• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    超高壓輔助濁點(diǎn)萃取法提取富集蓮子心總生物堿

    2013-08-29 09:39:02朱榮華王曉劉建華張樹(shù)芹劉峰
    山東科學(xué) 2013年3期
    關(guān)鍵詞:濁點(diǎn)蓮子心蓮心

    朱榮華 ,王曉 ,劉建華 ,張樹(shù)芹,劉峰

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院,山東 泰安 271018;2.山東省分析測(cè)試中心,山東 濟(jì)南 250014)

    植物中活性成分的提取、富集是分離與分析的第一步,也是最關(guān)鍵的一步。近年來(lái)一些新技術(shù),如超臨界流體萃?。?]、微波輔助提?。?-3]等已被廣泛應(yīng)用于中藥活性成分的提取過(guò)程中,但是這些方法存在耗時(shí)長(zhǎng),能耗高等缺點(diǎn)。超高壓提取(ultrahigh pressure extraction,UPE)是利用100 MPa 以上的流體靜壓力作用于溶劑和中藥的混合液,保壓一段時(shí)間(幾分鐘)后卸壓,從而達(dá)到提取的目的[4-5],已廣泛應(yīng)用于中藥有效成分的提取,如葡萄皮中提取花青素[6]、茶葉中提取茶多酚[7]、荔枝果皮中提取黃酮類(lèi)化合物[8]和人參中提取人參皂苷[9]等。該方法與傳統(tǒng)技術(shù)相比,可以大大縮短提取時(shí)間、降低能耗、減少雜質(zhì)成分的溶出,提高有效成分的收率,避免了因熱效應(yīng)引起的有效成分結(jié)構(gòu)變化、損失以及生理活性的降低[10-11]。濁點(diǎn)萃取(cloud point extraction,CPE)是以表面活性劑膠束水溶液的溶解性和濁點(diǎn)現(xiàn)象為基礎(chǔ),通過(guò)改變一定的萃取條件(如電解質(zhì)、溫度、時(shí)間等),達(dá)到將水溶性物質(zhì)與親油性物質(zhì)分離的目的[12]。該方法完全取代了有機(jī)溶劑,具有經(jīng)濟(jì)、高效的特點(diǎn)[13],有著廣闊的應(yīng)用前景。因此,超高壓提取與濁點(diǎn)萃取技術(shù)相結(jié)合,可在無(wú)有機(jī)溶劑條件下實(shí)現(xiàn)快速提取、富集天然產(chǎn)物中的有效成分。目前,超高壓-濁點(diǎn)萃取技術(shù)提取、富集天然產(chǎn)物有效成分的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。

    蓮子心是蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn)成熟種子中的綠色胚芽,主要成分為生物堿,包括甲基蓮心堿、異蓮心堿、蓮心堿等[14]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,蓮子心具有抗多種實(shí)驗(yàn)性心律失常、抗血小板聚集及降壓等作用[15]。

    本文對(duì)超高壓-濁點(diǎn)萃取蓮子心中生物堿的影響因素進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過(guò)表面活性劑類(lèi)型、濃度、提取壓力、時(shí)間、料液比等單因素實(shí)驗(yàn)確定了液-固提取工藝條件;進(jìn)一步通過(guò)NaCl 濃度、平衡溫度、平衡時(shí)間等單因素實(shí)驗(yàn)確定了濁點(diǎn)萃取富集條件。結(jié)果表明,此方法可在極短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)蓮子心生物堿的提取、富集。

    1 儀器和試劑

    1.1 儀器與設(shè)備

    HPP.L3-600 型超高壓生物提取設(shè)備(天津市華泰森淼生物工程技術(shù)有限公司);UV-2550 型雙光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本島津公司);AE240 分析天平(METTLER 公司)。

    1.2 原料與試劑

    蓮子心購(gòu)自山東中醫(yī)藥大學(xué)中魯藥店,甲基蓮心堿對(duì)照品購(gòu)自天然產(chǎn)物國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品參比實(shí)驗(yàn)室;烷基酚聚氧乙烯醚(OP-10)、聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)均購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;十二烷基磺酸鈉(SDS)、十二烷基苯磺酸鈉(SDBS)、氯化鈉為分析純,均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;甲醇、無(wú)水乙醇為分析純,均購(gòu)自濟(jì)南巨業(yè)化學(xué)試劑有限公司。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 超高壓提取方法

