結(jié)核性腦膜炎結(jié)核分枝桿菌檢測方法的研究進展

盧運照　韋鳳省

【摘要】 結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核性腦膜炎的主要致病菌，該病菌可以通過侵犯人體各個器官，不斷加重病情。對結(jié)核分枝桿菌進行檢測，盡早確診病情，對患者予以針對性治療，是提升患者治療效果的關(guān)鍵。但是該病菌的檢測難度較大，一直是醫(yī)學難點。近年來關(guān)于結(jié)核性腦膜炎結(jié)核分枝桿菌檢測方法的研究越來越多，本研究對相關(guān)研究資料進行整理分析，對相關(guān)診斷結(jié)果進行綜述，以期為結(jié)核性腦膜炎的診斷做出科學指導，提升診斷準確性。

【關(guān)鍵詞】 結(jié)核性腦膜炎； 結(jié)核分枝桿菌； 檢測方法

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.23.085 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2017）23-0163-02

結(jié)核性腦膜炎是一種腦膜和脊膜的非化膿性炎癥，主要由結(jié)核分枝桿菌引起，其發(fā)病率較高，在各種結(jié)合性疾病患者當中有超過3.5%～10.5%的患者發(fā)生結(jié)核性腦膜炎[1]。該病的診斷準確性低，各種診斷方法對于結(jié)核分枝桿菌的診斷靈敏性都不高，且患者沒有明顯的臨床癥狀，因此很多患者都不能得到及時、有效的治療，導致病情發(fā)生惡化，發(fā)展成為惡性病變，危及到其生命安全。腦脊液涂片抗酸染色 、結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、結(jié)核分枝桿菌DNA檢測是該病的主要檢測方法[2]。

1 結(jié)核性腦膜炎結(jié)核分枝桿菌檢測的價值

結(jié)核性腦膜炎是一種對人體各項身體功能損害極大的一種疾病類型，該病屬于一種慢性疾病，發(fā)病極為隱匿，病程長，由結(jié)核分枝桿菌對人體的各個神經(jīng)器官逐步侵蝕發(fā)展[3]。不同患者的臨床癥狀也各不相同，且往往并沒有特異性，主要表現(xiàn)為頭痛、發(fā)熱、乏力、食欲下降、精神狀況差等[4]，這些癥狀常常被患者忽略，不能成為疾病診斷的有效依據(jù)。對患者進行臨床檢測是診斷該病的主要方法。結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核性腦膜炎的病原菌，最早由德國細菌學家Robert Koch發(fā)現(xiàn)，并用實驗證明其為結(jié)核性疾病的致病菌[5]。通過臨床檢測，在人體中檢測出該種病原菌則可確診病情，但是該種病菌診斷難度大，漏診、誤診發(fā)生率很高，這直接導致我國結(jié)核性腦膜炎的疫情發(fā)生嚴重惡化，每年死于結(jié)核性腦膜炎的患者逐漸增多[6]。隨著結(jié)核性腦膜炎發(fā)病率的逐年上升，引起了我國醫(yī)學界眾多學者的關(guān)注，人們逐漸認識到結(jié)核分枝桿菌檢測的價值，紛紛開始投入到結(jié)核性腦膜炎結(jié)核分枝桿菌檢測研究當中[7]，以期發(fā)現(xiàn)安全有效的檢測方法，提升該種疾病的診出率，減輕疾病對患者造成的危害。

2 結(jié)核性腦膜炎結(jié)核分枝桿菌檢測方法

在以往臨床診斷當中腦脊液涂片抗酸染色檢測是對結(jié)核性腦膜炎的主要診斷方法；隨著診斷方法的增加，結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)也被應用于臨床檢測當中，成為結(jié)核性腦膜炎最權(quán)威的診斷方法[8]；近年來，結(jié)核分枝桿菌DNA檢測也逐漸應用于臨床診斷當中，并發(fā)展成為診斷金標準[9]。本研究對各種診斷方法進行研究分析。

2.1 腦脊液涂片抗酸染色檢測

腦脊液涂片抗酸染色檢測結(jié)果為陽性則可以對判定患者為結(jié)核性腦膜炎。此種檢測方法最早由埃利希（F.Ehrlich）發(fā)明，他在1882年進行實驗研究發(fā)現(xiàn)此種檢測方法并將其應用于臨床檢測當中，但是診斷準確性并不理想[10]。齊爾（Ziehl）對該種方法進行改進，其中齊爾-尼爾森（Ziehl-Neelsen）染色法和齊爾-加貝特（Ziehl-Gabbet）染色法是最具代表性的腦脊液涂片抗酸染色方法，臨床當中多采用齊爾-尼爾森染色法對患者的結(jié)核分枝桿菌進行檢測[11]。有研究對此中檢驗方法進行了研究分析，指出該種檢測方法具有局限性。齊爾-尼爾森染色法要求患者每毫升腦脊液中至少有5000～50 000個結(jié)核分枝桿菌[12]。但是大多數(shù)患者腦脊液中的結(jié)核桿菌數(shù)量并不能滿足檢測要求，因此其檢測準確性不能有效保證。Thwaites對其檢測方法進行改進，采用腰穿抽取腦脊液的方法對患者進行檢測，檢測陽性率大大提升[13]。但是有研究指出該種檢測方法一次診出率水平很低，大多數(shù)患者要經(jīng)過幾次檢測才能做出準確診斷，而多次腰穿會增加患者發(fā)生并發(fā)癥的風險，對患者的生命安全造成嚴重威脅?；谠摲N診斷方法診斷準確性低、安全性不理想等幾方面考慮，很多學者提出對此種診斷方法進行改進，以提升其診斷準確性，降低診斷本身對患者造成的身體損害[14]。

