• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    兩種高脂高糖乳脂配方復(fù)制高脂血癥大鼠模型的比較

    2017-11-16 02:49:29嚴(yán)家榮梁志健劉盛來李金鳳唐小江
    動物醫(yī)學(xué)進展 2017年10期
    關(guān)鍵詞:乳脂乳劑高糖

    嚴(yán)家榮,梁志健,王 弋,劉盛來,李金鳳,唐小江

    (廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,廣東佛山 528248)

    兩種高脂高糖乳脂配方復(fù)制高脂血癥大鼠模型的比較

    嚴(yán)家榮,梁志健,王 弋,劉盛來,李金鳳,唐小江*

    (廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心,廣東佛山 528248)

    比較兩種高脂乳脂配方復(fù)制高脂血癥模型大鼠的血脂、肝重及肝病理的變化,為高血脂癥的預(yù)防、治療以及研究選擇合適的動物造模方法。比較兩次試驗中,正常對照1組和高脂高糖乳劑1組、正常對照2組和高脂高糖乳劑2組SD大鼠,10只/組,按10 mL/kg分別給予相應(yīng)的高脂高糖乳劑連續(xù)造模40 d,正常對照組則給予等量純凈水,分別于造模前、造模10 d、造模40 d時測定大鼠體重、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)含量及HDLC/TC比值,并測定肝臟重量以及肝臟病理組織學(xué)的變化。結(jié)果顯示,與相應(yīng)的正常對照組比較,第一次試驗中的高脂高糖乳脂1配方造模40 d,可使血脂含量升高,肝臟細胞脂肪變性,第二次試驗中的高脂高糖乳脂2配方造模40 d,只能使血脂含量升高,未見肝細胞脂肪變性。與高脂高糖乳脂1組相比,高脂高糖乳脂2組造模40 d體重下降幅度較小(P<0.05),TC、TG、LDLC含量升高幅度較少(P<0.05),HDLC/TC比值降低幅度較少(P<0.05),肝臟重量增大幅度較大(P<0.05),肝臟系數(shù)增大幅度較少(P<0.05),肝臟未產(chǎn)生肝細胞脂肪變性。結(jié)果表明,第一次試驗中的高脂高糖乳劑1配方可以制作混合型高脂血癥伴脂肪肝大鼠模型,第二次試驗中的高脂高糖乳脂2配方可以制作混合型高脂血癥大鼠模型。

    高血脂癥;動物模型;高脂高糖乳劑

    隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變以及生活節(jié)奏的加快,運動量相對減少,導(dǎo)致高血脂癥發(fā)病率升高,而且呈現(xiàn)年輕化的趨勢[1]。因此,如何防治高血脂癥成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點,目前國內(nèi)有采用脂肪乳劑灌胃法復(fù)制高脂血癥大鼠模型,由于脂肪乳劑成分不一、含量各不相同,復(fù)制出的大鼠模型血清TG的升高與否各文獻報道不一[2-5]。本文通過回顧性分析高脂高糖乳劑兩種配方復(fù)制大鼠高脂血癥大鼠模型血清總膽固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(glycerin trilaurate,TG)、高密度脂蛋白膽固醇( high-density lipoprotein cholesterol,HDLC)和低密度脂蛋白膽固醇( low-density lipoprotein cholesterol,LDLC)的影響及肝臟病理組織學(xué)的差異,以期找到適合研究者需求的造模方法。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗動物 SPF級雄性Spraque-Dawley大鼠40只,140 g~200 g,來自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心[SCXK(粵)2008-0002]。動物飼養(yǎng)于廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心SPF級動物房[SYXK(粵)2008-0002],并按照實驗動物使用的3R原則給予人道的關(guān)懷。

    1.1.2 主要試劑 TC和TG試劑盒,北京康思潤業(yè)生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品,批號分別為101109、120118和101108、110825;HDLC和LDLC試劑盒,北京北化康泰臨床試劑有限公司產(chǎn)品,批號分別為20110303、20110425和20110312、20110604;吐溫-80,天津福晨化學(xué)試劑廠產(chǎn)品,批號為20110706;膽固醇和膽鹽,廣州威佳科技有限公司產(chǎn)品,批號分別為20110701、20110703;精煉豬油,廣州市加益食品有限公司產(chǎn)品,批號為20110806;丙賽優(yōu)(丙硫氧嘧啶片),廣東華南藥業(yè)集團有限公司產(chǎn)品,批號為110301;果糖,廣州威佳科技有限公司產(chǎn)品,批號20110101;蛋黃粉,南通康德生物制品有限公司產(chǎn)品,批號為20110105。

