陜西咸陽地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV檢測(cè)及RIBA確證分析

王建利，孫蕊娟，胡曉衛(wèi)

1. 陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)，2.陜西省咸陽市干部保健局(咸陽 712000)，3.陜西省咸陽市中心血站(咸陽 712046)

陜西咸陽地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV檢測(cè)及RIBA確證分析

王建利1，2，孫蕊娟3，胡曉衛(wèi)1△

1. 陜西省中醫(yī)醫(yī)院(西安 710003)，2.陜西省咸陽市干部保健局(咸陽 712000)，3.陜西省咸陽市中心血站(咸陽 712046)

目的：了解咸陽地區(qū)無償獻(xiàn)血者丙肝感染情況。方法：使用不同酶聯(lián)免疫吸附試劑對(duì)咸陽市2015-2016年90588人次的無償獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行丙肝抗體進(jìn)行初篩，并對(duì)初篩陽性的血液標(biāo)本進(jìn)行RIBA確證檢測(cè)，比較不同廠家對(duì)抗-HCV的確診陽性率以及抗-HCV的S/CO值與確證結(jié)果的相關(guān)性。結(jié)果：期間咸陽市無償獻(xiàn)血者共90588人，初檢陽性率為0.41%(369人)，經(jīng)RIBA實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診，確診符合率為59.35%(219人)；ELISA-1檢測(cè)抗-HCV的陽性率0.28%，ELISA-2檢測(cè)抗-HCV陽性率0.34%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 14.78，P=0.00)；ELISA-1試劑確證陽性符合率77.52%和 ELISA-2試劑確證陽性符合率59.58%之間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2= 20.78，P=0.00)；ELISA-1試劑抗-HCV S/CO>10.0樣本的確證陽性符合率較高(99.30%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 87.03，P=0.00)；ELISA-2試劑的抗-HCV S/CO>10.0的樣本的確證陽性符合率100.00%，與ELISA-1試劑相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 209.47，P=0.00)；抗-HCV RIBA確證試驗(yàn)陽性標(biāo)本的核抗原的條帶陽性比例較高(85.39%)，而條帶NS的陽性比例最低(34.25%)。結(jié)論：咸陽地區(qū)無償獻(xiàn)血人群中HCV初篩陽性率呈中態(tài)流行趨勢(shì)。

丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus ，HCV)是導(dǎo)致慢性肝臟疾病的主要原因之一。有報(bào)道全國(guó)丙肝的發(fā)病率14.96/10萬，陜西省的發(fā)病率15.98/10萬，略高于全國(guó)平均水平[1]。為了進(jìn)一步加強(qiáng)采供血管理，保證臨床輸血安全，最大限度地降低經(jīng)輸血傳播HCV的風(fēng)險(xiǎn)，我們對(duì)咸陽市無償獻(xiàn)血者的HCV檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

對(duì)象和方法

1 研究對(duì)象 收集2015年1月1日至2016年12月31日在陜西省咸陽地區(qū)固定采血點(diǎn)和流動(dòng)采血點(diǎn)進(jìn)行無償獻(xiàn)血者為研究對(duì)象，獻(xiàn)血前經(jīng)體檢醫(yī)生征詢病史、體檢合格、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、血紅蛋白檢測(cè)和HBsAg快速篩查合格，符合無償獻(xiàn)血條件者90588人，獻(xiàn)血者年齡18～55周歲。

2 試劑與儀器

2.1 主要試劑：抗-HCV ELISA 試劑盒：北京萬泰生物科技有限公司(ELISA-1批號(hào)：C20150305,C20150711,CS20160302 等)，廈門新創(chuàng)生物科技有限公司(ELISA-2批號(hào)： 2015095816,201515803,2015035807) ；丙肝RIBA確證試劑：MP生物醫(yī)學(xué)亞太有限公司(批號(hào)： AD5002,AD5013，AD6001等)。

2.2 主要儀器：Genesis RSP150 全自動(dòng)加樣儀(瑞士帝肯)，BEPⅢ后處理酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)(德國(guó)貝林公司)、TENCAN洗板機(jī)(瑞士帝肯)、E-STAR全自動(dòng)酶免分析儀(瑞士HAMILTON)，TS-8轉(zhuǎn)移脫色搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)。以上儀器設(shè)備均經(jīng)過檢定校準(zhǔn)合格，試劑均為國(guó)家批批檢合格產(chǎn)品，并在有效期內(nèi)使用。

3 檢測(cè)方法

3.1 初篩檢測(cè):每份血液標(biāo)本均采用2種不同廠家ELISA試劑進(jìn)行初篩試驗(yàn)，抗-HCV檢測(cè)方法嚴(yán)格按照試劑盒的說明書操作步驟進(jìn)行操作檢測(cè)，記錄各實(shí)驗(yàn)的S/CO比值，S/CO>0.9為陽性，S/CO≤0.9為陰性；2種試劑均為陽性則報(bào)告HCV抗體陽性；1種試劑有反應(yīng)性，則用原有試劑重復(fù)檢測(cè)2孔。如2孔復(fù)測(cè)均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HCV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，則報(bào)告HCV抗體陽性；初篩陽性的再次進(jìn)行RIBA確證檢測(cè)。

