海東地區(qū)(平安、樂都、民和)相比西寧地區(qū)(湟中、湟源)生豬的養(yǎng)殖量大，中小規(guī)模的養(yǎng)殖場也多，但是這些養(yǎng)殖場飼養(yǎng)管理混亂、缺少專業(yè)人員、免疫程序不完善，防病意識薄弱，消毒、滅鼠工作流于形式，疫病監(jiān)測、診斷的技術(shù)手段滯后，防疫工作顧此失彼，從而導(dǎo)致陽性率高。（2）從2012~2016年的5年間的監(jiān)測數(shù)據(jù)可以看出，2014年偽狂犬病感染抗體陽性率最高，為14.5%。2014年之前，大多數(shù)規(guī)模養(yǎng)殖場不注重疫病的檢測，沒有健全的豬偽狂犬病免疫計劃，飼養(yǎng)不規(guī)范，飼養(yǎng)密度比較大豬交易比較頻繁，也沒有凈化意識，而從2015年的監(jiān)測數(shù)據(jù)我們看出，偽狂犬病感染抗體陽性率開始下降，說明規(guī)?；i場意識到偽狂犬病帶來的危害，加強了豬場的飼養(yǎng)管理，這也與近兩年青海省開展規(guī)模豬場豬偽狂犬病疫病凈化的工作是分不開的。（3）通過對本次調(diào)查結(jié)果的分析，建議對青海省規(guī)模養(yǎng)豬場采取以下防治措施：加強飼養(yǎng)管理和生物安全操作。實行嚴格的清洗消毒措施，限制場內(nèi)豬群流動，限制場內(nèi)外人員進出并執(zhí)行嚴格的人員、物品消毒措施；根據(jù)豬場的具體情況因地制宜，制定出合理的免疫計劃；對有條件的豬場要求開展豬偽狂犬病凈化，全場進行豬偽狂犬病基因缺失疫苗(gE基因缺失)免疫；及時開展病原學(xué)檢測，淘汰確診病例，鼓勵有條件的養(yǎng)殖場直接淘汰臨床疑似種豬。

[1] 邢建民, 王謝忠, 傅義娟. 規(guī)模化豬場偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國畜牧獸醫(yī), 2009, 12(36).

[2] 王建, 周慶雨, 陸春權(quán)等. 蘇北、魯南5市豬偽狂犬病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 養(yǎng)豬, 2013: 2.

[3] 周緒斌, Danniel Torrents Gil, 葉陽. 近期中國規(guī)?；i場偽狂犬病野毒血清學(xué)及流行病學(xué)調(diào)查與分析[J]. 吉林畜牧獸醫(yī). 2007, 8(28).

[4] Cheung A K. Investigation of pseudorabies virus DNA and RNA in trigeminal ganglia an d tonsil tissues of latently infected swine[J]. Am J Vet Res, 1995, 56(1): 45-50.

（2017–07–14）

S858.292

A

1007-1733(2017)11-0074-02