    1.1.3 主要儀器 BS-3000A電子分析天平,感量0.1 g,上海友聲衡器有限公司產(chǎn)品;Mikr020臺式離心機,德國Hettich公司產(chǎn)品;HWS-28電熱恒溫水浴鍋、UV-2100紫外分光光度計,廣州市正一科技有限公司產(chǎn)品;TS-12N生物組織全自動脫水機、BM-VII生物組織包埋機及冷凍機、CS-VI攤片烤片機、RS-18生物組織全自動染色機,湖北孝感醫(yī)用儀器有限公司產(chǎn)品;BX41病理圖像分析系統(tǒng),日本奧林巴斯公司產(chǎn)品;ECHO全自動血液生化分析儀,意大利LOGOTECH公司產(chǎn)品。

    1.2 方法

    1.2.1 模型的建立

    1.2.1.1 高脂高糖乳劑1配方 取豬油20 mL放入200 mL的燒杯中,放在磁力攪拌器上加熱,待溫度升到100℃時,加入10 g膽固醇,溶化,加入1 g蛋黃粉,再加入1 g丙賽優(yōu),充分攪勻,然后加入20 mL吐溫80,制成油相。同時在另一燒杯中加入40 mL蒸餾水、20 mL丙二醇和30 g果糖,放在電爐上加熱至60℃,然后加入2 g膽酸鈉,充分攪拌直到完全溶解,制成水相。然后將水相加入油相,充分混勻,即制成200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇、20 g/L膽酸鈉、10 g/L蛋黃粉、10 g/L丙賽優(yōu)和300 g/L果糖的高脂高糖乳劑。分裝置于4℃冰箱保存,使用時用37℃水浴解凍灌胃[6]。

    1.2.1.2 高脂高糖乳劑2配方 操作同配方1,僅不添加丙賽優(yōu),制成200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇、20 g/L膽酸鈉、10 g/L蛋黃粉和300 g/L果糖的高脂高糖乳劑。

    1.2.1.3 造模方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后,高脂高糖乳劑1組大鼠和高脂高糖乳劑2組大鼠按1 mL/kg體重經(jīng)口灌服相應(yīng)的高脂高糖乳劑,其余大鼠均給以等量純凈水,連續(xù)造模40 d。所有試驗大鼠采血前禁食12 h,不禁水,分別于造模前、造模10 d、造模40 d經(jīng)眼眶靜脈叢采血,室溫靜置30 min,3 000 r/min離心10 min取上層血清備檢。造模結(jié)束后取肝臟組織稱重完后于100 mL/L福爾馬林固定液中固定,進行病理組織形態(tài)學(xué)檢查。

    1.2.2 生化指標(biāo)檢測 測定血清TC、TG、HDLC、LDLC含量及計算HDLC/TC比值。

    1.2.3 病理學(xué)檢查 100 mL/L甲醛固定液中固定肝臟組織標(biāo)本,石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察肝臟病理學(xué)改變。

    2 結(jié)果

    2.1 體重的變化

    表1結(jié)果表明,與正常對照1組相比,高脂高糖乳脂1組大鼠造模40 d體重明顯下降(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳脂2組大鼠造模10 d、40 d體重均有所下降(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠造模40 d體重下降幅度較輕(P<0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1、配方2均可以引起動物體重下降,但配方2組的大鼠體重下降明顯低于配方1組,這與配方2不含有丙賽優(yōu)有關(guān)。

    表1 各組大鼠體重的變化Table 1 Changes of the body weight of rats in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 2,#P<0.05.