    稱(chēng)取一定量的樣品,轉(zhuǎn)入聚乙烯塑料袋中,按照一定的料液比加入溶劑,密封。在一定壓力下,提取一定時(shí)間,卸壓后,過(guò)濾,得提取液,分析總生物堿含量。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3 次,取平均值。

    2.2 濁點(diǎn)萃取方法

    將上述過(guò)濾后的提取液中加入一定量的NaCl,混勻,放入設(shè)定溫度的恒溫水浴中加熱。平衡一段時(shí)間后,進(jìn)行離心分離,使表面活性劑相與水相分離。分別量取兩相體積并測(cè)定兩相中蓮子心生物堿的含量。所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)3 次,取平均值。

    2.3 總生物堿含量測(cè)定

    精確配制0.50 mg/mL 的甲基蓮心堿對(duì)照品溶液,用甲醇分別稀釋2、5、10、20、50 倍后,用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)于280 nm 下分別測(cè)定吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo),甲基蓮心堿濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)作圖,得線性回歸方程:Y=-0.04826+12.52484X,R2=0.9992。

    分別取提取液、表面活性劑相、水相溶液100 μL 用去離子水稀釋定容至10 mL,測(cè)定總生物堿含量,計(jì)算提取率及萃取回收率。

    2.4 萃取回收率及濃縮系數(shù)

    萃取回收率=表面活性劑相總生物堿的濃度/提取液總生物堿的濃度;

    濃縮系數(shù)(CF)=濃縮分層后水相體積/表面活性劑相體積。

    3 結(jié)果與討論

    3.1 液-固提取

    3.1.1 表面活性劑的選擇

    稱(chēng)取0.25 g 蓮子心粉,分別采用質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的OP-10、Triton X-100、SDS、SDBS、甲醇、乙醇溶液為提取溶劑,固定料液比1:40 (g/mL),在壓力200 MPa 下提取2 min,不同提取溶劑對(duì)提取率影響如圖1(A)所示。

    從圖1(A)可知,OP-10、SDS 比其他溶液具有更高的提取效率,但是SDS 的Krafft 點(diǎn)在8℃左右,后續(xù)萃取階段較難控制,而OP-10 的濁點(diǎn)為65~80℃,易于進(jìn)行后續(xù)濁點(diǎn)萃取階段的操作,綜合以上因素最終選擇OP-10 水溶液作為溶劑。

    3.1.2 OP-10 水溶液濃度對(duì)提取率的影響

    稱(chēng)取0.25 g 蓮子心粉,分別配制質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%、3%、5%、7%、9%的OP-10 水溶液作為提取溶劑,固定料液比1:40 (g/mL),在壓力200 MPa 下提取2 min,不同提取溶劑濃度對(duì)提取率影響如圖1(B)所示。

    表面活性劑具有親水基和疏水基,達(dá)到臨界膠束后,可以形成疏水基在里的膠束團(tuán),本實(shí)驗(yàn)對(duì)蓮心生物堿的提取作用依靠的就是表面活性劑溶液中所形成的膠束。從圖1(B)中可以看出OP-10 質(zhì)量分?jǐn)?shù)在1%~5%之間,提取率隨著溶劑濃度的增大呈上升趨勢(shì),原因是隨著表面活性劑溶液濃度的增大,形成的膠束越來(lái)越多,增溶作用越強(qiáng),越有利于總生物堿的提取。但在OP-10 質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于5%之后,隨著濃度的增大提取效率呈下降趨勢(shì),這是因?yàn)殡S著表面活性劑濃度的增大,溶液黏度增大,擴(kuò)散能力減弱,膠束難滲入到蓮子心樣品基質(zhì)的內(nèi)部,導(dǎo)致提取率降低。因此,質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的OP-10 水溶液為最佳提取溶劑。

    3.1.3 壓強(qiáng)對(duì)提取率的影響

    稱(chēng)取0.25 g 蓮子心粉,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的OP-10 水溶液為溶劑,固定料液比1:40 (g/mL),分別在100、200、300、400、500 MPa 高壓下提取2 min,結(jié)果見(jiàn)圖1(C)。

