2013年—2015年湖北省規(guī)模化蛋雞場新城疫疫苗免疫效果調(diào)查

周 鵬, 鄭海紅，墨海峽，歐陽金旭, 楊玉瑩, 江 濤,汪招雄*

(1.長江大學動物科學學院，湖北荊州 434025；2.中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所，上海 200232；3.湖北省荊州市畜牧獸醫(yī)局，湖北荊州 434020)

2013年—2015年湖北省規(guī)?；半u場新城疫疫苗免疫效果調(diào)查

周 鵬1△, 鄭海紅2△，墨海峽2，歐陽金旭3, 楊玉瑩1, 江 濤1,汪招雄1*

(1.長江大學動物科學學院，湖北荊州 434025；2.中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所，上海 200232；3.湖北省荊州市畜牧獸醫(yī)局，湖北荊州 434020)

為了解近年來湖北省規(guī)模化蛋雞場新城疫(Newcastle disease，ND)疫苗的免疫效果，從2013年6月到2015年12月在湖北省規(guī)?；半u場隨機采集6 989份血清樣本,用血凝抑制試驗(hemagglutination inhibition，HI)測定NDV抗體滴度，并對不同年份和月份樣本的抗體滴度進行統(tǒng)計分析。結果顯示，2013年樣本的NDV平均抗體滴度最低，為 9.2log2，2014年樣本的平均抗體滴度最高，為10.0log2，2015年的為9.8log2。在2013年的7個月中，9月份樣本的平均抗體滴度最低，為8.5log2，8月份樣本的平均抗體滴度最高，為9.8log2；在2014年的樣本中，1月份樣本的平均抗體滴度最低，為8.3log2，5月份的最高，為12.3log2；2015年12月樣本的抗體平均滴度最低，為8.9log2，11月的最高，為12.7log2。從日齡來看，120日齡～300日齡的雞只NDV平均抗體滴度較為穩(wěn)定，而小于120日齡和大于300日齡雞只的抗體滴度呈現(xiàn)較大幅度波動?？傮w上所有樣本的NDV抗體平均滴度均大于9log2，說明湖北省NDV的免疫水平良好，對雞群具有較好的保護能力。

新城疫病毒；規(guī)?；半u場；抗體滴度；免疫效果

新城疫(Newcastle Disease，ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)引起的雞和火雞的急性高度傳染性疫病，也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，主要表現(xiàn)呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血等癥狀。該病于1926年首次在印尼發(fā)生，同年在英國新城被確定，故而命名為新城疫[1]。本病在世界各地均有發(fā)生，我國有關本病的最早記載在1928年。在國際動物衛(wèi)生法典中，本病與高致病性禽流感同屬A類疫病[2]。雖然已投入了大量的人力、物力來研究雞新城疫的各個方面, 并采取普遍預防接種和其他綜合性防控措施,大大減少了該病所造成的損失, 但是雞新城疫仍然是我國家禽的頭號疫病[3]。

在目前養(yǎng)殖條件下，很多養(yǎng)禽場免疫程序不合理、免疫失敗和免疫帶毒現(xiàn)象經(jīng)常出現(xiàn)。同時，不合理的免疫程序往往導致免疫抑制和免疫耐受的產(chǎn)生，反過來又干擾和抑制免疫應答。免疫接種是控制ND的重要措施，而科學合理的免疫程序是確保免疫效果的關鍵。隨著疫苗的廣泛應用，近年來ND的流行已得到明顯控制。但由于我國養(yǎng)殖模式多樣，生物安全水平不一且雞群免疫程序混亂，免疫雞群仍經(jīng)常發(fā)生ND[4-6]。疫苗接種是目前預防雞新城疫的主要方法[7]，對疫苗免疫后抗體水平的監(jiān)測則是了解免疫效果的有效方法。條件允許的情況下，需對新城疫疫苗的免疫效果進行監(jiān)測與評估，并根據(jù)雞群免疫抗體水平的高低，決定何時需要加強免疫或者對免疫程序進行相應調(diào)整[8]，因此及時對疫苗免疫效果進行準確檢測尤為必要。本研究從2013年6月—2015年12月共采集湖北省規(guī)模化蛋雞場蛋雞血清樣本6 989份，采用血凝抑制試驗檢測樣本的NDV抗體效價，分析雞群的ND整體防疫水平，為蛋雞養(yǎng)殖場對ND的防疫提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料

