人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子URAT1基因rs893006多態(tài)性與男性高尿酸血癥的相關(guān)性

陸娜，修浩，崔開眉，桑圣剛，余平

(1.中南大學基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學系，湖南 長沙 410013；2.海南醫(yī)學院熱帶醫(yī)學與檢驗醫(yī)學院，海南 海口 571199)

人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子URAT1基因rs893006多態(tài)性與男性高尿酸血癥的相關(guān)性

陸娜1，修浩2，崔開眉2，桑圣剛2，余平1

(1.中南大學基礎(chǔ)醫(yī)學院免疫學系，湖南 長沙 410013；2.海南醫(yī)學院熱帶醫(yī)學與檢驗醫(yī)學院，海南 海口 571199)

目的 探討海南漢族男性高尿酸血癥與人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子URAT1基因rs893006多態(tài)性的相關(guān)性，并分析高尿酸血癥的影響因素。方法 將海南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院2016年4月至2017年4月收治的100例高尿酸血癥男性患者作為高尿酸血癥組，另選取同期在我院體檢的100例健康男性作為對照組，比較兩組受檢者的一般資料和生化指標水平，以及rs893006的等位基因和基因型分布情況、不同基因型個體的血尿酸水平及分析高尿酸血癥的影響因素。結(jié)果 高尿酸血癥組與對照組收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、尿素氮(BUN)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，體質(zhì)指數(shù)(BMI)、肌酐(Crea)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；高尿酸血癥組患者的rs893006的GG型、GT型、TT型頻率分別為53.0%、40.0%、7.0%，對照組分別為55.0%、35.0%、10.0%，兩組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；兩組TT型個體的尿酸水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，GG型、GT型個體的尿酸水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；Logistic回歸分析結(jié)果顯示，BMI、Crea、TG、LDL可能為高尿酸血癥的影響因素(P＜0.05)。結(jié)論 海南漢族男性高尿酸血癥與URAT1基因rs893006多態(tài)性顯著相關(guān)，BMI、TG、Crea、LDL可能為高尿酸血癥的影響因素。

男性；高尿酸血癥；URAT1基因多態(tài)性；rs893006；相關(guān)性

近年來，大量流行病學調(diào)查結(jié)果均顯示，高尿酸血癥和痛風的患病率日益提升，同時，高血壓、糖尿病等均與血尿酸水平升高具有極為密切的關(guān)系，高尿酸血癥和痛風已經(jīng)對人類健康造成了嚴重威脅[1-3]。本研究對我院近年來收治的高尿酸血癥男性患者的臨床資料進行了回顧性分析，探討海南漢族男性高尿酸血癥與人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子URAT1基因rs893006多態(tài)性的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取海南醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院2016年4月至2017年4月收治的100例高尿酸血癥男性患者作為高尿酸血癥組。納入標準：所有患者均符合美國風濕病學會制定的高尿酸血癥的診斷標準[4]。排除標準：血肌酐大于130 μmol/L者；肝腎功能不全、血液疾病、甲亢、惡性腫瘤和各種放化療者；白血病、甲低及尿崩癥等尿酸值繼發(fā)性升高者；近期服用影響尿酸水平藥物者，如服用呋塞米、吡嗪酰胺和乙胺丁醇等；痛風患者。另選取同期在我院體檢的100例健康男性作為對照組。

1.2 方法

1.2.1 標本采集和測定 收集體格測量指標包括身高、體質(zhì)量、血壓；采集兩組受檢者的空腹靜脈血，應(yīng)用西門子ADVIA 2400生化分析儀檢測其尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、血尿酸(SUA)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)水平。男性高尿酸血癥的診斷標準為血清尿酸水平在420 μmol/L以上。

1.2.2 外周血基因組DNA提取 收集各樣本EDTA抗凝血2 mL，使用Ezup柱式血液基因組DNA抽取試劑盒，按照說明書提取DNA，使用紫外分光光度計檢測濃度，選取OD260/280值在1.6～1.8范圍的樣本。

1.2.3 引物設(shè)計與合成 根據(jù)文獻報道rs893006位點引物[5-6]，由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成引物合成。序列具體見表1。

表1 PCR反應(yīng)引物及非標記探針序列

1.2.4 不對稱PCR擴增及高分辨率溶解分析 不對稱PCR擴增在Piko Real 96 Real-time PCR儀(美國Thermo公司)進行。采用Precision melt supermix試劑盒(日本Bio-rad公司)，總體積為10 μL，反應(yīng)體系：3.9 μL ddH2O，2×Precision melt supermix 5 μL 、0.5 μL DNA樣本(10 ng)、上游引物(1 μmol/L)0.2 μL，下游引物(10 μmol/L)0.2 μL，非標記探針(10 μmol/L)0.2 μL，擴增反應(yīng)條件為95℃預(yù)變性2 min，95℃ 30s，58℃30s、72℃ 30s，60個循環(huán)，72℃延伸5 min，最后在55℃～75℃下進行高分辨率熔解分析。

