枳術(shù)粉對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能和腸道微生態(tài)及免疫功能的影響

李 強(qiáng),肖 娜,楊 超，劉小寶,趙興華,劉聚祥,何 欣*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河北保定 071000；2.河北定州市動(dòng)物防疫監(jiān)督總站，河北定州 073000;3.保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河北保定 071000)

枳術(shù)粉對(duì)雛雞生長(zhǎng)性能和腸道微生態(tài)及免疫功能的影響

李 強(qiáng)1,肖 娜2,楊 超2，劉小寶3,趙興華1,劉聚祥1,何 欣1*

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河北保定 071000；2.河北定州市動(dòng)物防疫監(jiān)督總站，河北定州 073000;3.保定職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河北保定 071000)

為了研究傳統(tǒng)方劑枳術(shù)粉[枳實(shí)(炒)∶白術(shù)(炒) 1∶2，ZHF]對(duì)蛋雛雞生長(zhǎng)性能、免疫功能和腸道微生態(tài)的影響，選擇海塞克蛋雛雞180只，隨機(jī)分為3組，即對(duì)照組(CON)和枳術(shù)粉添加組(10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF)，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只，試驗(yàn)期42 d。結(jié)果顯示，在生長(zhǎng)性能上，21 d～42 d，10 g/kg ZHF和20 g/kg ZHF組平均日增質(zhì)量顯著高于CON組(P<0.05)，料重比分別比CON組降低了1.6%和4.1%(P<0.05)。添加ZHF組的腸道大腸埃希菌數(shù)量減少而雙歧桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加(P<0.05)，在免疫指標(biāo)上，血清IFN-γ和IL-2的含量顯著高于CON組(P<0.05)，NDV抗體效價(jià)提高(P<0.05)。結(jié)果表明，枳術(shù)粉可顯著提高蛋雛雞的生長(zhǎng)性能,優(yōu)化腸道微生態(tài)結(jié)構(gòu)，提高免疫性能。

枳實(shí)；白術(shù)；生長(zhǎng)性能；免疫；雛雞

枳術(shù)粉(Zhizhu fomulation,ZHF)，源于張?jiān)貏?chuàng)制的脾胃病代表方劑——枳術(shù)丸，枳實(shí)(炒)和白術(shù)(炒)的比例為1∶2，該方具有治痞、消食、強(qiáng)胃之功效，按照該比例粉碎中藥制得枳術(shù)粉?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，枳術(shù)丸可促進(jìn)正常小鼠胃排空和腸推進(jìn)速度，改善脾虛便秘模型小鼠的消化功能紊亂，并顯著增強(qiáng)食欲，提高胃動(dòng)力[1-2]。另外有研究顯示，枳術(shù)丸(粉)重用白術(shù)，具有增強(qiáng)機(jī)體免疫的作用[3]。中藥作為新型的飼料添加劑資源，可有效替代抗菌藥物，減少因?yàn)E用抗菌藥物引發(fā)的畜禽耐藥性及藥物殘留問(wèn)題。但是，目前尚未見(jiàn)到枳術(shù)丸(粉)應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖當(dāng)中的報(bào)道，本試驗(yàn)旨在研究枳術(shù)粉對(duì)蛋雛雞生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響，為其在家禽生產(chǎn)上的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和試驗(yàn)設(shè)計(jì) 按照單因素隨機(jī)分組方式，選取180只1日齡健康海塞克蛋雛雞，隨機(jī)分為3組，每組3個(gè)重復(fù)，每重復(fù)20只。Ⅰ組為對(duì)照組(control group，CON)，飼喂基礎(chǔ)日糧，Ⅱ、Ⅲ組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加10 g/kg、20 g/kg的枳術(shù)粉(10 g/kg ZHF、20 g/kgZHF)，所有雞只自由采食和飲水，基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1[4]。

試驗(yàn)雞采用籠養(yǎng)，24 h光照，自由采食及飲水，通風(fēng)采用排氣扇換氣，常規(guī)免疫程序免疫。

1.1.2 試驗(yàn)用藥 枳實(shí)(炒)和白術(shù)(炒)購(gòu)于安國(guó)藥材市場(chǎng)，按照1∶2的比例粉碎，過(guò)40目篩，備用。