    超高壓提取的過(guò)程是先對(duì)物料加壓,保持一定時(shí)間后,突然卸壓。由于在增壓過(guò)程中,蓮子心細(xì)胞內(nèi)外出現(xiàn)超高壓差,溶劑在壓力作用下迅速滲透到細(xì)胞內(nèi);卸壓過(guò)程中壓力由幾百兆帕迅速降為常壓,同樣,在內(nèi)外壓差作用下,有效成分從細(xì)胞內(nèi)向周?chē)軇﹥?nèi)擴(kuò)散,從而大大加快了有效成分向外擴(kuò)散的速率[16]。

    從圖1(C)中可以看出,在100~500 MPa 之間,隨著超高壓壓力的升高,提取率略有下降。說(shuō)明壓力在達(dá)到100 MPa 時(shí),細(xì)胞的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜已被充分破壞,目標(biāo)化合物已充分溶出,當(dāng)壓力增大,溶劑粘度增加,擴(kuò)散能力減弱,提取率略有下降。因此,提取壓力選擇100 MPa。

    3.1.4 保壓時(shí)間對(duì)提取率的影響

    稱(chēng)取0.25 g 蓮子心粉,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的OP-10 水溶液為溶劑,固定料液比1:40 (g/mL),100 MPa 高壓下分別提取1、2、3、4、5 min,結(jié)果見(jiàn)圖1(D)。

    從圖1(D)中可以看出,在1~5 min 之間,隨著保壓時(shí)間的延長(zhǎng),提取率略有下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,提取溶劑在高壓作用下,進(jìn)入蓮子心細(xì)胞內(nèi),100 MPa 高壓下蓮子心的細(xì)胞破裂很快,在這1 min 內(nèi)已經(jīng)充分破裂,并且超高壓力引起體系的體積變化,推動(dòng)了化學(xué)平衡的移動(dòng),溶劑的滲透、溶質(zhì)的溶解快速達(dá)到平衡[16]。從效率和能耗等方面綜合考慮,1 min 為最佳時(shí)間。

    3.1.5 料液比對(duì)提取率的影響

    以質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的OP-10 溶液為溶劑,分別按照料液比1:5,1:10,1:20,1:30,1:40 (g/mL),100 MPa 高壓下提取1 min,結(jié)果見(jiàn)圖1(E)。

    如圖1(E)所示,在一定范圍內(nèi),隨著料液比的增大,表面活性劑的量增加,膠束作用越強(qiáng),溶劑對(duì)總生物堿的提取效果越好,但是達(dá)到一定的濃度后,溶劑實(shí)現(xiàn)了對(duì)總生物堿的充分提取,再增大料液比提取率基本不變,因此本實(shí)驗(yàn)的最佳料液比為1:20。

    圖1 超高壓提取影響因素對(duì)提取率的影響Fig.1 Impact of ultrahigh pressure-assisted micellar extraction on the extraction yield of total alkaloids

    超高壓輔助表面活性劑提取蓮子心中生物堿的最佳工藝條件如表1 所示,按照上述條件進(jìn)行提取實(shí)驗(yàn),蓮心生物堿的提取率可以達(dá)到103.6 mg/g。

    表1 最佳提取工藝條件Table 1 The optimal conditions of the extraction process

    3.2 液-液萃取

    3.2.1 NaCl 質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)萃取回收率的影響

    完成提取后過(guò)濾,向?yàn)V液中加入一定量的NaCl,使NaCl 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別達(dá)到5%、10%、12%、15%、17%、20%,恒溫65℃水浴加熱10 min 后,2 000 r/min 離心4 min,結(jié)果如圖2(A)所示。

    溶液中加入電解質(zhì)NaCl 可增大OP-10 膠團(tuán)的聚集數(shù),并降低表面活性劑濃縮相中自由水的質(zhì)量分?jǐn)?shù)和減少溶質(zhì)在水相的溶解度,從而提高其對(duì)蓮心生物堿的增溶能力并且減小表面活性劑相的體積,另外,無(wú)機(jī)鹽可以改變非離子表面活性劑的濁點(diǎn)溫度[17]。圖2(A)表明,隨著NaCl 質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,濃縮系數(shù)一直呈上升趨勢(shì),萃取回收率值在NaCl 質(zhì)量分?jǐn)?shù)增大到15%后達(dá)到平衡,再增加NaCl 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)萃取回收率值基本沒(méi)有影響,而且加入過(guò)多的NaCl 難以溶解,因此15%為最佳質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