1.2.5 測序分析 采用普通PCR方法分別隨機選取GG，GT及TT基因型DNA樣本各5例進行PCR擴增，并將PCR產(chǎn)物送去測序分析。反應(yīng)體系如下：2×Taq Mastermix 10 μL，上游引物（10 μmol/L）1 μL，下游引物(10 μmol/L)1 μL，DNA樣本(30 ng/μL)2 μL，ddH2O 6μL。 擴增反應(yīng)程序如下：95℃ 2 min；95℃30s，58℃ 30s、72℃ 30s，30個循環(huán)，72℃延伸10 min，16℃ 10 min。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料呈正態(tài)分布，以均數(shù)±標準差((±s))表示，組間比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，采用Logistic回歸分析高尿酸血癥的影響因素，均以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組受檢者的一般資料和生化指標比較 高尿酸血癥組患者的年齡22～79歲，平均(53.3±8.4)歲。對照組受檢者年齡23～79歲，平均(54.1±8.3)歲。兩組受檢者的年齡、SBP、DBP、BUN、HDL比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但在BMI、Crea、TC、TG、LDL方面，兩組受檢者比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 高尿酸血癥組與對照組的一般資料比較(±s)

表2 高尿酸血癥組與對照組的一般資料比較(±s)

指標 高尿酸血癥組(n=100)對照組(n=100)t值P值BMI(kg/m2)SBP(mmHg)DBP(mmHg)BUN(mmol/L)Crea(μmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)22.3±1.8 121.10±15.00 79.40±10.12 4.91±1.23 92.86±13.35 5.14±1.06 1.72±1.15 1.39±0.32 2.99±0.83 23.2±1.6 118.05±14.95 78.45±10.05 4.70±1.11 81.65±16.11 4.30±1.22 0.91±0.36 1.41±0.18 2.37±0.47 4.91 1.638 1.533 1.19 5.249 5.09 6.59-0.51 6.26＜0.05 0.51 0.53 0.72＜0.05 0.049＜0.05 0.612＜0.001

2.2 兩組受檢者的rs893006的等位基因和基因型分布比較 兩組受檢者的rs893006的GG型、GT型、TT型頻率比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表3。

表3 兩組受檢者的rs893006的等位基因和基因型分布比較[例(%)]

2.3 兩組受檢者不同基因型個體的血尿酸水平比較 兩組受檢者的TT型個體的尿酸水平比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，而GG型、GT型個體的尿酸水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。高尿酸血癥組患者的GG型、GT型個體的尿酸水平均明顯高于TT型，而GG型個體的尿酸水平又明顯高于GT型，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；對照組受檢者的GG型、GT型、TT型個體的尿酸水平比較差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表4。

表4 兩組受檢者中不同基因型血尿酸水平比較(±s，μmol/L)

表4 兩組受檢者中不同基因型血尿酸水平比較(±s，μmol/L)

注：與GT型比較，aP＜0.05；與TT型比較，bP＜0.05。

組別 例數(shù)GG型GT型TT型高尿酸血癥組對照組t值P值100 100 471.47±49.64ab 339.55±54.76 13.17 0.4 488.74±68.18b 303.08±65.40 11.282 0.904 385.27±24.00a 296.33±51.83 4.899 0.017

2.4 高尿酸血癥相關(guān)影響因素 以是否患高尿酸血癥(1=患?。?=不患病)為因變量，分別將基因型(啞變量形式)、BMI、SBP、DBP、Crea、BUN、TG、TC、HDL、LDL引入模型，采用Logistic回歸分析，變量賦值見表。結(jié)果顯示：BMI、Crea、TG、LDL(P＜0.05)，進入模型，見表5。

表5 高尿酸血癥危險因素分析

3 討論

相關(guān)醫(yī)學研究證實，在原發(fā)性高尿酸血癥和高尿酸血癥的發(fā)生中，遺傳因素發(fā)揮著極為重要的作用[5-7]。近年來，相關(guān)醫(yī)學研究結(jié)果表明，血清尿酸水平升高及高尿酸血癥和人尿酸鹽轉(zhuǎn)運子1(URAT1)的基因多態(tài)性具有相關(guān)性。URAT1基因在11q13上分布，有外顯子10個、堿基2 642個，由位于第11號染色體短臂上的SLC22A12基因編碼，SLC22A12基因序列的突變會使腎臟對尿酸重新收減少，URAT1功能會在其基因突變的情況下發(fā)生缺陷，進而會促進腎性無癥狀性低尿酸血癥的發(fā)生[8]。Enomoto，Ichida等研究表明，編碼hURAT1的SLC22A12基因SNP位點多態(tài)性可導致其轉(zhuǎn)運尿酸的功能異常，尿酸排泄減少，從而引起高尿酸血癥[9]。近年來，相關(guān)醫(yī)學學者發(fā)現(xiàn)，血清尿酸水平與URAT1突變譜及SNP位點具有相關(guān)性[10-12]。因此，將一種對URAT1突變進行快速檢測的方法建立起來極為必要和重要。

