靈芝中三萜類化合物的提取及質(zhì)量控制研究

楊麗麗 馬愛(ài)群

摘 要：靈芝是一種具有悠久歷史的傳統(tǒng)珍貴藥材，具有極高的藥用價(jià)值。其中，三萜類化合物作為靈芝主要活性物質(zhì)之一，在抗HIV、抗炎、保肝、抗腫瘤等方面發(fā)揮著獨(dú)特的生物活性。同時(shí)，靈芝三萜類物質(zhì)也是確定靈芝相關(guān)商品質(zhì)量和品質(zhì)的重要指標(biāo)和保證，應(yīng)用前景十分可觀。靈芝三萜類化合物的提取一直是人們研究的重點(diǎn)，其提取過(guò)程比較復(fù)雜，質(zhì)量控制難度大，近年來(lái)提取技術(shù)不斷提高，如何有效控制三萜類化合物質(zhì)量依然是一個(gè)難題。為此，本文對(duì)靈芝中三萜類化合物提取方法進(jìn)行分析，并探討質(zhì)量控制方法，為靈芝中三萜類化合物提取能夠提供參考信息。

關(guān)鍵詞：靈芝 三萜類化合物 提取 質(zhì)量控制

1.前言

靈芝是名貴的藥材，其化學(xué)成分主要為三萜化合物、多糖、生物堿類、核苷類等，化學(xué)成分十分復(fù)雜，為此，要提取當(dāng)中三萜化合物難度比較大。三萜化合物屬于次生代謝的產(chǎn)物，藥理活性較強(qiáng)，具有良好的抗炎、抗腫瘤等作用，近年來(lái)，人們對(duì)靈芝中三萜類化合物的要求不斷增多，但是對(duì)其提取方法及其質(zhì)量控制的研究比較少，為此，本文對(duì)此進(jìn)行

研究。

2.三萜類化合物結(jié)構(gòu)分析及藥理作用

三萜類化合物的基本核由30個(gè)碳原子組成，其結(jié)構(gòu)由六個(gè)異戊二烯單位聚合而成。三萜類化合物多為四環(huán)三萜和五環(huán)三萜，少數(shù)為鏈狀、單環(huán)、雙環(huán)和三環(huán)三萜。四環(huán)三萜常見(jiàn)的結(jié)構(gòu)類型有達(dá)瑪烷型、羊毛脂烷型、葫蘆烷型、甘遂烷型、環(huán)阿屯烷型；五環(huán)三萜主要包括齊墩果烷型、烏蘇烷型、何伯烷型、羽扇豆烷型和木栓烷型。目前，靈芝中發(fā)現(xiàn)三萜類化合物近135種，靈芝三萜類化合物屬于高度氧化的羊毛甾烷衍生物，它們具有高脂溶解度，存在于靈芝的中性和酸性組分中。在靈芝中三萜類化合物的結(jié)構(gòu)中，它們通常含有羥基，在紫外光譜中具有多種波長(zhǎng)的特征吸收。靈芝酸是靈芝中三萜類化合物中的一種重要活性成分。根據(jù)官能團(tuán)和側(cè)鏈的不同，又可分為靈芝酸、靈芝內(nèi)酯、靈芝醇、赤芝酸等基本骨架。常見(jiàn)的靈芝酸有靈芝酸A、B、C、D等。

靈芝酸是一種三萜類化合物是1982年Kubora等首次從靈芝中分離得，綜合各種報(bào)道，已經(jīng)有140余種三萜化合物從靈芝中分離出來(lái)。三萜類化合物是靈芝重要的次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有多種生物學(xué)活性。三萜類化合物的藥理作用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：首先是具有抗菌、抗病毒作用。ZhangW等表明GLTA（Lanosta-7，9（11），24-trien-3-one，15；26-dihydroxy）和GLTB（GanodericacidY）與71型腸道病毒（EV71）相互作用以阻止病毒對(duì)細(xì)胞的吸附作用，從而抑制EV71感染。其作用機(jī)理為GLTA和GLTB可能與病毒的蛋白衣殼的疏水結(jié)合，阻止病毒脫殼作用，即GLTA和GLTB通過(guò)抑制病毒脫殼阻止DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞來(lái)抑制EV71病毒RNA的復(fù)制。因此GLTA和GLTB這2種靈芝酸可以用來(lái)控制和治療EV71病毒感染。王曉玲等利用發(fā)酵的菌絲體提取靈芝酸并檢測(cè)靈芝酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌及枯草芽孢桿菌的體外抑菌作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)靈芝酸對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，而對(duì)枯草芽孢桿菌的生長(zhǎng)抑制相對(duì)較弱。其次是具有抗癌作用。RuanW等從靈芝中分離出4個(gè)組分，其中組分2、3含有萜類，組分2中主要包括靈芝酸A、B、C2、C6、D、G、H、I、K，靈芝烯酸D、K；組分3中包括靈芝酸DM、靈芝醛TR及一些未鑒定的化合物；分別用組分2、3處理結(jié)腸癌細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，2個(gè)組分均具有細(xì)胞毒性，但表現(xiàn)出不同的細(xì)胞凋亡反應(yīng)，組分2引起G2、M期阻止，組分3誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步研究表明三萜化合物側(cè)鏈的變化造成不同萜類化合物對(duì)細(xì)胞有不同的作用。另外，還具有其他生物活性。Liu等研究靈芝酸對(duì)5α還原酶的抑制作用發(fā)現(xiàn)，5α還原酶可以使睪酮轉(zhuǎn)化成活性更強(qiáng)的二氫睪酮，二氫睪酮與中老年前列腺增生有密切關(guān)系；靈芝酸TR和靈芝酸DM相較于其他靈芝酸具有更高的5α還原酶抑制活性，該研究對(duì)以后生產(chǎn)無(wú)副作用的5α還原酶抑制劑具有重大的意義。