3.2 確證檢測(cè)：對(duì)初篩試驗(yàn)陽性者采用HCV重組免疫印跡實(shí)驗(yàn)(RIBA)法進(jìn)行確證檢測(cè)，對(duì)抗原(核抗原、NS3-1、NS3-2、NS4、NS5) 進(jìn)行檢測(cè)，RIBA的檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行檢測(cè)和結(jié)果判讀，其條帶強(qiáng)度的判讀和結(jié)果，見表1和表2。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，兩組計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 精確概率法，以P<0.05為差異為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 RIBA抗HCV反應(yīng)條帶強(qiáng)度的判讀標(biāo)準(zhǔn)

表2 RIBA抗HCV反應(yīng)結(jié)果的判讀標(biāo)準(zhǔn)

結(jié) 果

1 不同年份無償獻(xiàn)血者抗-HCV檢測(cè)結(jié)果比較 無償獻(xiàn)血者90588人，初檢陽性率0.41%(369例)，其中2015年無償獻(xiàn)血者44866例，初檢陽性率0.40%(181例)，2016年無償獻(xiàn)血者45722例，初檢陽性率0.41%(188例)，不同年份無償獻(xiàn)血者抗-HCV的初檢率之間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.03，P=0.96)；初檢結(jié)果陽性者經(jīng)RIBA實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確診，其總的確診符合率59.35%(219例)，2015年確診符合率60.22%(109例)與2016年58.51%(110例)之間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2= 0.11，P=0.74)，見表3。

表3 2015-2016年咸陽地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV檢測(cè)結(jié)果比較[例(%)]

2 不同廠家ELISA檢測(cè)抗-HCV的結(jié)果比較

2.1 不同廠家ELISA初篩抗-HCV的結(jié)果比較：使用兩個(gè)廠家的ELISA試劑對(duì)90588名無償獻(xiàn)血標(biāo)本的抗-HCV進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果一致性的Kappa值0.70；ELISA-1檢測(cè)抗-HCV的陽性率0.28%，ELISA-2檢測(cè)抗-HCV的陽性率0.34%，不同廠家ELISA抗-HCV的結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=14.78，P=0.00)，見表4。

表4 不同廠家ELISA初篩抗-HCV的結(jié)果比較[例(%)]

2.2 不同廠家ELISA初篩陽性者與RIBA確證結(jié)果的符合情況：使用兩個(gè)不同廠家的ELISA試劑對(duì)90588名無償獻(xiàn)血標(biāo)本的抗-HCV進(jìn)行檢測(cè)篩查，其中抗-HCV陽性者共369例，經(jīng) RIBA試驗(yàn)確證后陽性者共219例，確證陽性符合率為59.35%；其中經(jīng)ELISA-1試劑檢測(cè)陽性者258例，經(jīng)RIBA確證陽性者200例，確證陽性符合率77.52%，經(jīng)ELISA-2試劑檢測(cè)陽性者209例，經(jīng)RIBA確證陽性者184例，確證陽性符合率59.58%，兩者之間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 20.78，P=0.00)；經(jīng)ELISA-1和ELISA-2試劑檢測(cè)均為陽性者198例，經(jīng)RIBA確證陽性者165例，確證陽性符合率83.33%，見表5。

3 不同廠家ELISA檢測(cè)抗-HCV的S/CO值與確證結(jié)果的相關(guān)性 對(duì)兩個(gè)不同廠家的ELISA試劑對(duì)90588名無償獻(xiàn)血標(biāo)本的抗-HCV的S/CO值進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)初篩陽性者進(jìn)行RIBA確證試驗(yàn)。ELISA-1試劑的抗-HCV陽性者共258例，S/CO>10.0的樣本經(jīng) RIBA 確證后的確證陽性符合率99.30%，10>S/CO≥3樣本的確證陽性符合率56.76%，3>S/CO>0.9樣本的確證陽性符合率48.10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 87.03，P=0.00)；ELISA-2試劑的抗-HCV陽性者共309名，S/CO>10.0的樣本經(jīng) RIBA 確證后的確證陽性符合率100.00%，10>S/CO≥3樣本的確證陽性符合率45.65%，3>S/CO>0.9樣本的確證陽性符合率21.88%，經(jīng)Fisher 精確概率法檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 209.47，P=0.00)，見表6。

4 抗-HCV RIBA確證陽性樣本的條帶分布情況 ELISA對(duì)無償獻(xiàn)血者的抗-HCV進(jìn)行篩查，對(duì)篩查結(jié)果陽性者進(jìn)行RIBI確證試驗(yàn)，其中抗-HCV RIBA確證陽性樣本共219例，對(duì)其進(jìn)行條帶種類和強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)， 其中在219例確證陽性標(biāo)本中，核抗原的條帶陽性比例最高85.39%，其次為NS4條帶56.16%，條帶NS的陽性比例最低34.25%，見表7。