rs893006SNP位點是SLC22A12基因上的第4號內(nèi)含子，相關(guān)研究顯示rs893006GG基因型，錯義突變C426T，C258T以及-788T＞A，都可能與血尿酸水平升高有關(guān)[13]。Guan等[14]研究表明rs893006位點的多態(tài)性可能是中國男性高尿酸血癥患者的風險基因。

本研究重點探討rs893006位點與海南漢族男性高尿酸血癥的相關(guān)性。結(jié)果表明，高尿酸血癥患者rs893006位點的GG型、TT型、GT型頻率差異無統(tǒng)計學意義，此結(jié)果與相關(guān)文獻[15]結(jié)果不同，可能是由于基因易感性存在地區(qū)、種族、民族差異所致，或者是由于樣本量的差異所致。

高尿酸血癥組的體質(zhì)指數(shù)BMI、肌酐、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的指標均值都高于對照組，并且差異有統(tǒng)計學意義。多因素條件Logistic分析顯示，體質(zhì)指數(shù)BMI、肌酐、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇是高尿酸的影響因素。體重超標多有內(nèi)分泌功能紊亂、雄激素和促腎上腺皮質(zhì)激素水平低下或酮酸生成增加，可抑制尿酸排泄，日常攝入高蛋白、高嘌呤食物過多，嘌呤生成增多，可導致血尿酸生成增加。高尿酸血癥的患者常伴有血脂異常[16]，載脂蛋白E2可介導腎臟對尿酸的分泌減少，甘油三酯是高尿酸血癥的危險因素。肌酐是監(jiān)測腎臟功能的指標，因此血肌酐是高尿酸血癥的危險因素。

綜上所述，海南漢族男性高尿酸血癥和URAT1基因多態(tài)性顯著相關(guān)，值得臨床充分重視。

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Correlation between URAT1 gene rs893006 polymorphism and hyperuricemia in men.

LU Na1,XIU Hao2,CUI Kai-mei2,SANG Sheng-gang2,YU Ping1.1.Department of Immunology,School of Basic Medical Sciences,Central South University,Changsha 410013,Hunan,CHINA;2.School of Tropical Medicine and Laboratory Medicine,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

Objective To analyze the correlation between hyperuricemia of male Han People in Hainan and human urate transporterURAT1gene rs893006 polymorphism,and analyze the influential factors of hyperuricemia.Methods The clinical data of 100 male patients with hyperuricemia in First Affiliated Hospital of Hainan Midical University from April 2016 to April 2017 were statistically analyzed.These patients were regarded as hyperuricemia group,another 100 healthy men

physical examination in the hospital during the same period were selected as control group.The individual general data,biochemical indexes levels,rs893006 allele and genotype distributions,blood uric acid levels of different genotype were compared between the two groups.The influential factors were statistically analyzed.Results There were no statistical differences in systolic blood pressure(SBP),diastolic blood pressure(DBP),blood urea nitrogen(BUN)and high-density lipoprotein cholesterol(HDL)between the control group and the hyperuricemia group(P＞0.05),while body mass index(BMI),creatinine(Crea),total cholesterol(TC),triglyceride(TG)and low-density lipoprotein cholesterol(LDL)were significantly different between the two groups(P＜0.05).The frequency of rs893006 GG type,GT type,TT type were 53.0%(53/100),40.0%(40/100),7.0%(7/100)in hyperuricemia group versus 55.0%(55/100),35.0%(35/100),10.0%(10/100)in the control group(P＞0.05).The uric acid level of GG type,GT type individual showed no significant difference between the two groups(P＞0.05),but the difference in the level of TT type individual were statistically significant(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that BMI,Crea,TG,LDL may be influential factors of hyperuricemia(P＜0.05).Conclusion Hyperuricemia of male Han People in Hainan is associated withURAT1gene rs893006 polymorphism.The influential factors of hyperuricemia may include BMI,TG,Crea,LDL.

Men;Hyperuricemia;URAT1 gene polymorphism;rs893006;Correlation

R589.6

A

1003—6350（2017）21—3460—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.21.007

余平。E-mail：yuping1953@sina.com

2017-09-06)