異葉茴芹提取物抗炎止血凝血作用的實(shí)驗(yàn)研究

王張英+王志新

摘要：目的研究異葉茴芹提取物抗炎、止血、凝血作用功效，為異葉茴芹的潛在藥用價(jià)值開發(fā)利用提供依據(jù)。方法選取健康小鼠，采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹，測定異葉茴芹醇提液和水提液的抗炎作用效果；采用小鼠斷尾法止血實(shí)驗(yàn)、小鼠載玻片法凝血實(shí)驗(yàn)評價(jià)異葉茴芹醇提液和水提液的止血和凝血作用效果。結(jié)果異葉茴芹提取物灌胃能減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹程度，水提液組其足腫脹抑制率達(dá)24.51%，縮短剪尾法所致小鼠出血時(shí)間，水提液組其縮短率為33.41%，加速實(shí)驗(yàn)小鼠的凝血時(shí)間，醇提液組其縮短率達(dá)47.59%。結(jié)論異葉茴芹提取物具有一定程度的抗炎、止血、凝血活性，具有綜合利用前景。

關(guān)鍵詞：異葉茴芹；抗炎；止血；凝血

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2017）11-0075-03

【Abstract】Objective： To study the anti-inflammatory， hemostatic and coagulation effects of extracts from Pimpinella diversifolia and to provide the basis for the development and utilization of its potential medicinal value. Methods： The healthy mice were selected to induce their ear swelling by xylene to determine the anti-inflammatory effect of ethanol extract and aqueous extract of Pimpinella diversifolia. The tail-cut hemostasis experiment and slide glass coagulation experiment were used to evaluate the effect of hemostatic and coagulation effects of ethanol extract and aqueous extract of Pimpinella diversifolia. Results： The intragastric administration of Pimpinella diversifolia extracts could reduce the degree of auricle swelling in xylene-induced mice. The inhibition rate of foot swelling in the aqueous extract group was 24.51%. The tail-cut hemostasis shortened the bleeding time of the mice， and the shortened rate of the aqueous extract group was 33.41% and the coagulation time of the mice was accelerated. The shortened rate of alcohol extract was 47.59%. Conclusion： The extracts of Pimpinella diversifolia has certain anti-inflammatory， hemostatic and coagulation activity and has comprehensive utilization prospect.

【Key words】Pimpinella diversifolia， anti-inflammatory， hemostasis， blood coagulation

異葉茴芹（Pimpinella diversifolia DC.）為傘形科茴芹屬植物，別名為八月白、苦爹菜、山當(dāng)歸、鵝腳板、蛇倒退。野生植物資源豐富，是民間常用草藥和野菜之一。以全草入藥，具有溫中散寒、宣肺祛痰、活血止痛、解毒消腫等作用[1-6]。茴芹屬植物中主要含有揮發(fā)油及萜類化合物、香豆素類化合物、黃酮類化合物、甾醇類化合物和脂肪酸類化合物等[7]，這些化合物的存在，可以對異葉茴芹的藥用功效給出合理的解釋。異葉茴芹雖在民間用藥中歷史已久，但是其藥用價(jià)值的挖掘工作還很有限，其植物提取物的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)至今還鮮有報(bào)道。筆者針對異葉茴芹提取物抗炎、止血、凝血作用功效展開了研究，可為異葉茴芹藥用價(jià)值的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和參考。

1材料和方法

1.1儀器和材料TDL-40B普通離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），RE-6000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），F(xiàn)A204B電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司），DHG-9040A電熱恒溫鼓風(fēng)干箱（寧波江南儀器廠）。

材料和試劑：異葉茴芹購自福建壽寧，除雜，放置于60℃的烘箱烘干，粉碎，過60目篩，得到異葉茴芹粉末，置干燥通風(fēng)處保存。清潔級昆明小鼠，雌雄各半，27±3 g，由南華大學(xué)動(dòng)物養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)基地提供。

95%乙醇（天津市北聯(lián)精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司）、二甲苯（天津市大茂化學(xué)試劑廠）均為分析純；無菌生理鹽水；無菌水。

1.2方法

1.2.1異葉茴芹水提液和醇提液的制備稱取異葉茴芹樣品10 g置燒杯中，加蒸餾水200 mL浸泡2 h后，煮沸30 min，過濾，離心得上清液，加熱濃縮至10 mL（濃度為1 g/mL）。水提液高壓滅菌（120°C，15 min）后放入4℃冰箱密封保存?zhèn)溆谩?/p>

稱取異葉茴芹樣品10 g置燒杯中，加入75%乙醇200 mL浸泡48 h，經(jīng)離心過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至10 mL（濃縮液已不含乙醇，濃度為1 g/mL）。醇提液經(jīng)微孔濾膜（0.22 μm）除菌后放入4℃冰箱密封保存，備用。endprint

1.2.2小鼠分組與飼喂將昆明小鼠常規(guī)飼養(yǎng)3天，然后選取健康昆明小白鼠，隨機(jī)分為6組，每10只一組。標(biāo)記異葉茴芹醇提物組（雄鼠）、異葉茴芹醇提物組（雌鼠）、異葉茴芹水提物組（雄鼠）、異葉茴芹水提物組（雌鼠）、生理鹽水對照組（雄鼠）、生理鹽水對照組（雌鼠），各組間小鼠體重均無顯著性差異，飼養(yǎng)于25～28℃，相對濕度55～65%的清潔環(huán)境中，自由攝食和飲水，使用標(biāo)準(zhǔn)飼料。