    圖2 濁點(diǎn)萃取各因素對(duì)萃取回收率和濃縮系數(shù)的影響Fig.2 Impacts of CPE factors on CPE extraction yield and CF

    3.2.2 平衡溫度對(duì)萃取回收率的影響

    完成提取后過(guò)濾,向?yàn)V液中加入NaCl,使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到15%,再分別以恒溫30、40、50、60、65、70℃水浴加熱10 min 后,2 000 r/min 離心4 min,結(jié)果如圖2(B)所示。

    隨著平衡溫度的上升,膠束中氫鍵斷裂脫水,使表面活性劑富集相體積減少,引發(fā)更好的相分離。圖2(B)表明,隨著溫度的上升,濃縮系數(shù)一直呈上升趨勢(shì),萃取回收率值在30~50℃間呈上升趨勢(shì),在50℃之后出現(xiàn)下降趨勢(shì),可能是溫度過(guò)高,蓮心生物堿穩(wěn)定性下降,部分生物堿被破壞。所以最佳的平衡溫度是50℃。

    3.2.3 平衡時(shí)間對(duì)萃取回收率的影響

    完成提取后過(guò)濾,向?yàn)V液中加入NaCl,使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到15%,分別在50℃恒溫水浴加熱5、10、15、20、25 min 后,2 000 r/min 離心4 min,結(jié)果如圖2(C)所示。

    在合適的電解質(zhì)和濁點(diǎn)溫度下,足夠的平衡時(shí)間可以使表面活性劑充分的提取富集目標(biāo)成分。從圖2(C)可知,在50℃恒溫水浴條件下,平衡時(shí)間對(duì)萃取回收率和濃縮系數(shù)影響不大,濃縮系數(shù)基本保持不變,萃取回收率值在平衡時(shí)間達(dá)到10 min 后也基本保持不變。所以平衡時(shí)間選擇為10 min。最佳富集工藝條件見(jiàn)表2。

    表2 最佳富集工藝條件Table 2 The optimal conditions of the enrichment process

    2.3 最優(yōu)化條件

    綜上所述,超高壓輔助膠束提取蓮子心生物堿的最佳提取工藝為提取壓力100 MPa,提取時(shí)間1 min,質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% OP-10 為溶劑,料液比1:20 (g/mL),蓮心生物堿的提取率達(dá)到103.6 ±2.6 mg/g。提取液中加入NaCl 使其質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到15%再在50℃條件下平衡10 min,兩相分離,離心后蓮子心生物堿的萃取回收率為70.73% ±1.34%,濃縮系數(shù)為8.6 ±0.2。

    4 結(jié)論

    本文利用超高壓輔助膠束提取結(jié)合濁點(diǎn)萃取技術(shù)從蓮子心中提取富集了蓮心生物堿,與傳統(tǒng)方法相比,超高壓提取時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單、能耗低。同時(shí),超高壓處理后的提取液成分較簡(jiǎn)單,不渾濁,粘度低,易過(guò)濾,有利于后續(xù)操作。常溫提取又能使蓮子心生物堿避免因熱效應(yīng)損失和藥理活性降低。超高壓輔助膠束提取結(jié)合濁點(diǎn)技術(shù)是在密閉的環(huán)境下常溫進(jìn)行的,沒(méi)有溶劑揮發(fā),綠色環(huán)保,是一種提取和富集蓮子心中生物堿的新方法。

    [1]KARLSSON L,TORSTENSSON A,TAYLOR L T,et al.The use of supercritical fluid extraction for sample preparation of pharmaceutical formulations[J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,1997,15(5):601 -611.

    [2]FANG L,LIU Y Q,ZHUANG H Y,et al.Combined microware-assisted extraction and high-speed counter-current chromatography for separation and parification of xanthones from Garcinia mangostana[J].Journal of Chromatography B,2011,879(28):3023 -3027.

    [3]LIU Y Q,GUO X F,DUAN W J,et al.Accelerated solvent extraction of monacolin K from red yeast rice and purification by highspeed counter-current chromatography[J].Journal of Chromatography B,2010,878(28):2881–2885.