    2.2 血脂的變化

    表2~表6結(jié)果表明,與正常對照1組相比,高脂高糖乳劑1組TC、TG、LDLC含量在造模10 d和40 d均顯著升高(P<0.05),HDLC含量在造模40 d顯著升高(P<0.05),在造模10 d不顯著升高(P>0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均顯著下降(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳劑2組TC、TG、HDLC、LDLC含量在造模10 d和40 d均顯著升高(P<0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d均顯著下降(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠TC、HDLC、LDLC在造模40 d的含量降低幅度較輕(P<0.05),TG含量在造模40 d不顯著增加(P>0.05),HDLC/TC比值在造模10 d和40 d下降幅度均較低(P<0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1可引起動物大幅度升高血脂含量,而配方2引起的血脂升高較平緩。

    2.3 肝臟的變化

    表7結(jié)果表明,試驗結(jié)束后,與正常對照1組相比,高脂高糖乳劑1組肝臟重量顯著降低(P<0.05),肝臟系數(shù)顯著升高(P<0.05);與正常對照2組相比,高脂高糖乳劑2組肝臟重量及肝臟系數(shù)均顯著升高(P<0.05);與高脂高糖乳脂1組大鼠比較,高脂高糖乳脂2組大鼠肝臟重量顯著升高(P<0.05),肝臟系數(shù)則升高幅度較低(P<0.05)。結(jié)果提示,配方1雖可引起動物肝臟系數(shù)的升高,但未能增大肝臟重量,而配方2可同時引起肝臟重量、肝臟系數(shù)的增加,但肝臟系數(shù)增加的幅度沒有配方1的嚴(yán)重。

    2.4 肝臟組織病理學(xué)觀察

    2.4.1 肝細胞脂肪變性評分標(biāo)準(zhǔn) 0分:含脂滴的肝細胞散在稀少(圖1A); 1分:含脂滴的肝細胞≤1/4(圖1B);2分:含脂滴的肝細胞>1/4且≤1/2(圖1C); 3分:含脂滴的肝細胞>1/2且≤3/4(圖1D)。

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表3 各組大鼠TG的變化Table 3 Changes of rat TG levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05.

    表4 各組大鼠HDLC的變化Table 4 Changes of rat HDLC levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表5 各組大鼠LDLC的變化Table 5 Changes of rat LDLC levels in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    表6 各組大鼠HDLC/TC的變化Table 6 Changes of rat the ratio of HDLC and TC in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    A.含脂滴的肝細胞散在稀少(記0分);B.含脂滴的肝細胞≤1/4(記1分);C.含脂滴的肝細胞>1/4且≤1/2(記2分));D.含脂滴的肝細胞>1/2且≤3/4(記3分)
    A.Hepatic cells with less lipid droplets(0 score) ;B.Hepatic cells with lipid droplets≤1/4(1 score);C.Hepatic cells with lipid droplets were >1/4 and ≤1/2(2 scores) ;D.Hepatic cells with lipid droplets >1/2 and ≤3/4(3 scores)
    圖1肝細胞脂肪變性評分(HE,200×)
    Fig.1 The degree of hepatic steatosis(HE,200×)

    表7 各組大鼠肝臟重量、肝臟系數(shù)的變化Table 7 Changes of the liver weight and liver index in each group

    注:與正常對照1組相比,△P<0.05;與正常對照2組相比,*P<0.05;與高脂高糖乳脂1組相比,#P<0.05。
    Note:Compared with normal control group 1,△P<0.05;Compared with normal control group 2,*P<0.05;Compared with high fat and high sugar group 1,#P<0.05.

    2.4.2 肝臟HE染色結(jié)果 表8評分結(jié)果表明,高脂高糖乳劑1組可引起肝細胞脂肪變性(P<0.05),高脂高糖乳脂2組不能引起肝細胞脂肪變性(P>0.05)。結(jié)果提示,高脂高糖乳脂配方1可引起肝細胞的脂肪變性,配方2只能引起血脂的變化未能造成肝細胞的脂肪變性。

    表8 各組肝細胞脂肪變性評分Table 8 The degree of hepatic steatosis in each group

    3 討論

    在流行病學(xué)調(diào)查中顯示,高血脂癥模型動物血清中TG的升高主要與高糖飲食有關(guān)。因此,本試驗采用了含有200 mL/L豬油、100 g/L膽固醇和300 g/L果糖的高脂高糖乳脂進行復(fù)制高脂血癥大鼠模型。但配方1和配方2的成分略有不同,配方2不含有10 g/L的丙賽優(yōu)。

