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    兩種高脂高糖乳脂配方復(fù)制高脂血癥大鼠模型的比較

    2017-11-16 02:49:29嚴(yán)家榮梁志健劉盛來李金鳳唐小江
    動物醫(yī)學(xué)進展 2017年10期
    關(guān)鍵詞:乳脂乳劑高糖

    嚴(yán)家榮,梁志健,王 弋,劉盛來,李金鳳,唐小江

    (廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,廣東佛山 528248)

    兩種高脂高糖乳脂配方復(fù)制高脂血癥大鼠模型的比較

    嚴(yán)家榮,梁志健,王 弋,劉盛來,李金鳳,唐小江*

    (廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,廣東佛山 528248)

    比較兩種高脂乳脂配方復(fù)制高脂血癥模型大鼠的血脂、肝重及肝病理的變化,為高血脂癥的預(yù)防、治療以及研究選擇合適的動物造模方法。比較兩次試驗中,正常對照1組和高脂高糖乳劑1組、正常對照2組和高脂高糖乳劑2組SD大鼠,10只/組,按10 mL/kg分別給予相應(yīng)的高脂高糖乳劑連續(xù)造模40 d,正常對照組則給予等量純凈水,分別于造模前、造模10 d、造模40 d時測定大鼠體重、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)含量及HDLC/TC比值,并測定肝臟重量以及肝臟病理組織學(xué)的變化。結(jié)果顯示,與相應(yīng)的正常對照組比較,第一次試驗中的高脂高糖乳脂1配方造模40 d,可使血脂含量升高,肝臟細胞脂肪變性,第二次試驗中的高脂高糖乳脂2配方造模40 d,只能使血脂含量升高,未見肝細胞脂肪變性。與高脂高糖乳脂1組相比,高脂高糖乳脂2組造模40 d體重下降幅度較小(P<0.05),TC、TG、LDLC含量升高幅度較少(P<0.05),HDLC/TC比值降低幅度較少(P<0.05),肝臟重量增大幅度較大(P<0.05),肝臟系數(shù)增大幅度較少(P<0.05),肝臟未產(chǎn)生肝細胞脂肪變性。結(jié)果表明,第一次試驗中的高脂高糖乳劑1配方可以制作混合型高脂血癥伴脂肪肝大鼠模型,第二次試驗中的高脂高糖乳脂2配方可以制作混合型高脂血癥大鼠模型。

    高血脂癥;動物模型;高脂高糖乳劑

    隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變以及生活節(jié)奏的加快,運動量相對減少,導(dǎo)致高血脂癥發(fā)病率升高,而且呈現(xiàn)年輕化的趨勢[1]。因此,如何防治高血脂癥成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點,目前國內(nèi)有采用脂肪乳劑灌胃法復(fù)制高脂血癥大鼠模型,由于脂肪乳劑成分不一、含量各不相同,復(fù)制出的大鼠模型血清TG的升高與否各文獻報道不一[2-5]。本文通過回顧性分析高脂高糖乳劑兩種配方復(fù)制大鼠高脂血癥大鼠模型血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(glycerin trilaurate,TG)、高密度脂蛋白膽固醇( high-density lipoprotein cholesterol,HDLC)和低密度脂蛋白膽固醇( low-density lipoprotein cholesterol,LDLC)的影響及肝臟病理組織學(xué)的差異,以期找到適合研究者需求的造模方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗動物 SPF級雄性Spraque-Dawley大鼠40只,140 g~200 g,來自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心[SCXK(粵)2008-0002]。動物飼養(yǎng)于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心SPF級動物房[SYXK(粵)2008-0002],并按照實驗動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

    1.1.2 主要試劑 TC和TG試劑盒,北京康思潤業(yè)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號分別為101109、120118和101108、110825;HDLC和LDLC試劑盒,北京北化康泰臨床試劑有限公司產(chǎn)品,批號分別為20110303、20110425和20110312、20110604;吐溫-80,天津福晨化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號為20110706;膽固醇和膽鹽,廣州威佳科技有限公司產(chǎn)品,批號分別為20110701、20110703;精煉豬油,廣州市加益食品有限公司產(chǎn)品,批號為20110806;丙賽優(yōu)(丙硫氧嘧啶片),廣東華南藥業(yè)集團有限公司產(chǎn)品,批號為110301;果糖,廣州威佳科技有限公司產(chǎn)品,批號20110101;蛋黃粉,南通康德生物制品有限公司產(chǎn)品,批號為20110105。