NDV血凝抑制試驗標準抗原和陽性血清,購自中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所；8.5 g/L生理鹽水， PBS液，38 g/L檸檬酸鈉抗凝劑，自制。2013年6月—2015年12月在湖北省武漢、荊州、荊門、宜昌、襄陽、仙桃、黃岡等市選擇規(guī)?；半u養(yǎng)殖場隨機檢測樣本6 989份，其中2013檢測樣本1 892份數(shù)據(jù)，2014檢測樣本2 335份，2015年檢測樣本2 762份。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清制備 對湖北省規(guī)?；半u場的雞只進行隨機采血，每只翅下靜脈采血2 mL，共采集血樣6 989份。采集血樣靜置1 h，待血清析出后，3 000 r/min離心5 min，取上層血清待檢。

1.2.2 10 mL/L紅細胞懸液制備 無菌采集健康非免疫公雞血液，放入抗凝劑混勻?；旌弦悍湃腚x心機3 000 r/min離心5 min，吸去上清液和紅細胞上層的白細胞薄膜后，在離心管中加生理鹽水，慢慢混合均勻，3 000 r/min離心5 min，棄去上清液，按照上述方法反復操作4次～5次，直到上清液透明，最后一次離心后的紅細胞，棄去上清液，用紅細胞泥配制10 mL/L紅細胞懸液。

1.2.3 4單位抗原配制 取出凍干的濃縮抗原，加入2 mL～3 mL生理鹽水稀釋融化后，測其抗原效價，以能夠完全引起血凝的病毒最高稀釋度視作抗原的效價，此稀釋度為1個HA單位抗原，以此稀釋度配制4個HA單位抗原。

1.2.4 待檢樣品測定 根據(jù)血凝抑制試驗的方法及操作規(guī)范對血清樣品進行檢測，同時設置陰性血清和陽性血清對照[9]。

1.2.5 結果判定 在紅細胞對照出現(xiàn)完全沉淀、病毒對照出現(xiàn)完全凝集的情況下，將反應板作45°傾斜，從反應板背側進行讀數(shù)[10]。

2 結果

2.1 2013年—2015年湖北省規(guī)?；半u場整體NDV抗體滴度分析

對2013年—2015年湖北省規(guī)?；半u場血清樣本NDV平均抗體滴度進行統(tǒng)計分析顯示，2013年樣本的抗體平均滴度最低，為9.2log2；2014年最高，為10.0log2，2015年為9.8log2。2013年樣本的平均抗體滴度均大于9log2，說明2013年疫苗免疫后對雞群具有較好的保護能力。

2.2 2013年—2015年不同月份湖北省規(guī)模化蛋雞場雞群NDV抗體滴度

對2013年6月—12月共7個月時間采集的1 892份樣本檢測數(shù)據(jù)進行分析顯示，8月份樣本的NDV平均抗體滴度最高，為9.8log2,9月份最低，為8.5log2。7月、9月的平均值較低，低于7個月所有樣本的平均值9.2log2，9月、11月和12月的樣本中有少量樣本的抗體滴度低于6log2，其中11月份的最多(表1)。

對2014年的2 335份樣本的抗體滴度檢測數(shù)據(jù)進行分析顯示，1月份的最低，平均值為8.3log2，5月份最高，平均值為12.3log2。其中1、2、7、8、10月樣本的抗體平均滴度低于10.0log2，部分樣本的低于6log2(表2)。