    研究結(jié)果顯示,配方1復(fù)制的高脂血癥模型大鼠體重明顯下降,TC、LDLC含量均顯著升高,TG、HDLC均升高,HDLC/TC比值顯著下降,肝臟重量減輕,肝臟系數(shù)增加,所有大鼠的肝細胞均發(fā)生不同程度的脂肪變性,提示該配方的造模方式可以復(fù)制混合型高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型,但與理想的高脂血癥模型尚有差距。模型大鼠體重、肝重并不相應(yīng)增加,主要是與配方1含有10 g/L的丙賽優(yōu)及高脂高糖飲食有關(guān)。丙賽優(yōu)是甲狀腺的阻斷劑,通過抑制甲狀腺內(nèi)過氧化物酶,從而抑制甲狀腺激素的合成,影響脂質(zhì)代謝,促使TC和LDLC增高,HDLC降低,但會降低大鼠的食欲及活動。盡管配方1可以復(fù)制混合型高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型,但由于可以導(dǎo)致大鼠體重明顯下降,大鼠的正常食欲及活動均受影響,并不能很好地模擬人類疾病的病情和病程,而且血脂含量升高幅度較大,不利于降血脂藥物的篩選。

    配方2復(fù)制的高脂血癥模型大鼠體重下降幅度低,TC、TG、HDLC、LDLC含量升高幅度較少,HDLC/TC比值下降幅度低,肝臟重量、肝臟系數(shù)均有所增加,但所有大鼠的肝細胞均未見脂肪變性,提示該配方該造模方式只能復(fù)制輕度高脂血癥大鼠模型,并不能引起肝細胞脂肪變性。模型大鼠的肝臟重量、肝臟系數(shù)均有所增加,但大鼠體重還是略有下降,這與高脂高糖飲食有關(guān)。該配方復(fù)制的混合型高脂血癥大鼠模型血脂含量升高幅度較少,是比較適合降血脂藥物的篩選,如果想復(fù)制高脂血癥合并脂肪肝大鼠模型的話,則需要延長造模時間或調(diào)整配方含量。

    配方1和配方2造模10 d的血脂含量均有所增加,提示高脂高糖乳脂造模10 d后,即可形成高脂血癥大鼠模型,可以進行藥物的降血脂治療研究。

    [1] 王隴德.中國居民營養(yǎng)與健康狀況調(diào)查報告之——2002 綜合報告[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:53-64.

    [2] 由 宏,郝 睿,趙功玲,等.白蘿卜提取物對大鼠非酒精性脂肪肝的藥效作用[J].食品科學(xué),2011,32(7):300-304.

    [3] 朱艷媚,多 杰,陳秋紅.金訶降脂膠囊對高脂血癥大鼠血脂和血液流變學(xué)的影響[J].青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004,,2(2):101-103.

    [4] 林卓慧,熊 穎.決明子提取物對高血脂大鼠模型血脂的影響[J].新中醫(yī),2010,42(7):111-112.

    [5] 劉紹東,張艷秋,張琴英.紅車軸草提取液對實驗性高脂血癥大鼠血脂的影響[J].陜西中醫(yī),2009(10):1431-1432.

    [6] Zou Y H,Li J,Lu C,et al.High-fat emulsion-induced rat model of nonalcoholic steatohepatitis[J].Life Sci,2006,79(11):1100-1107.

