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    寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病的血清學(xué)調(diào)查

    2017-11-15 00:32:33高?;?/span>康曉冬
    中國畜牧獸醫(yī)文摘 2017年10期
    關(guān)鍵詞:結(jié)核寧夏結(jié)核病

    高海慧 康曉冬

    (寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所,寧夏銀川750002)

    寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病的血清學(xué)調(diào)查

    高海慧 康曉冬*

    (寧夏農(nóng)林科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所,寧夏銀川750002)

    為了解寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病的發(fā)病與流行情況,我們于2017年5月~7月對寧夏奶牛養(yǎng)殖區(qū)的9個(gè)奶牛養(yǎng)殖場按照5%的比例隨機(jī)采血1796份,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測奶牛副結(jié)核病血清抗體。結(jié)果顯示,存在副結(jié)核血清陽性牛,各場奶牛陽性率在1.78%~15.15%不等,樣品血清平均陽性率為4.29%;表明該病在寧夏奶牛養(yǎng)殖場中存在,感染處在中等水平。

    寧夏 奶牛 牛副結(jié)核 流行病學(xué)調(diào)查

    牛副結(jié)核病是由副結(jié)核分枝桿菌引起的以牛慢性增生性、頑固性腸炎和進(jìn)行性消瘦為特征的人畜共患傳染病[1],根據(jù)菌株培養(yǎng)特性及致病力可將該菌分為3個(gè)亞型,即Ⅰ型(羊型)、Ⅱ(牛型)及Ⅲ型(生物中間型),不同亞型培養(yǎng)方法不盡相同[2],該病主要由消化道感染,處于排菌期的牛,通過糞便、乳汁排菌,其他易感牛只通過經(jīng)口途徑感染該菌[3]。副結(jié)核分枝桿菌屬于胞內(nèi)寄生菌,對環(huán)境抵抗力強(qiáng),能長時(shí)間在飼料、水源、土壤等被污染環(huán)境中存在,呈世界性分布,我國最早在內(nèi)蒙古發(fā)現(xiàn)牛副結(jié)核病。該病可造成奶牛體重下降、生產(chǎn)性能下降、產(chǎn)乳量降低、多種疾病的產(chǎn)生,給畜牧養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失,嚴(yán)重影響?zhàn)B殖業(yè)的健康發(fā)展,更嚴(yán)重地威脅著公共衛(wèi)生安全,需要引起足夠重視。為了更全面掌握該病在寧夏奶牛養(yǎng)殖中的流行和分布情況,本研究使用美國愛得士生物科技公司(IDEXX)生產(chǎn)的副結(jié)核分枝桿菌抗體ELISA試劑盒對寧夏回族自治區(qū)2017年5月~7月以5%比例隨機(jī)采集的1796頭奶牛血清進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 被檢血清 遴選寧夏石嘴山市、銀川市、吳忠具有代表性的9個(gè)奶牛養(yǎng)殖場,按照5%的比例隨機(jī)無菌采取血樣1796份,室溫下靜置2~3h,4℃下3000 r/min 離心5min,析出血清,-20 ℃保存?zhèn)溆茫瑱z測前放置于室溫條件下自然解凍。

    1.1.2 檢測試劑 副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒:美國愛得士生物科技公司(IDEXX)生產(chǎn)。

    1.1.3 主要檢測儀器設(shè)備 H-1850 R 臺式高速冷凍離心機(jī)(長沙湘儀離心機(jī)有限公司),iMark 酶標(biāo)儀(美國 BIO-RAD 公司),RT-3000 全自動(dòng)洗板機(jī)(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司),微量移液器(德國 Eppendorf 公司)。

    1.2 檢測方法

    1.2.1 奶牛副結(jié)核病抗體檢測 在抗原包被微量反應(yīng)板加入100μl已稀釋孵育的樣品和對照,震蕩混勻,18-26℃孵育45min或者2-8 ℃過夜孵育(16-24h),棄去液體,300μl洗滌溶液(20倍稀釋)洗滌3次后拍干,每孔加入100μl稀釋好的酶標(biāo)抗體,蓋板后18-26℃孵育30min,300μl洗滌溶液(20倍稀釋)

    洗滌3次后拍干,每孔加入100μlTMB底物,18-26℃遮光孵育10min,每孔加入100μl終止液,450 nm下測量樣品盒對照的光密度值。具體操作見副結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒操作說明。

    1.2.2 結(jié)果判定 陽性對照平均值大于或等于0.350,陽性對照平均值與陰性對照平均值的比值大于或等于3.00的條件下檢測的結(jié)果有效,否則試驗(yàn)不成立,應(yīng)重新檢測。

