氣相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留量

陳樹鵬+黎素菊+陳曉銜+洪捷嫻+李錦雯

摘 要：氯霉素被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)動(dòng)物病害的預(yù)防和治療，造成動(dòng)物性食品中的殘留，對(duì)人類產(chǎn)生了嚴(yán)重的副作用。本文介紹了水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留量的氣相色譜法。結(jié)果表明：該方法的線性系數(shù)在0.99以上，檢出限可達(dá)到0.01mg/kg。方法靈敏度高，回收率及精密度均達(dá)到分析要求。

關(guān)鍵詞：氣相色譜法；氯霉素；優(yōu)化；精密度

氯霉素是一種廣譜、高效的抗生素類藥物，由于其效高價(jià)廉，曾在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中得到了較為廣泛的應(yīng)用，同時(shí)也不可避免地帶來了殘留問題。殘留在水產(chǎn)品中氯霉素會(huì)對(duì)人體的造血等功能產(chǎn)生不良影響，甚至引起粒狀白細(xì)胞缺乏、不可逆的再生障礙性貧血、新生兒的灰嬰綜合癥等疾病。因此，氯霉素殘留問題需要引起高度的重視，國內(nèi)外對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素殘留監(jiān)控特別嚴(yán)格，而且允許殘留量都非常低，一般在1μg/kg以下。目前一般常用的氯霉素殘留量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)有氣相色譜法（GC-ECD）、液相色譜法（HPLC-UV）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法（ELISA）及氣-質(zhì)聯(lián)用法（GC/MS）等?；诖耍疚慕⒘朔治鏊a(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留的氣相色譜法，方法準(zhǔn)確可靠、靈敏度高。

一、材料與方法

1.材料

（1）試驗(yàn)原材料。魚肉組織，市場(chǎng)銷售。

（2）主要試劑與材料。乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色譜純）；氯霉素標(biāo)準(zhǔn)、衍生化試劑BSTFA；C18固相萃取柱。

（3）主要儀器。氣質(zhì)聯(lián)用儀；均質(zhì)機(jī)；固相萃取裝置；分析天平；氮吹儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液：配制100mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用時(shí)用甲醇稀釋至相應(yīng)濃度做標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

3.樣品前處理

（1）分離提取。準(zhǔn)確稱取魚肉（魚糜狀）（5±0.01）g于具塞離心管中，加入20mL乙酸乙酯，在組織勻漿機(jī)均質(zhì)1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀頭倒入離心管中，高速離心機(jī)10000r/min離心3min，將上清液倒入濃縮品中，濃縮近干，用甲醇-水（V：V=1：1）溶液5mL定容，待凈化。

（2） 固相萃取凈化。在固相萃取裝置上放置C18萃取柱，依次用甲醇、蒸鎦水活化C18柱后抽干，將1.3.1定容液過柱，用5mL蒸餾水淋洗柱子，抽干后用甲醇溶劑洗脫，收集洗脫液于10mL試管中氮?dú)獯蹈伞?/p>

（3） 衍生化。吹干的試管中加入0.5mL的甲苯和0.2mL的BSTFA衍生化試劑，在70℃烘箱中衍生30min，取出后氮?dú)獯蹈?.5mL正己烷定容上機(jī)。

（4）標(biāo)準(zhǔn)曲線及質(zhì)控樣。分別配置0.5、1.0、2.0、5.0、10.0mg/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，按1.3.3衍生化后進(jìn)樣制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，同時(shí)在1.3.1過程中稱取2個(gè)樣品做添加回收率試驗(yàn)。

4.測(cè)定方法

（1） 儀器條件。色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm，0.5fun）；載氣：氦氣（99.999%）；恒流模式流速：1.0mL/min；進(jìn)樣：1.0nL，不分流；進(jìn)樣口溫度：250V；程序升溫：80℃保持1min，以20℃/min升溫至280℃，保持10min；離子化方式：電子轟擊（EI）；離子化能量：70eV；離子源溫度：230℃；傳輸線溫度270℃；溶劑延遲：3min；掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）。掃描范圍：50～450amu；定量方式：外標(biāo)法。

（2）樣品測(cè)定。將衍生化后定容的樣品及標(biāo)準(zhǔn)裝入帶內(nèi)襯管的進(jìn)樣瓶中，按上述條件進(jìn)行分析測(cè)定，通過色譜工作站記錄保留時(shí)間、峰面積及二級(jí)質(zhì)譜離子的豐度比。

二、結(jié)果與討論

1.氣相色譜法優(yōu)化和選擇

在設(shè)定的色譜條件下對(duì)氯霉素衍生物標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測(cè)試分析，首先采用全離子掃描確定目標(biāo)化合物的保留時(shí)間和一級(jí)質(zhì)譜圖，由圖1可見氯霉素衍生物的特征碎片離子以m/z為255為母離子，設(shè)定質(zhì)譜條件優(yōu)化子離子及碰撞電壓，由圖2可選擇最佳碰撞電壓和子離子的參數(shù)。

2.方法的線性范圍

通過氣相色譜儀分析氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖見圖3，以峰面積對(duì)應(yīng)其濃度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，方法學(xué)參數(shù)見表1，圖4為氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3.方法回收率、精密度及檢出限

對(duì)樣品添加0.5 和1.0mg/kg兩種不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)，按試驗(yàn)步驟操作，每個(gè)濃度各添加5個(gè)平行樣品，進(jìn)行回收率重復(fù)測(cè)定。對(duì)樣品基質(zhì)空白進(jìn)行20次測(cè)定，按照3倍信噪比（S/N）作為定量檢出限，通過計(jì)算所得氯霉素檢出限為0.01mg/kg。樣品加標(biāo)回收率、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）見表2。

4.樣品的測(cè)定

為驗(yàn)證該方法的可靠性和準(zhǔn)確性，本次試驗(yàn)選擇市場(chǎng)銷售的鯽魚、草魚、鯉魚、河鱸及羅非魚20個(gè)樣品進(jìn)行試驗(yàn)，同時(shí)選擇上述樣品做添加回收試驗(yàn)進(jìn)行質(zhì)控。在檢測(cè)的樣品中均未檢出氯霉素藥物殘留，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。

三、分析

本次試驗(yàn)所選擇的梯度濃度繪制的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到線性回歸方程相關(guān)系數(shù)大于0.99以上，表明氯霉素在相應(yīng)的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，可滿足殘留檢出的定量要求，在對(duì)空白魚肉樣品添加的兩個(gè)濃度水平的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行質(zhì)控試驗(yàn)，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品的回收率大于80%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%，通過計(jì)算得到定量檢出限（LOD）為0.01mg/kg，以上指標(biāo)均符合藥物殘留試驗(yàn)及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)的分析要求。

四、結(jié)語

總而言之，氯霉素殘留是目前我國水產(chǎn)品代表性的一種抗生素，本文建立氣相色譜法測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素殘留量的方法。經(jīng)過本試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果表明，該方法前處理步驟相對(duì)簡單，雜質(zhì)干擾少。方法簡便、快速，同時(shí)準(zhǔn)確度和精密度較高，各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均可適用于水產(chǎn)品中氯霉素類藥物殘留的檢測(cè)工作，值得廣泛的應(yīng)用與推廣。而為了實(shí)現(xiàn)更加高效精確的檢測(cè)，還需要相關(guān)技術(shù)人員作更進(jìn)一步的研究和努力，以不斷完善該方法。

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