3.靈芝中三萜化合物提取方法及質(zhì)量控制

3.1常規(guī)溶劑提取法

靈芝三萜類化合物結(jié)構(gòu)相似，難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，不穩(wěn)定，難以分離純化。甲醇、乙醇、氯仿或乙酸乙酯等有機(jī)溶劑通常在室溫或高溫下回流。不同溶劑、濃度和提取環(huán)境對(duì)提取效果有明顯影響。楊德等人探討了乙醇濃度與靈芝中三種萜類化合物的提取率之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)乙醇濃度與靈芝提取物的靈芝三萜類化合物呈正相關(guān)。采用侯敏娜等方法對(duì)靈芝三萜類化合物的最佳提取方法進(jìn)行了探討。最佳提取工藝為5倍95%乙醇回流提取3次，每次1.5h，總?cè)祁惡?.07%。FatmawatiS.等在在室溫下用氯仿提取靈芝提取物3次，浸泡24h，提取液經(jīng)堿提取，再用氯仿提取，得到三萜酸提取物，提取率為1.99%。

3.2微波輔助提取法

微波萃取技術(shù)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新的萃取技術(shù)。具有選擇性高、耗時(shí)少、能耗低、排放少等優(yōu)點(diǎn)。這是一種創(chuàng)新的天然產(chǎn)物提取技術(shù)。該技術(shù)利用由微波技術(shù)產(chǎn)生的高頻電磁波穿透外層結(jié)構(gòu)，迅速到達(dá)內(nèi)部結(jié)構(gòu)，使組織內(nèi)的溫度和壓力迅速增加，導(dǎo)致細(xì)胞破裂和游離。有效成分的流動(dòng)。盧艷芳等設(shè)計(jì)了微波連續(xù)提取方法，并與其它傳統(tǒng)提取方法進(jìn)行了比較。結(jié)果表明，微波連續(xù)提取和常規(guī)微波提取分別需要14.5分鐘和10分鐘，達(dá)到靈芝三萜類化合物的最大提取量，而其它非微波提取方法需要幾十分鐘甚至幾百分鐘，微波連續(xù)萃取產(chǎn)物的純度明顯高于其它方法。

3.3超聲輔助提取法

靈芝子實(shí)體或孢子粉中提取三萜類化合物后，由于其結(jié)構(gòu)的影響，溶劑回流提取法需要較長(zhǎng)時(shí)間，超聲波處理破壞靈芝致密結(jié)構(gòu)，將提取時(shí)間縮短一半以上。目前已得到廣泛應(yīng)用。KeypourS.等和LiuY.L.等采用超聲波輔助提取，以氯仿為提取溶劑，提取液過(guò)濾后濃縮得三萜類浸膏，其提取率在1%-1.5%。黃曉巧等人研究了靈芝三萜類成分超聲提取的最佳條件，發(fā)現(xiàn)最佳提取工藝是加40倍量甲醇，超聲提取3次，每次30min。

3.4超臨界萃取法

超臨界CO2萃取是一種集萃取分離為一體的新技術(shù)。與傳統(tǒng)的化學(xué)溶劑萃取相比，該工藝不僅工藝簡(jiǎn)單、能耗低、不易被活性成分破壞，而且無(wú)污染、無(wú)化學(xué)溶劑消耗和殘留。它被稱為綠色萃取分離技術(shù)。高宇杰等人嘗試用超臨界CO2萃取法從靈芝中提取三萜類化合物。通過(guò)正交試驗(yàn)確定了最佳提取條件：萃取壓力為30MPa，提取溫度為40攝氏度，分離溫度為56攝氏度。在此條件下，靈芝三萜類化合物的得率為38.14g/kg。賈曉斌等人比較了超臨界CO2流體萃取和乙醇回流提取的優(yōu)缺點(diǎn)。結(jié)果表明，這兩種方法得到的三萜類化合物的色譜峰相似，靈芝三萜類和靈芝酸B的含量相近，而固體物質(zhì)含量高于乙醇回流法。

4.結(jié)束語(yǔ)

靈芝三萜類化合物的藥理作用很強(qiáng)，其藥理作用已經(jīng)得到人們的廣泛認(rèn)可，但它在靈芝中的含量低，而靈芝結(jié)構(gòu)堅(jiān)硬、緊密。采用回流提取等傳統(tǒng)提取條件，提取時(shí)間長(zhǎng)，溶劑用量大，三萜類化合物的提取率低。近年來(lái)，隨著超聲波和超臨界流體萃取技術(shù)的發(fā)展，從靈芝中提取三萜類化合物的提取取得了很大的突破，但是，每一種提取方法都具有其特點(diǎn)，在提取時(shí)需要根據(jù)實(shí)際情況選擇適合的提取方式，關(guān)于靈芝三萜類化合物的提取依然值得進(jìn)一步研究。

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