    按照以下S/P百分值計(jì)算判定每個(gè)樣品的結(jié)果:S/P(%)=100*(O D樣本-O D陰性)/(O D陽性-O D陰性);當(dāng)樣品的S/P%小于或等于45%,判為抗體陽性,樣品的S/P%大于45%且小于55%,判為抗體可疑,樣品的S/P%大于或等于55%,判為抗體陽性。

    2 結(jié)果與分析

    在9個(gè)奶牛場的1796份血清樣品中,檢出副結(jié)核病抗體陽性血樣77份,平均血清陽性率為4.29%,在9個(gè)被檢牛場中有7個(gè)奶牛場檢出血清陽性牛,陽性率從1.78%~15.15%不等,場感染陽性率為77.78%,具體詳見表1。

    表1 寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病血清抗體檢測結(jié)果

    3 小結(jié)與討論

    3.1 檢測方法

    牛副結(jié)核病是一種高傳染性和高損傷性的疫病,給我國畜牧業(yè)帶來嚴(yán)重?fù)p失,肉牛和奶牛還需要引起獸醫(yī)公共衛(wèi)生重視,所以加強(qiáng)該病的監(jiān)測和防治具有重要意義。ELISA方法具有敏感、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟(jì)、主觀因素影響小等優(yōu)點(diǎn)已成為國內(nèi)外動(dòng)物疫病常規(guī)的檢疫方法,是當(dāng)前牛副結(jié)核檢測最常用的方法之一,是大量樣本檢測的優(yōu)選方法,為確保ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,采樣要盡量減少血清樣本運(yùn)輸貯藏過程中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。

    3.2 寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核血清學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果

    近年來,我國畜牧業(yè)發(fā)展迅速,隨著養(yǎng)牛規(guī)模的不斷擴(kuò)大,奶牛副結(jié)核病的傳播之勢也迅猛增加,這會對我區(qū)畜牧業(yè)的健康發(fā)展構(gòu)成一定的威脅。本試驗(yàn)所采集樣品來自寧夏不同地區(qū)規(guī)?;膛?,具有一定代表性。檢測結(jié)果顯示,被檢9個(gè)奶牛場中7個(gè)奶牛場存在抗體陽性牛,總體陽性率為4.29%,介于研究報(bào)道的我國內(nèi)蒙古,黑龍江、湖北、四川、安徽、江蘇6個(gè)省市1.22%-8%的陽性率[4],證明該病在寧夏地區(qū)的感染處于中間水平,但是隨著養(yǎng)牛業(yè)的快速發(fā)展和牛只的頻繁交易,該病會繼續(xù)傳播蔓延,需高度重視。

    3.3 寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病的防控

    第一,加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,營造良好的衛(wèi)生環(huán)境,制定科學(xué)的免疫接種方案,定期開展奶牛副結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查;第二,加強(qiáng)畜群奶牛副結(jié)核病凈化工作,及時(shí)檢出、隔離、淘汰感染牛,凍精必須經(jīng)過嚴(yán)格的檢查,確保沒有奶牛副結(jié)核病污染的才能投入使用;第三,加強(qiáng)檢疫,加強(qiáng)牛只引進(jìn)檢疫,鼓勵(lì)自繁自養(yǎng),防止引入病原。

    [1]田克恭.人與動(dòng)物共患病[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2013.

    [2] Castellanos E,de Juan L,Domnguez L,et al.Progress inmolecular typing of subspecies paratuber-culosis [J].Res Vet Sci,2012,92 (2):169-179.[C]Arsenault RJ,Li Y,Bell K,Doig K,Potter A,Griebel PJ,Kusalik A,Napper S.Mycobacterium avium subsp.paratuberculosis inhibits gamma interferon-induced signaling in bovinemonocytes:insights into the cellularmechanisms of Johne's disease[J].Infection and immunity,2012,80(9):3039-3048.

    [3]Manning E,Collins M.Mycobacterium avium subsp .paratuberculosis:pathogen,pathogenesis and diagnosis[J].Revue scientifique et technique(International Office of Epizootics),2001,20(1):133-150.

    [4]崔金磊.我國6省市牛副結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查[D].內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),2016.

    寧夏地區(qū)奶牛副結(jié)核病流行病學(xué)調(diào)查及快速診斷技術(shù)研究,項(xiàng)目編號:NKYJ-17-09

    高?;郏?990-),女,寧夏鹽池人,助理研究員,主要從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究工作。

    康曉冬

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