Ang—2和VEGF在腎細(xì)胞癌患者外周血中的表達(dá)及其意義

韓暉　王永剛　劉尚瑩

【摘要】 目的：檢測促血管生成素-2（Angiopoietin-2，Ang-2）和血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在腎細(xì)胞癌患者外周血中的表達(dá)，探討兩者的變化及其相互關(guān)系。方法：收集56例腎細(xì)胞癌患者按腫瘤分期分為實驗1、2、3組，30例健康人為對照組，采用ELISA方法分別檢測標(biāo)本Ang-2、VEGF的水平，對以上數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。結(jié)果：四組的VEGF兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗3組的Ang-2高于實驗1組、實驗2組、對照組，對照組的Ang-2低于實驗1、2、3組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。腎細(xì)胞癌患者血清VEGF和Ang-2呈正相關(guān)（r=0.732，P<0.05）。結(jié)論：Ang-2、VEGF在腎細(xì)胞癌患者外周血中呈高表達(dá)，且與臨床分期關(guān)系密切，Ang-2和VEGF在腎細(xì)胞癌血管生成中可能相互影響。

【關(guān)鍵詞】 腎細(xì)胞癌； 促血管生成素-2； 血管內(nèi)皮生長因子

The Expression and Significance of Ang-2 and VEGF in Peripheral Blood of Renal Cell Carcinoma Patient/HAN Hui，WANG Yong-gang，LIU Shang-ying.//Medical Innovation of China，2017，14（27）：110-112

【Abstract】 Objective：To investigate the expression of angiopoietin-2 and vascular endothelial growth factor in peripheral blood of patients with renal cell carcinoma，and to explore the changes and their relationship.Method：56 renal cell carcinoma patients were selected，according to the tumor stage were divided into experimental group 1，2，3，30 healthy people were selected as the control group，specimens was detected by ELISA method Ang-2，the levels of VEGF，the above data were compared.Result：The differences between the four groups of VEGF compsred were statistically significant（P<0.05）；the Ang-2 of experimental group 3 was higher than the experimental group 1，experimental group 2，control group，the Ang-2 of the control group was lower than the experimental group 1，2，3，the differences have the statistical significance（P<0.05）.Serum VEGF and Ang-2 were positively correlated in patients with renal cell carcinoma（r=0.732，P<0.05）.Conclusion：Ang-2 and VEGF are highly expressed in peripheral blood of patients with renal cell carcinoma and are closely related to clinical stages， and Ang-2 and VEGF may interact with each other in the angiogenesis of renal cell carcinoma.

【Key words】 Renal cell carcinoma； Angiopoietin-2； Vascular endothelial growth factor

First-authors address：Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.27.031

近年來泌尿系腫瘤的發(fā)病率逐年上升，其中腎細(xì)胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是泌尿系統(tǒng)中惡性程度較高、血管豐富的實體腫瘤，其發(fā)病率和死亡率僅次于排名第一的膀胱癌[1]。有研究發(fā)現(xiàn)，促血管生成素-2（Angiopoietin，Ang-2）在腫瘤新生血管的調(diào)節(jié)中起著重要的作用，與腫瘤血管的形成有密切的關(guān)系[2]，抑制Ang-2可促進(jìn)血管的穩(wěn)定性和減少血管形成[3]。此外，血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）能直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞增殖，能影響血管的形成和腫瘤的生長，與腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[4]。本研究著重探討Ang-2、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）在腎細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展中所扮演的角色，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 收集2016年2-10月本院符合納入標(biāo)準(zhǔn)的腎細(xì)胞癌患者血清標(biāo)本56例為實驗組，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）需經(jīng)病理證實為腎細(xì)胞癌；（2）實驗組患者在確診前未行手術(shù)治療、化療、放療及其他抗腫瘤治療；（3）無其他系統(tǒng)腫瘤、嚴(yán)重感染及腫瘤家族史。參照2010年美國腫瘤聯(lián)會委員會（AJCC）的腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)將實驗組分為實驗1組（Ⅰ期）30例、實驗2組（Ⅱ期）15例、實驗3組（Ⅲ、Ⅳ期）11例，并選取體檢健康的血清標(biāo)本30例為對照組。四組患者的一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。endprint

1.2 試劑與儀器 由武漢博士德生物工程有限公司提供Ang-2及VEGF的ELISA試劑盒。由山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院病理科提供-80 ℃低溫冰箱。恒溫溫育箱、分光光度計、恒溫振蕩器、離心機(jī)、酶標(biāo)儀等實驗儀器由山西醫(yī)科大學(xué)分子生物實驗室提供。