    [4]張格,張玲玲,吳華,等.采用超高壓技術(shù)從茶葉中提取茶多酚[J].茶葉科學(xué),2006,26(4):291 -294.

    [5]ZHANG S Q,CHEN R Z,WANG C Z.Experiment study on ultrahigh pressure extraction of Ginsenosides[J].Journal of Food Engineering,2007,79(1):1 -5.

    [6]CORRALES M,GARCI A F,BUTZ P,et al.Extraction of anthocyanins from grape skins assisted by high hydrostatic pressure[J].Journal of Food Engineering,2009,90 (4):415 -421.

    [7]XI J,SHEN D J,ZHAO S,et al.Characterization of polyphenols from green tea leaves using a high hydrostatic pressure extraction[J].International Journal of Pharmaceutics,2009,382(1/2):139 -143.

    [8]PRASAD K N,YANG B,ZHAO M M,et al.Application of ultrasonication or high-pressure extraction of flavonoids from litchi fruit pericarp[J].Journal of Food Process Engineering,2009,32 (6):828 -843.

    [9]SHIN J S,AHN S C,CHOI S W,et al.Ultra high pressure extraction(VHPE)of ginse-nosides from Korean panax ginseng powder[J].Food Science and Biotechnology,2010,19(3):743 -748.

    [10]曾亮,羅理勇,官興麗.超高壓提取茶葉內(nèi)含物工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué),2011,32(6):85 -88.

    [11]PRASAD K N,YANG B,SHI J,et al.Enhanced antioxidant and antityrosinase activities of longan fruit pericarp by ultra-highpressure-assisted extraction[J].J Pharm Biomed Anal,2010,51 (2):471 -477.

    [12]姬厚偉,張建勛.現(xiàn)代萃取技術(shù)及其在煙草化學(xué)分析中的應(yīng)用[J].煙草科技,2007(9):46 -50.

    [13]SHI Z H,HE J T,CHANG W B.Micelle-mediated extraction of tanshinones from Salvia miltiorrhiza bunge with analysis by highperformance liquid chromatography[J].Talanta,2004,64(2):401 -407.

    [14]張弦,潘揚(yáng).植物蓮中生物堿類(lèi)成分的研究概況[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2002,18(6):382 -384.

    [15]婁紅祥,苑輝卿,季梅.蓮子心化學(xué)成分的研究[J].山東醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),1995,33(4):346 -348.

    [16]陳瑞戰(zhàn),張守勤,劉志強(qiáng).超高壓技術(shù)在中藥有效成分提取中的應(yīng)用[J].中草藥,2007,38(12):1905 -1908.

    [17]TIAN M L,YAN H Y,ROW K H.Solid-phase extraction of tanshinones from Salvia Miltiorrhiza Bunge using ionic liquidmodified silica sorbents[J].Journal of Chromatography B,2009,877(819):738 -742.