    ComparisonofTwoModelsofHyperlipidemiabyTowKindsofHigh-fatandHing-sugurEmulsionsinRats

    YAN Jia-rong,LIANG Zhi-jian,WANG Yi,LIU Sheng-lai,LI Jin-feng,TANG Xiao-jiang

    (GuangdongMedicalLaboratoryAnimalCenter,F(xiàn)oshan,Guangdong,528248,China)

    The aim of this study was to compare the blood fat,liver weight and liver histopathological lesions of two kinds of hyperlipidemia rat models,and to provide a better animal model for the prevention and treatment of hyperlipidemia.In two experiments,animals in normal control first group and high-fat and high-sugar first group,animals in normal control second group and high-fat and high-sugar second group,animals in high fat and high-sugar group were fed with high-fat and high-sugar diet in 40 days.During the experimental stage,the body-weight, serum total cholesterol (TC),triglycerides (TG), high density lipoprotein cholesterol (HDLC),low density lipoprotein cholesterol (LDLC) and the value of HDLC/TC before treatment and treatment for 10 days and 40 days in rats were detected,and the liver weight,live relative weight and liver histopathological lesions were recorded.The results showed that compared with normal control group,after 40 days,high-fat and high-sugar first group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and make the liver cell fatty degeneration,while high-fat and high-sugar second group can make the serum lipid increase significantly (P<0.05) and have no liver cell fatty degeneration.Compared with high-fat and high-sugar first group,after 40 days,high-fat and high-sugar second group can make the body weight decrease slightly (P<0.05),the serum TC,TG,LDLC increase slightly (P<0.05),HDLC/TC decrease slightly (P<0.05),the liver weight increase significantly (P<0.05) and the live relative weight increase slightly (P<0.05),but have no fatty degeneration in liver.We found that high-fat and high-sugar in first formula can make the combined hyperlipidemia and fatty liver model in the first experiments,while high-fat and high-sugar in second formula only can make the combined hyperlipidemia in the second experiments..

    Hyperlipidemia;animal model;high-fat and high-sugar emulsion

    2017-02-04

    廣東省醫(yī)學(xué)科研基金項目(B2014060);廣東省科技計劃項目(2016A030303026)