1.2.3抗炎實(shí)驗(yàn)采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹[8-11]。實(shí)驗(yàn)前禁食給水6 h后，按照灌胃劑量為每只小鼠0.2 mL/次，連續(xù)6天。每只小鼠于末次給藥后1 h分別行人工致炎，方法采用行右耳廓正反面均勻涂抹一定量的二甲苯，同時(shí)留取左耳不涂為正常對照，小鼠右耳廓致炎腫脹后1 h，采取斷頸椎的方法處死小鼠，沿耳廓基線對稱剪下小鼠兩耳，使用6 mm打孔器于兩耳同一部位切下、用精密電子分析天平稱重，求其兩耳質(zhì)量差值，計(jì)算炎癥腫脹程度，并根據(jù)公式統(tǒng)計(jì)腫脹抑制率。腫脹率（%）=[右耳片重（mg）-左耳片重（mg）]/左耳片重（mg）×100%，腫脹抑制率（%）=生理鹽水組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/生理鹽水組平均腫脹度×100%。

1.2.4止血實(shí)驗(yàn)采用剪尾法[12-15]。實(shí)驗(yàn)前禁食給水6 h后，按照灌胃劑量為每只小鼠0.2 mL/次，連續(xù)6天。末次給藥后45 min，將小鼠固定于固鼠皿中，用手術(shù)剪將小鼠距尾尖1 cm處剪斷，待血液自行溢出開始計(jì)時(shí)，每隔20 s用濾紙吸去血滴1次，直至出血自然停止（濾紙吸時(shí)無血為止），即為出血時(shí)間。以人工創(chuàng)面形成到出血停止所經(jīng)時(shí)間作為出血時(shí)間。

1.2.5凝血實(shí)驗(yàn)采用玻片法[16-18]。實(shí)驗(yàn)前禁食給水6 h后，按照灌胃劑量為每只小鼠0.2 mL/次，連續(xù)6天。末次給藥后1 h，將小鼠固定于固鼠皿中，將小鼠剪尾采血，滴于載玻片，血滴直徑約5 mm，立即用秒表計(jì)時(shí)，每隔30 s用清潔的7號(hào)注射針頭自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)1次，并觀察有無血絲挑起。從采血開始至挑起血絲止，所歷時(shí)間即為凝血時(shí)間，記錄凝血時(shí)間。

1.2.6數(shù)據(jù)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用（x±s）表示，采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析（One-way ANOVA）。P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。

2結(jié)果

2.1抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，異葉茴芹醇提物組和異葉茴芹水提物對二甲苯所致小鼠的耳廓腫脹度均具有極為明顯的影響作用（P<0.01）。說明異葉茴芹提取物含有抗炎活性成分，能降低二甲苯致小鼠耳廓腫脹的程度。異葉茴芹水提取液組的腫脹抑制率比醇提取液組的腫脹抑制率高，說明異葉茴芹的水提取液比醇提取液具有更好的抗炎效果。異葉茴芹的醇提取液組與水提取液組作用效果差別不顯著（P>0.05）。見表1。

2.2止血實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，異葉茴芹水提物和醇提物均具有極明顯的止血效果（P<0.01），且異葉茴芹水提取液組對小鼠出血時(shí)間的縮短率（33.41%）比乙醇提取液組（21.32%）大，但異葉茴芹水提取液組對小鼠的出血時(shí)間的作用與醇提取液組比較并沒有顯著性差異（P>0.05）。見表2。

2.3凝血實(shí)驗(yàn)結(jié)果由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得出，異葉茴芹醇提取液和水提取液均能明顯縮短凝血時(shí)間，與空白對照組相比，具有極顯著差異（P<0.01）。此外，異葉茴芹醇提取液組對小鼠的凝血作用時(shí)間縮短率（47.59%）比水提取液組（35.05%）大。但異葉茴芹的醇提取液組對小鼠的凝血作用與水提取液組比較，兩者無顯著性差異（P>0.05）。見表3。

3討論

異葉茴芹是民間常用藥，具有理氣止痛、解毒消腫、止血抗菌等作用，但是有關(guān)異葉茴芹提取物的藥效學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究較少。二甲苯引起的神經(jīng)源性腫脹可作為常見的炎癥模型來評價(jià)炎癥的嚴(yán)重程度，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，異葉茴芹醇提取物和水提取物均能極為明顯地減輕二甲苯致小鼠耳廓腫脹程度，異葉茴芹的醇提取物組和水提取物組的腫脹抑制率分別為15.83%和24.51%，說明異葉茴芹在一定程度上對組織腫脹具有抑制作用，具有抗炎藥理作用。此外，異葉茴芹提取物能明顯縮短實(shí)驗(yàn)小鼠斷尾后的出血時(shí)間以及玻片法實(shí)驗(yàn)中凝血時(shí)間，說明異葉茴芹具有一定的止血和凝血作用。本實(shí)驗(yàn)為今后進(jìn)一步研究異葉茴芹抗炎、止血、凝血活性的中藥有效成分和臨床應(yīng)用提供參考，也為開發(fā)利用異葉茴芹中草藥材資源提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，但關(guān)于異葉茴芹提物抗炎、止血、凝血的作用機(jī)制有待深入研究。

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