對2015年的2 762份樣本的抗體滴度檢測結果分析顯示，以12月份樣本的抗體平均滴度最低，為8.9log2，以11月份樣本的抗體平均滴度最高，為12.7log2，1、3、6、7、8、12月份樣本的平均值低于12個月所有樣本的平均值9.8log2，少部分樣本的低于6log2(表3)。

表1 2013年不同月份蛋雞NDV抗體滴度Table 1 The antibody titers of NDV in different months in 2013

表2 2014年不同月份蛋雞NDV抗體滴度Table 2 The antibody titers of NDV in different months in 2014

表3 2015年不同月份蛋雞NDV抗體滴度Table 3 The antibody titers of NDV in different months in 2015

對2013年—2015年3年間共6 989份樣本NDV抗體滴度分析顯示，2013年7個月的數(shù)據(jù)平均值9.2log2,整體低于2014年和2015年，2014年1、2、7月份的數(shù)據(jù)與全年的相比偏低。2015年除去11月份，整體呈波動較為平緩。2013年在8月和9月的數(shù)據(jù)偏低，2013年較2014年和2015年略低(圖1)。

2.3 2013年—2015年湖北省規(guī)模化蛋雞場不同階段蛋雞ND抗體滴度分析

2013年—2015年間，日齡小于300 d雞只的抗體滴度小于6log2的較多，數(shù)值差異較大；日齡大于300 d的雞群，NDV的抗體滴度幾乎都大于6log2。2014年，處于300日齡以下的雞群的抗體滴度小于6log2的偏多，2015年，處于120日齡～300日齡雞群的抗體滴度小于6log2的偏多(表4)。

圖1 2013年—2015年不同月份NDV平均抗體滴度分布圖Fig.1 The average antibody titers of NDV in different months from 2013 to 2015

對2013年—2015年間不同日齡蛋雞的NDV抗體滴度檢測結果分析發(fā)現(xiàn)，2013年—2015年，在日齡小于120 d的階段，抗體平均滴度呈現(xiàn)遞增現(xiàn)象；在120日齡～200日齡階段，2014年抗體平均滴度最高，2015年次之，2013年最低；在200日齡～300日齡階段，2013年抗體平均滴度最低，2014年和2015年抗體平均滴度無太大差距；在日齡大于300 d的階段，2013年和2015年抗體平均滴度較2014年有著較為明顯的差距。另外還發(fā)現(xiàn)，在這3年中，處于120日齡～300日齡的雞群NDV抗體滴度較為平穩(wěn)，無太大波動，而在小于120日齡和大于300日齡的時間段，2013年—2015年平均抗體滴度均有較為明顯的變化和差異。這3年中，不同階段樣本的抗體平均滴度均在8log2以上，說明了2013年—2015年來湖北省蛋雞場整體的NDV免疫效果良好(圖2)。

表4 2013年—2015年不同階段蛋雞NDV抗體滴度Table 4 The antibody titers of NDV in different days of ages from 2013 to 2015

圖2 2013年—2015年不同階段蛋雞NDV平均抗體滴度Fig.2 The average antibody titers of NDV in different days of ages from 2013 to 2015

3 討論

為了解2013年—2015年湖北省規(guī)?；半u場ND疫苗的免疫效果，本試驗從2013年6月—2015年12月在湖北省規(guī)?；半u場隨機采集6 989份樣本,從不同年份、蛋雞日齡和每年不同月份對抗體檢測結果進行了統(tǒng)計和分析。

通過對樣本檢測數(shù)據(jù)分析可以看出，2013年—2015年3年中，湖北省規(guī)?；半u場NDV平均抗體滴度除個別月份外，均在9log2以上，整體來說疫苗免疫效果良好，說明NDV的防疫工作能夠保護雞群免受該病毒的感染和侵害。在這3年中，2014年和2015年樣本的抗體平均水平高于2013年，表明湖北省規(guī)?；半u養(yǎng)殖企業(yè)對于NDV的防疫有了更高的認識以及更加科學的免疫程序和防疫措施。