1.2 方法

1.2.1 盲腸內(nèi)容物大腸埃希菌、雙歧桿菌和乳酸桿菌的檢測(cè) 參照文獻(xiàn)[5]，于21 d和42 d隨機(jī)在各重復(fù)中取3只試驗(yàn)雞處死，在無(wú)菌實(shí)驗(yàn)臺(tái)內(nèi)無(wú)菌采集其盲腸內(nèi)容物0.5 g，置于盛有9 mL稀釋液的試管中，渦旋混勻30 s，取適當(dāng)稀釋濃度的稀釋液接入3種培養(yǎng)基中，每個(gè)稀釋度每種培養(yǎng)基各做3個(gè)重復(fù)，大腸埃希菌采用麥康凱培養(yǎng)基有氧培養(yǎng)24 h，雙歧桿菌和乳酸桿菌分別采用BBL、LBS培養(yǎng)基在厭氧條件下培養(yǎng)48 h，37℃恒溫培養(yǎng)，進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)。

1.2.2 生長(zhǎng)性能的測(cè)定 以重量為單位，于試驗(yàn)開(kāi)始、第21天和第42天的清晨稱空腹雞只的體質(zhì)量，每周記錄給料量和料槽中的剩余飼料質(zhì)量，用于計(jì)算飼料轉(zhuǎn)化率(料重比)。

料重比=采食量/體增質(zhì)量

1.2.3 免疫指標(biāo)的測(cè)定 于21、28、35、42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取5只，翅下靜脈采血，分離血清，并進(jìn)行倍比稀釋，采用V型血凝板檢測(cè)血清中的NDV血凝抑制抗體效價(jià)。

于21日齡和42日齡時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取5只雞，翅下靜脈采血，分離血清，血清中IFN-γ和IL-2的含量測(cè)定按照 ELISA試劑盒操作進(jìn)行。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel處理，采用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用Duncan法進(jìn)行數(shù)據(jù)間的多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 ZHF對(duì)蛋雛雞生長(zhǎng)性能的影響

在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，給藥組的體增重都顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，但是高劑量組和低劑量組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。7 d～21 d，試驗(yàn)組和陰性對(duì)照組的飼料轉(zhuǎn)化率之間無(wú)顯著差異(P>0.05)，但是在21 d～42 d，給藥組的飼料轉(zhuǎn)化率顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)，但是高低劑量組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)(表2)。

2.2 ZHF對(duì)盲腸內(nèi)容物微生物數(shù)量的影響

結(jié)果顯示，在整個(gè)試驗(yàn)期間，ZHF組的盲腸內(nèi)大腸埃希菌的數(shù)量顯著低于陰性對(duì)照組(P<0.05)，但是兩個(gè)ZHF組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。在21 d之后，添加藥物組的乳酸桿菌的數(shù)量顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，但是高低劑量的藥物組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)。而高劑量ZHF組的雙歧桿菌的數(shù)量在21 d時(shí)顯著高于其他兩個(gè)組(P<0.05)，但是在42 d時(shí)3個(gè)組之間無(wú)顯著差異(P>0.05)(表3)。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Ingredients and nutritional composition of the basal pretreatment and treatment diets

注：每千克復(fù)合預(yù)混料含：維生素A 1 420 IU，維生素D2190 IU，維生素E 9.5 IU, 維生素K 0.38 mg，維生素B11.0 mg， 維生素B23.4 mg，維生素B62.8 mg，維生素B120.009 mg，生物素0.14 mg，葉酸0.52 mg，泛酸9.4 mg，煙酸26 mg，膽堿1 225 mg，鐵75.0 mg，錳56.0 mg，鋅38.0 mg，銅5.0 mg，碘0.35 mg，硒0.14 mg。
Note：Premix provided per kilogram of diet：Vitamin A,1 420 IU;Vitamin D2,190 IU;Vitamin E,9.5 IU;Vitamin K, 0.38 mg;Vitamin B1,1.0 mg;Vitamin B2, 3.4 mg;Vitamin B6, 2.8 mg;Vitamin B12,0.009 mg;Biotin,0.14 mg;Folic acid,0.52 mg;Pantothenic acid,9.4 mg;Niacin,26.0 mg;Choline (as choline chloride),1 225 mg;Iron(FeSO4·H2O),75.0 mg;Manganese(MnSO4·7H2O),56.0 mg;Zinc(ZnSO4·7H2O),38.0 mg;Copper(CuSO4·5H2O), 5.0 mg;Iodine(KI), 0.35 mg;Selenium(Na2SeO3),0.14 mg.