    嚴(yán)家榮 (1981- ),男,廣東陽春人,碩士,助理研究員,主要從事人類疾病動物模型研究。*

    S852.33

    A

    1007-5038(2017)10-0038-05

    猜你喜歡
    乳脂乳劑高糖
    提高奶牛乳脂率的方法
    河北省唐山地區(qū)生鮮乳乳脂率和乳蛋白率變化規(guī)律研究
    同步熒光法監(jiān)控人乳脂質(zhì)替代品氧化過程
    葛根素對高糖誘導(dǎo)HUVEC-12細胞氧化損傷的保護作用
    中成藥(2018年6期)2018-07-11 03:01:04
    丹紅注射液對高糖引起腹膜間皮細胞損傷的作用
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:21
    張渠集中處理站破乳劑篩選與評價
    日糧中不同比例小麥替代玉米對奶牛乳脂合成和乳脂脂肪酸組成的影響
    破乳劑對化學(xué)驅(qū)采出液的作用規(guī)律
    張掖市甜菜高產(chǎn)高糖栽培技術(shù)
    長江蔬菜(2015年3期)2015-03-11 15:10:29
    重質(zhì)高酸原油高效破乳劑研究
    av电影中文网址| 精品亚洲成a人片在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品国产一区二区久久| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲中文av在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 国产精品av久久久久免费| 99re6热这里在线精品视频| 国产成人精品一,二区| 天堂俺去俺来也www色官网| www日本在线高清视频| 啦啦啦在线免费观看视频4| 黑人猛操日本美女一级片| 一边亲一边摸免费视频| 中国三级夫妇交换| 成人国语在线视频| 亚洲综合色惰| 日韩制服骚丝袜av| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 欧美+日韩+精品| 国产又爽黄色视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲伊人色综图| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 丁香六月天网| 九九爱精品视频在线观看| 天堂俺去俺来也www色官网| 蜜桃国产av成人99| 观看av在线不卡| 日韩在线高清观看一区二区三区| 日韩视频在线欧美| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲精品国产av蜜桃| 如何舔出高潮| 久久人人97超碰香蕉20202| 久热久热在线精品观看| 热re99久久精品国产66热6| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲四区av| 久久 成人 亚洲| 毛片一级片免费看久久久久| 色视频在线一区二区三区| 天堂8中文在线网| 欧美另类一区| 国产亚洲最大av| 黄片播放在线免费| 国产高清国产精品国产三级| 国产亚洲最大av| 久久影院123| 国精品久久久久久国模美| 免费av中文字幕在线| 亚洲精品国产色婷婷电影| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 少妇人妻 视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 人人妻人人澡人人看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 日韩中字成人| 久久这里只有精品19| 欧美精品国产亚洲| av卡一久久| 午夜老司机福利剧场| 亚洲国产欧美网| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 一本大道久久a久久精品| 午夜老司机福利剧场| 伦理电影免费视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 看免费成人av毛片| 久久97久久精品| a级片在线免费高清观看视频| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲国产精品国产精品| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 97在线人人人人妻| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 成人亚洲精品一区在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 久久鲁丝午夜福利片| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲av电影在线进入| 欧美激情高清一区二区三区 | 国产一区二区激情短视频 | 性高湖久久久久久久久免费观看| 岛国毛片在线播放| 黄片小视频在线播放| 高清视频免费观看一区二区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国产午夜精品一二区理论片| 国产伦理片在线播放av一区| 黄片小视频在线播放| 国产在线免费精品| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 在线天堂最新版资源| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品偷伦视频观看了| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 日本wwww免费看| 国产97色在线日韩免费| 少妇的丰满在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲 欧美一区二区三区| videossex国产| a级毛片黄视频| 亚洲精品第二区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产爽快片一区二区三区| 熟妇人妻不卡中文字幕| 乱人伦中国视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 美女午夜性视频免费| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 在线天堂中文资源库| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 中文字幕制服av| 飞空精品影院首页| 蜜桃国产av成人99| 国产爽快片一区二区三区| 日本91视频免费播放| 男人添女人高潮全过程视频| 大香蕉久久网| av有码第一页| 一区福利在线观看| 赤兔流量卡办理| 欧美+日韩+精品| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | av.在线天堂| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 男女下面插进去视频免费观看| 久久久亚洲精品成人影院| 香蕉国产在线看| 99热国产这里只有精品6| 国产一区亚洲一区在线观看| 97在线视频观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 777米奇影视久久| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 免费av中文字幕在线| 成人影院久久| 国产成人免费无遮挡视频| 丝袜美足系列| 亚洲精品国产av成人精品| 美女国产高潮福利片在线看| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 丰满饥渴人妻一区二区三| 男女午夜视频在线观看| 美女中出高潮动态图| 99国产精品免费福利视频| 满18在线观看网站| 老鸭窝网址在线观看| 男人操女人黄网站| 免费av中文字幕在线| 成人国产av品久久久| 国产综合精华液| 国精品久久久久久国模美| a级毛片黄视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 熟女av电影| 久久精品人人爽人人爽视色| 男女免费视频国产| 69精品国产乱码久久久| 少妇的丰满在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 久久久国产一区二区| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 我要看黄色一级片免费的| 婷婷成人精品国产| 