近年來隨著醫(yī)學診斷水平的不斷發(fā)展，有研究者發(fā)現(xiàn)在對患者的腦脊液進行檢測前，使用Triton X-100處理液對其進行處理后在進行檢測[15]，能夠有效提升其檢測的準確性，我國采用該種檢測方法后，結(jié)核分枝桿菌檢出率達到100%[16]。

2.2 結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)

結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)方式是目前檢測結(jié)核性腦膜炎分支桿菌應用最多的一種方法，曾在臨床當中長期應用，診斷價值較好[17]。結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)主要有液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法兩種方法。

固體培養(yǎng)法耗時長，培養(yǎng)往往需要3周，培養(yǎng)后需要進行敏感性試驗，而試驗的時間大約為4周，整個培養(yǎng)過程近兩個月[18]。采用此種方法進行檢驗，往往會延誤患者的病情診治時間，最終可能使患者錯失最佳治療時間。因此該種方法不便于在臨床當中推廣運用。

液體培養(yǎng)法，通過在液體中分支桿菌進行培養(yǎng)，分支桿菌的生長速度快，且藥敏試驗時間短，具有較高的臨床應用價值[19]。此種方法在臨床當中的應用較多。以往臨床當中多應用L-J培養(yǎng)方法，現(xiàn)階段臨床當中應用較多的是BACTEC、MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)及MODS技術(shù)。

Baveja曾對BACTEC的臨床應用價值進行研究部分析，研究發(fā)現(xiàn)此種培養(yǎng)方法在臨床中的應用價值明顯高于PCR檢測和傳統(tǒng)的L-J培養(yǎng)方法[20]。

有研究指出MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)是應用價值最高的一種檢驗系統(tǒng)[21]。有研究曾對MGITTM 960快速培養(yǎng)系統(tǒng)在結(jié)核病診斷中的應用價值進行系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)MGITTM 960快速培養(yǎng)系統(tǒng)檢測陽性率為57.2%，明顯高于傳統(tǒng)的L-J培養(yǎng)方法[12]。有研究指出MGIT960培養(yǎng)系統(tǒng)的臨床應用價值明顯高于其他檢測系統(tǒng)[22]。

MODS技術(shù)是在液態(tài)培養(yǎng)的基礎(chǔ)上使用顯微鏡對藥物敏感型進行檢測的方法，該種檢測方法的優(yōu)勢在于能夠有效降低報陽時間，一般8～14 d就可以完成檢測。

2.3 結(jié)核分枝桿菌DNA檢測

結(jié)核分枝桿菌DNA檢測是一種新型檢測技術(shù)。聚合酶鏈反應技術(shù)（PCR）是對分支桿菌進行DNA檢測的主要方法，該種檢測方法的特異性較好，可達到98%[23]。PCR的方法有很多，主要包括多重PCR技術(shù)、巢式PCR技術(shù)、環(huán)介導等溫擴增技術(shù)（LAMP）、利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術(shù)（Xpert MTB/RIF）幾種類型。每種檢測技術(shù)各有其優(yōu)勢，多重PCR技檢測成本低，檢測效率高，敏感性強；巢式PCR技術(shù)在常規(guī)PCR技術(shù)基礎(chǔ)上進行改進，提升了循環(huán)次數(shù)，因此其檢測敏感性也得到了極大的提升。有研究指出此種檢測方法的檢測敏感性可達到100%[24]。而且該種方法操作簡單，檢測步驟少，避免了檢測過程中的交叉污染，能夠有效避免假陽性率。LAMP技術(shù)實現(xiàn)了常溫下對分支桿菌進行檢測，且檢測的經(jīng)濟價值高，反應時間短，其檢測效果明顯優(yōu)于多重PCR技術(shù)和巢式PCR技術(shù)。Xpert MTB/RIF技術(shù)是近年來應用較多的一種檢測技術(shù)，有研究曾對其臨床應用價值進行研究，以180例檢測者為研究對象進行研究分析，對比Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960檢測準確性。研究發(fā)現(xiàn)Xpert MTB/RIF的診斷效果明顯優(yōu)于其他檢測方法。雖然該種檢測效果得到一致肯定，但是其檢測費用較高，因此并不作為臨床檢測的首要選擇[25]。

關(guān)于結(jié)核性腦膜炎分支桿菌的檢測已經(jīng)成為醫(yī)學當中關(guān)注的一個重點問題，提升分支桿菌的檢測準確性能夠盡快確定患者的病情，并指導臨床醫(yī)生對患者盡快展開有效的治療，從而提升患者的臨床治療效果。不可否認，近年來關(guān)于結(jié)核性腦膜炎分支桿菌的診斷技術(shù)不斷發(fā)展，已經(jīng)取得了突破性的進展，但是現(xiàn)階段診斷準確性仍不理想，有很多患者由于誤診、漏診錯失最佳治療時機。因此關(guān)于結(jié)核性腦膜炎分支桿菌的檢測準確性還有待于進一步提升。相信在未來的研究發(fā)展中會有更行之有效的檢測方法應用于臨床當中。

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（收稿日期：2017-04-14）