    猜你喜歡
    濁點(diǎn)蓮子心蓮心
    蓮心寶寶有話說(shuō)
    蓮心寶寶有話說(shuō)
    蓮子脾之果
    保健與生活(2019年3期)2019-08-01 06:33:08
    醇醚生產(chǎn)中濁點(diǎn)的測(cè)定
    蓮子心能吃嗎
    飲食保健(2016年11期)2016-06-23 03:04:50
    苦寒中藥蓮子心
    濁點(diǎn)萃取-火焰原子吸收聯(lián)用法對(duì)微量錳的研究
    蓮心堿固體分散體的表征及體外溶出度的測(cè)定
    中成藥(2015年8期)2015-01-18 07:23:16
    煩躁失眠多喝蓮心茶
    保健與生活(2014年5期)2014-04-29 12:23:03
    蓮心超微粉碎提高有效成分的溶出速率
    国产伦在线观看视频一区| 欧美中文综合在线视频| 最新美女视频免费是黄的| 日韩欧美在线乱码| 精品国产亚洲在线| 国产精品久久久av美女十八| 极品教师在线免费播放| 后天国语完整版免费观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产探花在线观看一区二区| 午夜两性在线视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 制服丝袜大香蕉在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩欧美 国产精品| 久久精品国产清高在天天线| 中国美女看黄片| 色综合欧美亚洲国产小说| 99久久99久久久精品蜜桃| 日韩欧美 国产精品| 88av欧美| 国产熟女午夜一区二区三区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 宅男免费午夜| 在线观看免费日韩欧美大片| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 91成年电影在线观看| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品久久久久久久电影 | 国产男靠女视频免费网站| 国产午夜精品久久久久久| 在线观看免费日韩欧美大片| 精品国产乱子伦一区二区三区| 精品不卡国产一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜免费激情av| 日本三级黄在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲精品一区av在线观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 999久久久精品免费观看国产| 欧美午夜高清在线| 免费看十八禁软件| 国产人伦9x9x在线观看| av福利片在线观看| av欧美777| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 小说图片视频综合网站| 丰满的人妻完整版| 人成视频在线观看免费观看| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美日韩瑟瑟在线播放| av国产免费在线观看| 日本免费a在线| 最新在线观看一区二区三区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| av国产免费在线观看| 18禁美女被吸乳视频| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| www日本在线高清视频| 一级a爱片免费观看的视频| 丝袜美腿诱惑在线| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美丝袜亚洲另类 | 日本免费一区二区三区高清不卡| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 俺也久久电影网| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲电影在线观看av| 国产精品一区二区三区四区久久| 欧美色视频一区免费| 看免费av毛片| 午夜福利在线在线| 露出奶头的视频| 午夜激情福利司机影院| 欧美高清成人免费视频www| 欧美又色又爽又黄视频| 听说在线观看完整版免费高清| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 国产精品电影一区二区三区| 久久人人精品亚洲av| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一区二区三区国产精品乱码| 久久国产乱子伦精品免费另类| 91av网站免费观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 搞女人的毛片| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久国产乱子伦精品免费另类| 黄色视频,在线免费观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 麻豆一二三区av精品| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 久久久久性生活片| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 男女午夜视频在线观看| 香蕉丝袜av| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产伦在线观看视频一区| 国产在线观看jvid| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av成人av| 99久久精品国产亚洲精品| 国产午夜精品论理片| www日本黄色视频网| a级毛片在线看网站| 九色国产91popny在线| 日韩欧美 国产精品| 舔av片在线| 性欧美人与动物交配| 亚洲欧美日韩东京热| 两个人免费观看高清视频| www.www免费av| 午夜精品一区二区三区免费看| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 色av中文字幕| 精品国产亚洲在线| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | www.自偷自拍.com| 久久精品国产亚洲av高清一级| www.精华液| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 天堂动漫精品| 一进一出抽搐动态| 国产免费男女视频| 免费电影在线观看免费观看| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 88av欧美| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产午夜精品论理片| av天堂在线播放| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产欧美日韩一区二区三| 少妇粗大呻吟视频| 草草在线视频免费看| 日日干狠狠操夜夜爽| 少妇的丰满在线观看| 色综合婷婷激情| 欧美成人午夜精品| 一进一出好大好爽视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久这里只有精品19| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲成人久久性| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 夜夜爽天天搞| 女警被强在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产精品1区2区在线观看.| 丁香欧美五月| 国产精品日韩av在线免费观看| 麻豆av在线久日| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲专区中文字幕在线| 波多野结衣高清作品| www.www免费av| 精品久久久久久久久久久久久| 激情在线观看视频在线高清| 日韩欧美精品v在线| 听说在线观看完整版免费高清| 在线看三级毛片| 波多野结衣巨乳人妻| 成人av一区二区三区在线看| 丰满人妻一区二区三区视频av | 看免费av毛片| 午夜福利高清视频| 99在线人妻在线中文字幕| 俺也久久电影网| 中文字幕高清在线视频| 在线观看一区二区三区| 午夜精品久久久久久毛片777| 超碰成人久久| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲精品中文字幕在线视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 国产一区在线观看成人免费| 午夜激情福利司机影院| 国产精品免费视频内射| 色综合站精品国产| www.