久久久a久久爽久久v久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | a级毛片在线看网站| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 欧美国产精品一级二级三级| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品久久久久久精品电影小说| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 免费看不卡的av| 国产成人精品久久二区二区91 | 黄色配什么色好看| 伊人亚洲综合成人网| 精品一区二区免费观看| av天堂久久9| 99久国产av精品国产电影| 成年av动漫网址| 少妇的逼水好多| 在线看a的网站| 哪个播放器可以免费观看大片| 高清av免费在线| 精品国产国语对白av| 久久久久久免费高清国产稀缺| 一区二区日韩欧美中文字幕| 成人免费观看视频高清| 免费高清在线观看视频在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 黄片播放在线免费| 亚洲五月色婷婷综合| 日本欧美视频一区| 免费大片黄手机在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 日本午夜av视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 久久精品国产a三级三级三级| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲精品视频女| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产xxxxx性猛交| 国产精品一区二区在线观看99| 男人操女人黄网站| 国产成人av激情在线播放| 亚洲精品视频女| 日韩中字成人| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 黄色视频在线播放观看不卡| 一区在线观看完整版| 日韩人妻精品一区2区三区| 少妇的逼水好多| 如何舔出高潮| 男人爽女人下面视频在线观看| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲五月色婷婷综合| 超碰97精品在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产毛片在线视频| av电影中文网址| 永久网站在线| 人体艺术视频欧美日本| 久久免费观看电影| 永久免费av网站大全| 亚洲伊人久久精品综合| xxxhd国产人妻xxx| 久久久久国产精品人妻一区二区| 乱人伦中国视频| 波野结衣二区三区在线| 久久久久久久久免费视频了| 精品亚洲成a人片在线观看| 18在线观看网站| 99九九在线精品视频| 成年女人在线观看亚洲视频| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲精品日本国产第一区| 久久久久国产网址| 中国国产av一级| 成年av动漫网址| 永久免费av网站大全| 毛片一级片免费看久久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 熟女电影av网| 久久国产亚洲av麻豆专区| 午夜免费观看性视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品人人爽人人爽视色| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 一区福利在线观看| 各种免费的搞黄视频| 久久av网站| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 亚洲第一青青草原| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲美女搞黄在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 超碰成人久久| 国产精品av久久久久免费| 久久综合国产亚洲精品| 少妇的逼水好多| 少妇的丰满在线观看| 香蕉精品网在线| 国产成人精品无人区| 丝袜美足系列| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲av福利一区| 成年av动漫网址| 中文欧美无线码| a 毛片基地| 老司机影院毛片| 国产精品三级大全| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 在线观看免费日韩欧美大片| 国产精品99久久99久久久不卡 | 国产成人免费观看mmmm| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品视频女| 一本大道久久a久久精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲av综合色区一区| 亚洲av欧美aⅴ国产| 9191精品国产免费久久| 伦理电影大哥的女人| 中国国产av一级| h视频一区二区三区| 十分钟在线观看高清视频www| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品一国产av| 国产亚洲一区二区精品| 视频在线观看一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美激情高清一区二区三区 | 免费黄网站久久成人精品| 国产黄频视频在线观看| 少妇熟女欧美另类| 男女啪啪激烈高潮av片| a 毛片基地| 制服丝袜香蕉在线| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 九草在线视频观看| 免费观看性生交大片5| 免费看不卡的av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日日撸夜夜添| 极品少妇高潮喷水抽搐| 99热网站在线观看| 亚洲av在线观看美女高潮| 波多野结衣一区麻豆| 久久人人爽人人片av| 成人毛片60女人毛片免费| 一级毛片我不卡| 黄色一级大片看看| 91在线精品国自产拍蜜月| 蜜桃在线观看..| 在线观看三级黄色| 亚洲第一av免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看| 久久精品国产亚洲av天美| 免费观看a级毛片全部| 日韩一区二区三区影片| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲人成电影观看| 三级国产精品片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲av免费高清在线观看| 国产av精品麻豆| 久久韩国三级中文字幕| videosex国产| 午夜日韩欧美国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 嫩草影院入口| 熟女电影av网| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产精品av久久久久免费| 99九九在线精品视频| 久久女婷五月综合色啪小说| 好男人视频免费观看在线| 久久久国产精品麻豆| 青青草视频在线视频观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产一区二区 视频在线| 亚洲视频免费观看视频| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲第一青青草原| 亚洲精品久久午夜乱码| 成年人免费黄色播放视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 久久99热这里只频精品6学生| 欧美黄色片欧美黄色片| 色视频在线一区二区三区| 国产伦理片在线播放av一区| 久久99热这里只频精品6学生| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲 欧美一区二区三区| 91精品三级在线观看| 久久久久久久精品精品| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩成人av中文字幕在线观看| 欧美黄色片欧美黄色片| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美人与善性xxx| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 大香蕉久久网| 99久久综合免费| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 啦啦啦在线免费观看视频4| 国产在线视频一区二区| 精品少妇内射三级| 人体艺术视频欧美日本| 热re99久久国产66热| 