    1.1.3 主要儀器 BS-3000A電子分析天平,感量0.1 g,上海友聲衡器有限公司產(chǎn)品;Mikr020臺式離心機,德國Hettich公司產(chǎn)品;HWS-28電熱恒溫水浴鍋、UV-2100紫外分光光度計,廣州市正一科技有限公司產(chǎn)品;TS-12N生物組織全自動脫水機、BM-VII生物組織包埋機及冷凍機、CS-VI攤片烤片機、RS-18生物組織全自動染色機,湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司產(chǎn)品;BX41病理圖像分析系統(tǒng),日本奧林巴斯公司產(chǎn)品;ECHO全自動血液生化分析儀,意大利LOGOTECH公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 模型的建立

    1.2.1.1 高脂高糖乳劑1配方 取豬油20 mL放入200 mL的燒杯中,放在磁力攪拌器上加熱,待溫度升到100℃時,加入10 g膽固醇,溶化,加入1 g蛋黃粉,再加入1 g丙賽優(yōu),充分攪勻,然后加入20 mL吐溫80,制成油相。同時在另一燒杯中加入40 mL蒸餾水、20 mL丙二醇和30 g果糖,放在電爐上加熱至60℃,然后加入2 g膽酸鈉,充分攪拌直到完全溶解,制成水相。然后將水相加入油相,充分混勻,即制成200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇、20 g/L膽酸鈉、10 g/L蛋黃粉、10 g/L丙賽優(yōu)和300 g/L果糖的高脂高糖乳劑。分裝置于4℃冰箱保存,使用時用37℃水浴解凍灌胃[6]。

    1.2.1.2 高脂高糖乳劑2配方 操作同配方1,僅不添加丙賽優(yōu),制成200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇、20 g/L膽酸鈉、10 g/L蛋黃粉和300 g/L果糖的高脂高糖乳劑。

    1.2.1.3 造模方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,高脂高糖乳劑1組大鼠和高脂高糖乳劑2組大鼠按1 mL/kg體重經(jīng)口灌服相應(yīng)的高脂高糖乳劑,其余大鼠均給以等量純凈水,連續(xù)造模40 d。所有試驗大鼠采血前禁食12 h,不禁水,分別于造模前、造模10 d、造模40 d經(jīng)眼眶靜脈叢采血,室溫靜置30 min,3 000 r/min離心10 min取上層血清備檢。造模結(jié)束后取肝臟組織稱重完后于100 mL/L福爾馬林固定液中固定,進行病理組織形態(tài)學(xué)檢查。

    1.2.2 生化指標(biāo)檢測 測定血清TC、TG、HDLC、LDLC含量及計算HDLC/TC比值。

    1.2.3 病理學(xué)檢查 100 mL/L甲醛固定液中固定肝臟組織標(biāo)本,石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察肝臟病理學(xué)改變。

    2 結(jié)果

    2.1 體重的變化

    表1結(jié)果表明,與正常對照1組相比,高脂高糖乳脂1組大鼠造模40 d體重明顯下降(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳脂2組大鼠造模10 d、40 d體重均有所下降(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠造模40 d體重下降幅度較輕(P<0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1、配方2均可以引起動物體重下降,但配方2組的大鼠體重下降明顯低于配方1組,這與配方2不含有丙賽優(yōu)有關(guān)。

    表1 各組大鼠體重的變化Table 1 Changes of the body weight of rats in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 2,#P<0.05.