2013和2015年各個月份的抗體平均滴度雖有起伏，但整體偏差較小，2014年12個月之間的數(shù)據(jù)起伏較大，最大值的5月份抗體平均滴度為12.3log2，而最小值的1月份的僅為8.3log2，偏差較大，這表明2014年雞群NDV的免疫效果不穩(wěn)定，造成這種情況的原因可能是氣候突變、溫度變化或者是疫苗選取不當?shù)?。氣候變化容易引起雞群產(chǎn)生強烈的應激反應，而且NDV對于低溫的抵抗力較高，另外濕度和通風在寒冷的1月份控制難度較大，也有可能成促成該種情況。所以，養(yǎng)殖企業(yè)一方面要做好保溫措施，控制好養(yǎng)殖環(huán)境，降低雞體的應激反應，另一方面，要嚴格執(zhí)行科學的免疫程序[11]，從而保護好雞群不受NDV的侵害，影響到生產(chǎn)。

對不同日齡蛋雞的NDV抗體滴度分析顯示，湖北省蛋雞場在2013年—2015年3年中不同階段的NDV抗體平均滴度普遍高于9log2 ，這表明不同階段的雞群都得到了保護，ND的免疫取得了良好的效果。但是，數(shù)據(jù)分析顯示，日齡大于300 d的雞只抗體平均滴度均大于6log2，而在小于300日齡的時間段中，存在著部分不可忽視的抗體滴度低于6log2的樣本，這些樣本抗體水平離散程度大，整齊度差。這表明有少部分雞群抗體應答能力較差或者是養(yǎng)殖戶免疫操作不規(guī)范，具體原因值得進一步跟蹤調(diào)查。

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InvestigationonImmuneEffectofNewcastleDiseaseVaccineinLarge-scaleLayerFarmsfrom2013to2015inHubeiProvince

ZHOU Peng1,ZHENG Hai-hong2,MO Hai-xia2，OUYANG Jin-xu3,YANG Yu-ying1,JIANG Tao1,WANG Zhao-xiong1

(1.CollegeofAnimalScience,YangtzeUniversity,Jingzhou,Hubei,434025,China;2.ShanghaiVeterinaryResearchInstitute,ChinaAcademyofAgriculturalSciences,Shanghai,200232,China;3.AnimalHusbandryBureauofJingzhouCity,Jingzhou,Hubei,434020,China)

In order to investigate the status of the immune effect,6 989 blood samples were collected randomly form lager-scale layer farms in Hubei province from June 2013 to December 2015.The antibody titers of Newcastle disease virus were measured by hemagglutination inhibition test(HI).With antibody titer analysis of the samples from different years and months,we found that the Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 10.0log2 in 2014,the lowest 9.2log2 in 2013 and 9.8log2 in 2015.In the seven months of 2013,the Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 9.8log2 in October and average antibody titer was the lowest 8.5log2 in August.Analysis on the samples from 2014 revealed that Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 12.3log2 in May and average antibody titer was the lowest 8.3log2 in January.Analysis on the samples from 2015 revealed that Newcastle disease virus average antibody titers reached the highest 12.7log2 in November and average antibody titer was the lowest 8.9log2 in December.The Newcastle disease virus average antibody titers were more stable between 120 and 300 days,but the age less than 120 days or more than 300 days presented a significant fluctuations.The averages of Newcastle disease virus antibody titer values in Hubei Province were greater than 9log2 in the three years holistic data,which explained that the Newcastle disease immune level is good enough to protect the chickens from the Newcastle disease.

Newcastle disease virus;large-scale layer farm;antibody titer;immune effect

2017-01-08

長江大學?；痦椖浚婚L江大學青年基金項目

周 鵬(1991-)，男，湖北浠水人，碩士研究生，主要從事畜禽傳染病研究。鄭海紅(1979-)，女，山東泰安人，博士，副研究員，主要從事豬繁殖與呼吸綜合征致病機制研究。△同等貢獻作者。*

S852.659.5;S852.4

B

1007-5038(2017)10-0122-05