1.3 實驗方法 采集血清標(biāo)本：向所有受試抽血對象說明情況并取得知情同意后，于次日凌晨空腹抽血5 mL，常規(guī)分離血清凍存于-80 ℃低溫冰箱保存待用，注意避免標(biāo)本反復(fù)凍融。標(biāo)本采集為同一個人，待所有標(biāo)本收齊后，統(tǒng)一進(jìn)行血清Ang-2和VEGF的濃度水平的檢測，實驗步驟嚴(yán)格按照ELISA試劑盒中的說明書進(jìn)行操作。取3次測定值為均值，以標(biāo)準(zhǔn)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，450 nm波長吸光度值（D）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品的實際質(zhì)量濃度（單位pg/mL）。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行處理分析，符合正態(tài)分布的采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。多組比較采用單因素方差分析（ANOVA），兩兩比較采用最小顯著性差異法（LSD），相關(guān)分析采用Pearson檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

四組的VEGF兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；實驗3組的Ang-2高于實驗1組、實驗2組、對照組，對照組的Ang-2低于實驗1、2、3組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。腎細(xì)胞癌患者血清VEGF和Ang-2呈正相關(guān)（r=0.732，P<0.05）。

3 討論

腫瘤是由腫瘤血管和腫瘤細(xì)胞兩者構(gòu)成的，其中腫瘤細(xì)胞對腫瘤血管的形成有促進(jìn)作用，腫瘤血管的形成又可以營養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，從而為腫瘤提供轉(zhuǎn)移途徑[5]。腫瘤血管生成過程復(fù)雜，是多種促進(jìn)、抑制因子平衡后的結(jié)果，當(dāng)促血管生成因子的作用強(qiáng)于抑制因子時，腫瘤血管便朝著生成這個方向啟動[6]。

血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）為目前經(jīng)典的調(diào)控血管生成物質(zhì)，自2005年以來，通過抑制VEGF信號通路與哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）的七種新的靶向治療藥物已被批準(zhǔn)用于治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌（mRCC）[7]；Ang-2作為新的調(diào)控物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)表達(dá)在許多腫瘤中，例如：肝癌、乳腺癌、肺癌、胃癌等[8-11]，該物質(zhì)在正常人體呈低水平表達(dá)，但在以血管滲漏和炎癥增加為特點的疾病中明顯增高[12-13]。關(guān)于腫瘤的VEGF基因研究較多，多項研究均觀察到VEGF與腫瘤分期相關(guān)[14]。本研究顯示，Ang-2和VEGF在腎細(xì)胞癌患者血清中的表達(dá)均高于健康對照，且臨床分期越晚的患者血清Ang-2和VEGF的表達(dá)水平越高，這與國內(nèi)外多項研究結(jié)果相似[15-17]。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，VEGF與Ang-2存在正相關(guān)（P<0.05），這提示Ang-2與VEGF在腫瘤血管的形成過程中可能存在相互協(xié)助的關(guān)系。Ang-2通過破壞血管的外基質(zhì)與內(nèi)皮細(xì)胞間的作用，從而強(qiáng)化部分受體對VEGF的敏感性，誘導(dǎo)增強(qiáng)血管重建相關(guān)物質(zhì)產(chǎn)生；使得血管芽生增多，這對血管新生及維持、后期增生起重要作用，在腫瘤患者中這種過程變成了惡性循環(huán)[18]。

通過阻斷腫瘤血管的生成從而抗腫瘤治療成為一個研究熱點[16]，而由于腎細(xì)胞癌對化放療均不是很敏感，且對免疫、瘤苗、基因等治療方法的療效還是很有限，因此以Ang-2家族作為腎細(xì)胞癌治療的新靶點受到人們的關(guān)注[19]。臨床研究表明，Ang-2的阻斷劑可以阻斷腫瘤生長及血管形成，特別是當(dāng)結(jié)合VEGF的抗血管形成治療時可以抑制隨淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[20-21]。本實驗受限于經(jīng)費未就VEGF與Ang-2之間復(fù)雜的關(guān)系及相互作用方式展開研究，通過檢測腎細(xì)胞癌血清中Ang-2和VEGF的含量希望揭示Ang-2的表達(dá)情況、影響因素以及其與經(jīng)典的VEGF之間可能的相關(guān)作用，為腎細(xì)胞癌早發(fā)現(xiàn)、早診斷及新治療機(jī)制提供方向。

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（收稿日期：2017-08-10） （本文編輯：張爽）endprint