    2.2 血脂的變化

    表2~表6結(jié)果表明,與正常對照1組相比,高脂高糖乳劑1組TC、TG、LDLC含量在造模10 d和40 d均顯著升高(P<0.05),HDLC含量在造模40 d顯著升高(P<0.05),在造模10 d不顯著升高(P>0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均顯著下降(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳劑2組TC、TG、HDLC、LDLC含量在造模10 d和40 d均顯著升高(P<0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均顯著下降(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠TC、HDLC、LDLC在造模40 d的含量降低幅度較輕(P<0.05),TG含量在造模40 d不顯著增加(P>0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d下降幅度均較低(P<0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1可引起動物大幅度升高血脂含量,而配方2引起的血脂升高較平緩。

    2.3 肝臟的變化

    表7結(jié)果表明,試驗結(jié)束后,與正常對照1組相比,高脂高糖乳劑1組肝臟重量顯著降低(P<0.05),肝臟系數(shù)顯著升高(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳劑2組肝臟重量及肝臟系數(shù)均顯著升高(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠肝臟重量顯著升高(P<0.05),肝臟系數(shù)則升高幅度較低(P<0.05)。結(jié)果提示,配方1雖可引起動物肝臟系數(shù)的升高,但未能增大肝臟重量,而配方2可同時引起肝臟重量、肝臟系數(shù)的增加,但肝臟系數(shù)增加的幅度沒有配方1的嚴(yán)重。

    2.4 肝臟組織病理學(xué)觀察

    2.4.1 肝細胞脂肪變性評分標(biāo)準(zhǔn) 0分:含脂滴的肝細胞散在稀少(圖1A); 1分:含脂滴的肝細胞≤1/4(圖1B);2分:含脂滴的肝細胞>1/4且≤1/2(圖1C); 3分:含脂滴的肝細胞>1/2且≤3/4(圖1D)。

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表3 各組大鼠TG的變化Table 3 Changes of rat TG levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05.

    表4 各組大鼠HDLC的變化Table 4 Changes of rat HDLC levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表5 各組大鼠LDLC的變化Table 5 Changes of rat LDLC levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表6 各組大鼠HDLC/TC的變化Table 6 Changes of rat the ratio of HDLC and TC in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    A.含脂滴的肝細胞散在稀少(記0分);B.含脂滴的肝細胞≤1/4(記1分);C.含脂滴的肝細胞>1/4且≤1/2(記2分));D.含脂滴的肝細胞>1/2且≤3/4(記3分)
    A.Hepatic cells with less lipid droplets(0 score) ;B.Hepatic cells with lipid droplets≤1/4(1 score);C.Hepatic cells with lipid droplets were >1/4 and ≤1/2(2 scores) ;D.Hepatic cells with lipid droplets >1/2 and ≤3/4(3 scores)
    圖1肝細胞脂肪變性評分(HE,200×)
    Fig.1 The degree of hepatic steatosis(HE,200×)

    表7 各組大鼠肝臟重量、肝臟系數(shù)的變化Table 7 Changes of the liver weight and liver index in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    2.4.2 肝臟HE染色結(jié)果 表8評分結(jié)果表明,高脂高糖乳劑1組可引起肝細胞脂肪變性(P<0.05),高脂高糖乳脂2組不能引起肝細胞脂肪變性(P>0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1可引起肝細胞的脂肪變性,配方2只能引起血脂的變化未能造成肝細胞的脂肪變性。

    表8 各組肝細胞脂肪變性評分Table 8 The degree of hepatic steatosis in each group

    3 討論

    在流行病學(xué)調(diào)查中顯示,高血脂癥模型動物血清中TG的升高主要與高糖飲食有關(guān)。因此,本試驗采用了含有200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇和300 g/L果糖的高脂高糖乳脂進行復(fù)制高脂血癥大鼠模型。但配方1和配方2的成分略有不同,配方2不含有10 g/L的丙賽優(yōu)。

    研究結(jié)果顯示,配方1復(fù)制的高脂血癥模型大鼠體重明顯下降,TC、LDLC含量均顯著升高,TG、HDLC均升高,HDLC/TC比值顯著下降,肝臟重量減輕,肝臟系數(shù)增加,所有大鼠的肝細胞均發(fā)生不同程度的脂肪變性,提示該配方的造模方式可以復(fù)制混合型高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型,但與理想的高脂血癥模型尚有差距。模型大鼠體重、肝重并不相應(yīng)增加,主要是與配方1含有10 g/L的丙賽優(yōu)及高脂高糖飲食有關(guān)。丙賽優(yōu)是甲狀腺的阻斷劑,通過抑制甲狀腺內(nèi)過氧化物酶,從而抑制甲狀腺激素的合成,影響脂質(zhì)代謝,促使TC和LDLC增高,HDLC降低,但會降低大鼠的食欲及活動。盡管配方1可以復(fù)制混合型高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型,但由于可以導(dǎo)致大鼠體重明顯下降,大鼠的正常食欲及活動均受影響,并不能很好地模擬人類疾病的病情和病程,而且血脂含量升高幅度較大,不利于降血脂藥物的篩選。