表5 不同廠家ELISA 試劑抗-HCV篩查陽性者與確證結(jié)果的符合情況

表6 不同廠家ELISA 抗-HCV陽性者S/CO值與確證結(jié)果的關(guān)系

表7 抗-HCV RIBA確證陽性樣本條帶分布情況(例)

討 論

血液傳播是HCV感染的主要途徑之一。衛(wèi)生部頒布實(shí)施的《血站技術(shù)操作規(guī)程》(2015版)規(guī)定獻(xiàn)血者丙肝病原學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)項(xiàng)目，采用檢測(cè)試劑1種酶免試劑加1種核酸試劑。本單位目前采用2種酶免試劑加1種核酸試劑，本文章僅討論2種酶免試劑檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示本地區(qū)2015-2016年HCV抗體初篩陽性率為0.41%。分析同行業(yè)不同地區(qū)的報(bào)道：太原市獻(xiàn)血者2005-2011年抗HCV初篩陽性率為0.71%[1],西安地區(qū)獻(xiàn)血者2009-2012年抗-HCV初篩陽性率0.66%[2]，滄州地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV初篩陽性率0.58%[3]，大連市無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)顯示2006-2010年抗HCV初篩陽性率為0.43%[4]，均高于本地區(qū)；寧夏地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV初篩陽性率0.38%[5]，溫州地區(qū)無償獻(xiàn)血者抗-HCV初篩陽性率0.27%[6]，均低于本地區(qū)，整體來看本區(qū)域無償獻(xiàn)血人群初篩陽性率在全國(guó)居中，與人群丙肝發(fā)病率一致。

目前應(yīng)用的酶聯(lián)免疫法檢測(cè)丙型肝炎患者的特異性可高于99%，假陽性多發(fā)生于丙型肝炎低流行地區(qū)人群的抗-HCV檢測(cè)。由于不同廠家的酶免試劑所采用的抗原片段不同，在檢測(cè)標(biāo)本時(shí)存在質(zhì)量上的差異[7]，為了了解獻(xiàn)血人群真正的感染率，我們對(duì)初篩陽性的標(biāo)本再次進(jìn)行RIBA確證檢測(cè)，2015-2016年本單位無償獻(xiàn)血人群的丙肝確證陽性率為0.24%，確證陽性和初篩陽性的符合率達(dá)59.35%，高于李雪梅報(bào)道中濰坊市的38%[8]，莊小獅報(bào)道中的浙江湖州市的15.38%[9]。本研究中萬泰的假陽性22.48%，新創(chuàng)的假陽性40.45%；李雪梅[8]報(bào)道萬泰的假陽性33.33%，新創(chuàng)的假陽性38.71%；兩個(gè)研究結(jié)果略有不同，可能與兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室ELISA檢測(cè)灰區(qū)范圍不同有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)單試劑陽性的確證陽性符合率萬泰為58.3%，新創(chuàng)為17.1%，說明兩種試劑的性能差異明顯。

本研究表3提示我們不論哪種試劑，隨著S/C.O值的增大，確證結(jié)果為陽性的概率增大。同時(shí)我們的實(shí)驗(yàn)均證實(shí)S/C.O值較低時(shí)仍然有確證陽性的，因此初篩檢測(cè)中的弱陽樣本的復(fù)測(cè)方案也應(yīng)慎重選擇。

219例確證標(biāo)本中核抗原陽性率85.39%，NS3-1陽性率49.77%，NS3-2陽性率55.25%，NS4陽性率56.16%，NS5陽性率34.25%，這種片段的差異是否由人群因素造成我們無法判定，有待大家的共同商榷。

[1] 李之燁,焦冬麗.太原市2005-2011年無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(4):376-377.

[2] 肖 進(jìn),曹曉莉,趙曉華,等.2009-2012年西安地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(9):794-795.

[3] 王瑞麗,魏 超,劉樂霞,等.2007-011年滄州地區(qū)無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果與分析[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(11):1129-1130.

[4] 劉 穎,王雅卿,王 黎,等.大連市無償獻(xiàn)血者血液檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(3):161-162.

[5] 韓海年,張 偉,張巧云,等.2010-2012年寧夏地區(qū)無償獻(xiàn)血血液標(biāo)本集中檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2014,27(4):418-420.

[6] 朱紫苗.溫州地區(qū)2007-2012年無償獻(xiàn)血者血液感染性指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果分析[J].中國(guó)輸血雜志,2014,27(1):71-73.

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[8] 李雪梅,楊春茂,楊春晴,等.獻(xiàn)血者HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗TP ELISA檢測(cè)陽性與確證實(shí)驗(yàn)的對(duì)比研究[J].中國(guó)輸血雜志,2013,26(6):541-543.

[9] 莊小獅,潘 菲.抗-HCV的ELISA陽性結(jié)果與RIBA確證結(jié)果比較[J].臨床血液學(xué)雜志,2015,28(2):151-153.

△通訊作者

無償獻(xiàn)血者；丙肝抗體；RIBA

R446

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.11.045

(收稿：2017-05-17)