表2 ZHF對(duì)蛋雛雞生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of ZHF on growth performance of chicks

注：角標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

2.3 ZHF對(duì)雛雞免疫性能的影響

2.3.1 ZHF對(duì)血清NDV抗體效價(jià)的影響 在21 d 時(shí)，3個(gè)試驗(yàn)組的抗體效價(jià)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但是在試驗(yàn)進(jìn)行至28 d之后，ZHF處理組的NDV抗體效價(jià)顯著提高，在35 d時(shí)，高劑量的ZHF組的NDV抗體效價(jià)顯著高于其他兩組(P<0.05)，在42 d時(shí)，兩個(gè)ZHF組之間的NDV抗體效價(jià)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但卻都顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)。在28 d和35 d的時(shí)候，20 g/kg ZHF組的ND抗體效價(jià)顯著高于10 g/kg劑量組和陰性對(duì)照組(P<0.05)(表4)。

2.3.2 ZHF對(duì)血清中IL-2 和IFN-γ含量的影響 由結(jié)果可知，在試驗(yàn)的兩個(gè)采樣時(shí)間，10 g/kg ZHF組和20 g/kg ZHF組的IL-2含量均顯著高于陰性對(duì)照組(P<0.05)，但是僅在42 d時(shí)高劑量組顯著高于低劑量組(P<0.05)，而在21 d時(shí)2個(gè)組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。血清中IFN-γ的含量在21 d時(shí)3個(gè)組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但是到了42 d時(shí)，20 g/kg ZHF組的IFN-γ含量顯著高于10 g/kg ZHF組和陰性對(duì)照組(P<0.05)(表5)。

表3 ZHF對(duì)蛋雛雞盲腸內(nèi)容物微生物數(shù)量的影響Table 3 Effects of ZHF on cecal microbial population of chicks lg(CFU·g-1)

注：角標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同寫字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表4 ZHF對(duì)蛋雛雞血清新城疫病毒抗體效價(jià)的影響Table 4 Effects of ZHF on NDV HI Ab titers of chicks

注：角標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：The same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different letters mean significant difference(P<0.05).

表5 ZHF對(duì)蛋雛雞血清IL-2 和IFN-γ含量的影響Table 5 Effect of ZHF on seral IL-2 and IFN-γ contents of chicks ng/L

注：角標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P>0.05)；不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。
Note：Values with same letters indicate no significant difference in the same column(P>0.05),and with different small letters mean significant difference(P<0.05).

3 討論

中藥在中國(guó)應(yīng)用歷史悠久，中藥用于防治家禽疾病和增強(qiáng)機(jī)體抵抗力可以追溯到明清時(shí)代[6]。枳術(shù)粉是炒白術(shù)和炒枳實(shí)以2∶1的比例粉碎而得，能健脾舒胃，增強(qiáng)機(jī)體的免疫力。有研究顯示，使用不同比例白術(shù)和枳實(shí)(1∶1、1∶2、2∶1)的水煎液后發(fā)現(xiàn)， 2∶1組食物在小腸內(nèi)停留時(shí)間最長(zhǎng)，使食物在腸內(nèi)得以充分消化吸收，這可以解釋枳術(shù)粉能“治痞、消食、強(qiáng)胃”的功效[7]。來(lái)源于枳實(shí)的新橙皮苷可以有效保護(hù)胃黏膜并且具有調(diào)節(jié)功能性腹瀉的作用[8]。枳術(shù)丸(即本文中的枳術(shù)粉)還能能夠改善消化機(jī)能紊亂模型小鼠出現(xiàn)的脾胃虛弱癥狀，增強(qiáng)小鼠胃排空和促進(jìn)腸平滑肌的推進(jìn)性蠕動(dòng)，顯著增加小鼠的食欲[9]。在本次試驗(yàn)過(guò)程中，枳術(shù)粉添加組的雛雞平均日增重顯著高于陰性對(duì)照組，在21 d～42 d期間，給藥組的飼料轉(zhuǎn)化率顯著低于陰性對(duì)照組，這與趙燕飛等[6]報(bào)道的白術(shù)和白術(shù)多糖均可以提高斷奶仔豬的平均日增重結(jié)果相符，這可能就是因?yàn)樗幬镌鰪?qiáng)了機(jī)體的脾胃吸收運(yùn)化的功能，從而增加了飼料利用率。

文貴輝等[10]研究了白術(shù)粗多糖對(duì)櫻桃谷肉鴨腸道微生物的影響，發(fā)現(xiàn)日糧中添加白術(shù)多糖能明顯改善肉鴨腸道微生物區(qū)系，促進(jìn)有益微生物的生長(zhǎng)并抑制有害微生物的繁殖。劉又嘉等[11]的研究表明，含有白術(shù)的七味白術(shù)散超微粉劑可以有效地增加小鼠腸道中乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量,同時(shí)限制大腸埃希菌和沙門菌的生長(zhǎng)，這可能跟中藥白術(shù)當(dāng)中含有的多糖成分有關(guān)。本次研究表明，添加枳術(shù)粉組的雛雞腸道大腸埃希菌數(shù)量顯著低于陰性對(duì)照組，而乳酸桿菌的數(shù)量顯著高于陰性對(duì)照組，說(shuō)明枳術(shù)粉的添加可以有效改善雛雞腸道菌群結(jié)構(gòu)，這與前人的研究結(jié)果一致。枳術(shù)粉除了可以調(diào)節(jié)胃腸道的運(yùn)動(dòng)，改善營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，還可以優(yōu)化腸道菌群的結(jié)構(gòu)，說(shuō)明枳術(shù)粉做為中藥添加劑應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖具有巨大潛力。