    配方2復(fù)制的高脂血癥模型大鼠體重下降幅度低,TC、TG、HDLC、LDLC含量升高幅度較少,HDLC/TC比值下降幅度低,肝臟重量、肝臟系數(shù)均有所增加,但所有大鼠的肝細胞均未見脂肪變性,提示該配方該造模方式只能復(fù)制輕度高脂血癥大鼠模型,并不能引起肝細胞脂肪變性。模型大鼠的肝臟重量、肝臟系數(shù)均有所增加,但大鼠體重還是略有下降,這與高脂高糖飲食有關(guān)。該配方復(fù)制的混合型高脂血癥大鼠模型血脂含量升高幅度較少,是比較適合降血脂藥物的篩選,如果想復(fù)制高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型的話,則需要延長造模時間或調(diào)整配方含量。

    配方1和配方2造模10 d的血脂含量均有所增加,提示高脂高糖乳脂造模10 d后,即可形成高脂血癥大鼠模型,可以進行藥物的降血脂治療研究。

    [1] 王隴德.中國居民營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報告之——2002 綜合報告[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:53-64.

    [2] 由 宏,郝 睿,趙功玲,等.白蘿卜提取物對大鼠非酒精性脂肪肝的藥效作用[J].食品科學(xué),2011,32(7):300-304.

    [3] 朱艷媚,多 杰,陳秋紅.金訶降脂膠囊對高脂血癥大鼠血脂和血液流變學(xué)的影響[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004,,2(2):101-103.

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    [6] Zou Y H,Li J,Lu C,et al.High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitis[J].Life Sci,2006,79(11):1100-1107.

    ComparisonofTwoModelsofHyperlipidemiabyTowKindsofHigh-fatandHing-sugurEmulsionsinRats

    YAN Jia-rong,LIANG Zhi-jian,WANG Yi,LIU Sheng-lai,LI Jin-feng,TANG Xiao-jiang

    (GuangdongMedicalLaboratoryAnimalCenter,F(xiàn)oshan,Guangdong,528248,China)

    The aim of this study was to compare the blood fat,liver weight and liver histopathological lesions of two kinds of hyperlipidemia rat models,and to provide a better animal model for the prevention and treatment of hyperlipidemia.In two experiments,animals in normal control first group and high-fat and high-sugar first group,animals in normal control second group and high-fat and high-sugar second group,animals in high fat and high-sugar group were fed with high-fat and high-sugar diet in 40 days.During the experimental stage,the body-weight, serum total cholesterol (TC),triglycerides (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDLC),low density lipoprotein cholesterol (LDLC) and the value of HDLC/TC before treatment and treatment for 10 days and 40 days in rats were detected,and the liver weight,live relative weight and liver histopathological lesions were recorded.The results showed that compared with normal control group,after 40 days,high-fat and high-sugar first group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and make the liver cell fatty degeneration,while high-fat and high-sugar second group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and have no liver cell fatty degeneration.Compared with high-fat and high-sugar first group,after 40 days,high-fat and high-sugar second group can make the body weight decrease slightly (P<0.05),the serum TC,TG,LDLC increase slightly (P<0.05),HDLC/TC decrease slightly (P<0.05),the liver weight increase significantly (P<0.05) and the live relative weight increase slightly (P<0.05),but have no fatty degeneration in liver.We found that high-fat and high-sugar in first formula can make the combined hyperlipidemia and fatty liver model in the first experiments,while high-fat and high-sugar in second formula only can make the combined hyperlipidemia in the second experiments..

    Hyperlipidemia;animal model;high-fat and high-sugar emulsion

    2017-02-04

    廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項目(B2014060);廣東省科技計劃項目(2016A030303026)

    嚴(yán)家榮 (1981- ),男,廣東陽春人,碩士,助理研究員,主要從事人類疾病動物模型研究。*

    S852.33

    A

    1007-5038(2017)10-0038-05

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