欧美97在线视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 熟女av电影| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲欧美一区二区三区久久| 超碰97精品在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 91成人精品电影| 国产一区二区三区av在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲图色成人| 精品人妻偷拍中文字幕| 毛片一级片免费看久久久久| 精品亚洲成a人片在线观看| 最黄视频免费看| 秋霞在线观看毛片| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲国产欧美网| 捣出白浆h1v1| 色吧在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 性少妇av在线| 国产精品久久久久久久久免| 午夜福利网站1000一区二区三区| 精品久久久精品久久久| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | videossex国产| 亚洲在久久综合| 久久久国产一区二区| 黄色 视频免费看| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久 成人 亚洲| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 色吧在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 国产黄频视频在线观看| av女优亚洲男人天堂| 亚洲av电影在线进入| www.熟女人妻精品国产| 女性生殖器流出的白浆| 少妇的丰满在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 久久亚洲国产成人精品v| 久久这里只有精品19| 性色av一级| 国产精品一区二区在线观看99| 亚洲伊人久久精品综合| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产成人一区二区在线| 久久婷婷青草| 久久精品人人爽人人爽视色| 中国国产av一级| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品二区激情视频| 男女高潮啪啪啪动态图| 秋霞伦理黄片| 亚洲综合色网址| av在线app专区| 精品国产一区二区久久| 婷婷色av中文字幕| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产免费视频播放在线视频| 午夜福利,免费看| www.精华液| 国产免费又黄又爽又色| 欧美精品一区二区免费开放| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 免费看av在线观看网站| 国产精品偷伦视频观看了| 日韩一区二区三区影片| 国产黄色免费在线视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日日摸夜夜添夜夜爱| 五月开心婷婷网| 一二三四中文在线观看免费高清| 伦精品一区二区三区| 97在线视频观看| 在线观看人妻少妇| 欧美日韩一级在线毛片| 久久久久久免费高清国产稀缺| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲,欧美,日韩| 9色porny在线观看| 久热这里只有精品99| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产一区有黄有色的免费视频| 极品人妻少妇av视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 97人妻天天添夜夜摸| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91精品国产国语对白视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 制服人妻中文乱码| 欧美97在线视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 国产精品.久久久| 看免费av毛片| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美国产精品一级二级三级| 国产成人精品一,二区| 女人精品久久久久毛片| 免费看av在线观看网站| 一级,二级,三级黄色视频| 老司机亚洲免费影院| 欧美激情高清一区二区三区 | 日本欧美国产在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲综合精品二区| 亚洲av电影在线进入| 美女福利国产在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人一区二区在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 尾随美女入室| www.熟女人妻精品国产| av视频免费观看在线观看| 多毛熟女@视频| 久久久精品免费免费高清| 国产精品欧美亚洲77777| 午夜免费观看性视频| 多毛熟女@视频| 另类亚洲欧美激情| 亚洲精品国产一区二区精华液| 秋霞伦理黄片| 欧美精品av麻豆av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 美女国产高潮福利片在线看| 国产免费福利视频在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲三区欧美一区| 欧美日韩精品成人综合77777| 999久久久国产精品视频| 国产成人91sexporn| 国产xxxxx性猛交| 有码 亚洲区| 国产午夜精品一二区理论片| 久久午夜综合久久蜜桃| 免费看不卡的av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 久久久久国产网址| 最近手机中文字幕大全| 成人毛片60女人毛片免费| 下体分泌物呈黄色| 午夜日本视频在线| 三级国产精品片| 国产成人精品无人区| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 一级a爱视频在线免费观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产精品偷伦视频观看了| 亚洲国产成人一精品久久久| 日本vs欧美在线观看视频| 美女午夜性视频免费| 精品一区在线观看国产| 99国产精品免费福利视频| 91精品国产国语对白视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 不卡av一区二区三区| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲精品成人av观看孕妇| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 性色av一级| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 波多野结衣av一区二区av| 日韩av免费高清视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美激情高清一区二区三区 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 美女国产高潮福利片在线看| 久久免费观看电影| 国产精品一二三区在线看| 天天操日日干夜夜撸| 日韩一区二区三区影片| 久久99蜜桃精品久久| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 最新的欧美精品一区二区| 国产亚洲一区二区精品| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美亚洲日本最大视频资源| 日本91视频免费播放| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲内射少妇av| 久久婷婷青草| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲在久久综合| 99九九在线精品视频| 国产福利在线免费观看视频| 一级黄片播放器| 精品国产乱码久久久久久小说| 免费黄频网站在线观看国产| 有码 亚洲区| 国产在线视频一区二区| 日韩免费高清中文字幕av| 国产福利在线免费观看视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲国产av新网站| 久久婷婷青草| av在线播放精品|