IL-2是機(jī)體調(diào)控免疫應(yīng)答的重要因子，參與CD4+T和CD8+T細(xì)胞的活化增殖以及NK細(xì)胞的活化，參與抗體的分泌免疫因子[12]，IFN-γ具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤的作用，本次研究結(jié)果表明，枳術(shù)粉組的IFN-γ含量顯著高于陰性對(duì)照組。盧一松等[13]的研究顯示，從中藥白術(shù)中提取的多糖成分可以促進(jìn)小鼠血清IFN-γ的含量。Qiu Y等[14]的研究結(jié)果顯示，添加白術(shù)多糖可以顯著增加外周血淋巴細(xì)胞中IFN-γ的mRNA的表達(dá)量。Guo L等[15]研究表明，給老年大鼠添加白術(shù)多糖提取物可以有效提高機(jī)體的免疫力并加強(qiáng)心臟的功能。這些結(jié)果與本次的研究結(jié)果一致，說(shuō)明枳術(shù)粉對(duì)動(dòng)物機(jī)體的免疫水平有確切的提高作用。NDV抗體效價(jià)是機(jī)體特定體液免疫應(yīng)答的指示指標(biāo)，提高NDV的抗體效價(jià)在傳統(tǒng)中藥免疫調(diào)節(jié)作用的研究中已經(jīng)很普遍[16-17]。候凱儷等[18]發(fā)現(xiàn)在梅嶺土雞的日糧中添加白術(shù)水煎劑可以顯著提高NDV抗體效價(jià)，這和本試驗(yàn)研究結(jié)果一致。枳術(shù)粉增強(qiáng)機(jī)體免疫的機(jī)理主要在于此方中重用白術(shù)，而白術(shù)多糖的免疫調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)明顯，加上枳實(shí)調(diào)節(jié)胃腸的吸收功能，能使動(dòng)物表現(xiàn)為生長(zhǎng)性能提高。

綜上所述，在蛋雛雞日糧中添加枳術(shù)粉可以提高雞的生長(zhǎng)性能，優(yōu)化腸道微生物的結(jié)構(gòu)，有效改善機(jī)體的免疫性能，可以在臨床上作為替代抗菌藥物的免疫調(diào)節(jié)劑進(jìn)行使用。

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EffectofDietaryAdditionofZHFonGrowthPerformance,CecalMicrobialPopulationsandImmunityinChicks

LI Qiang1,XIAO Na2,YANG Chao2,LIU Xiao-bao3, ZHAO Xing-hua1,LIU Ju-xiang1, HE Xin1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,AgriculturalUniversityofHebei,Baoding,Hebei,071000,China;2.DingzhouAnimalHealthInspection,Dingzhou,Hebei,073000,China;3.BaodingVocationalandTechnicalCollege,Baoding,Hebei,071000,China)

The present study was conducted to determine the effects ofRhizomaAtractylodismacrocephalaeandAurantiiimmaturusFructus(Zhizhu Herbal Formula in China,ZHF) as a dietary additive on growth performance,cecal microbial populations and immunity in chicks.180 Hisex chicks were randomly assigned to three treatments.Treatment 1(control group CON) was fed with corn-soy based diets only;treatment 2 and 3 were supplemented with 10 g/kg ZHF and 20 g/kg ZHF,respectively.The results showed that body weight gains (BWG) of ZHF supplementation groups were significantly higher than the CON group,but the feed conversion ratio (FCR) was lower (P<0.05).FewerE.coliwere recovered from ceca of chicks provided with ZHF (P<0.05) and the quantities ofLactobacillusandBifidobacteriumof ZHF were significantly (P<0.05) higher than that of CON.The IFN-γ and IL-2 were significantly higher in ZHF than in CON (P<0.05).These results suggested that ZHF administration in feed displayed modulation effects on immunity and the cecal bacterial community.

RhizomaAtractylodismacrocephalae;AurantiiimmaturusFructus;growth performance;intestinal microbiota; chick

2016-12-08

河北省科技計(jì)劃項(xiàng)目(13226624);河北省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系蛋雞產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目；河北省高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(QN2015339)

李 強(qiáng)(1991-)，男，河南駐馬店人，碩士研究生，主要從事新獸藥研發(fā)工作。*

S853.75

A

1007-5038(2017)10-0078-05