熟女人妻精品国产| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 成人手机av| 一本大道久久a久久精品| 1024香蕉在线观看| 国产区一区二久久| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 一个人免费在线观看电影 | 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲中文av在线| 欧美另类亚洲清纯唯美| www.自偷自拍.com| a在线观看视频网站| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产免费av片在线观看野外av| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲熟女毛片儿| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美久久黑人一区二区| 2021天堂中文幕一二区在线观| 黄片大片在线免费观看| 特级一级黄色大片| 亚洲av成人av| 黄色丝袜av网址大全| 午夜免费成人在线视频| 禁无遮挡网站| 久热爱精品视频在线9| 久久久国产精品麻豆| 精品久久久久久久久久久久久| 日本五十路高清| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩大码丰满熟妇| 国产午夜精品论理片| 欧美黑人欧美精品刺激| 成年女人毛片免费观看观看9| 妹子高潮喷水视频| 免费搜索国产男女视频| 国产主播在线观看一区二区| 国产69精品久久久久777片 | 叶爱在线成人免费视频播放| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 久久草成人影院| 精品一区二区三区视频在线观看免费| a级毛片在线看网站| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 国产精品久久久人人做人人爽| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久国产精品影院| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩欧美三级三区| 成熟少妇高潮喷水视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 十八禁人妻一区二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久久久大精品| 欧美一级a爱片免费观看看 | 9191精品国产免费久久| 国产高清视频在线观看网站| 久久人妻av系列| 丁香欧美五月| 国产区一区二久久| 亚洲全国av大片| 一本久久中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品九九99| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产亚洲精品第一综合不卡| 免费在线观看亚洲国产| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 午夜免费激情av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日韩免费av在线播放| 亚洲五月天丁香| 一本综合久久免费| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 伦理电影免费视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品久久久久久久电影 | 免费观看人在逋| 丁香六月欧美| 长腿黑丝高跟| 精品一区二区三区av网在线观看| 黄片小视频在线播放| 成人三级做爰电影| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久九九热精品免费| 手机成人av网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲av电影在线进入| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 精品乱码久久久久久99久播| 国产av一区在线观看免费| 啦啦啦免费观看视频1| 在线看三级毛片| 国产精品综合久久久久久久免费| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久国产精品影院| 老鸭窝网址在线观看| 不卡av一区二区三区| 听说在线观看完整版免费高清| 窝窝影院91人妻| 国产精品,欧美在线| 国产激情久久老熟女| 亚洲自拍偷在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产99白浆流出| 国产精品 国内视频| 国产亚洲精品一区二区www| 国产精品九九99| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久精品国产清高在天天线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美午夜高清在线| www.熟女人妻精品国产| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲人成电影免费在线| 国产高清视频在线播放一区| 久99久视频精品免费| 亚洲电影在线观看av| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲国产精品合色在线| 国产伦人伦偷精品视频| 特级一级黄色大片| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美乱色亚洲激情| 天天添夜夜摸| 韩国av一区二区三区四区| 久久久久久久午夜电影| 国产1区2区3区精品| 变态另类丝袜制服| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久久久久黄片| 99热这里只有是精品50| 欧美黑人欧美精品刺激| 国内精品久久久久精免费| 久久中文看片网| 正在播放国产对白刺激| 国产高清激情床上av| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产不卡一卡二| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产在线观看jvid| 色av中文字幕| 国产精品久久久人人做人人爽| svipshipincom国产片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 老司机午夜福利在线观看视频| 精品人妻1区二区| 99热6这里只有精品| 午夜福利高清视频| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲人与动物交配视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美精品v在线| 女人被狂操c到高潮| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美一级毛片孕妇| av欧美777| 国产久久久一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 成人18禁在线播放| 亚洲成人国产一区在线观看| 久久久精品大字幕| 九色成人免费人妻av| 成人欧美大片| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产亚洲精品一区二区www| 久久中文字幕一级| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 18禁美女被吸乳视频| www日本在线高清视频| 69av精品久久久久久| 午夜激情av网站| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 黄色毛片三级朝国网站| 久久香蕉国产精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 久热爱精品视频在线9| www.www免费av| 久久精品91蜜桃| 后天国语完整版免费观看| 一区二区三区高清视频在线| 99久久国产精品久久久| 亚洲自拍偷在线| 婷婷丁香在线五月| 午夜a级毛片| www.熟女人妻精品国产| 男女床上黄色一级片免费看| 日日夜夜操网爽| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美高清成人免费视频www| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲一区中文字幕在线| 国产成人影院久久av| 不卡一级毛片| 女警被强在线播放| 久久国产乱子伦精品免费另类| 精品午夜福利视频在线观看一区| 免费av毛片视频| 观看免费一级毛片| 亚洲av成人av| 欧美日本视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 2021天堂中文幕一二区在线观| 性欧美人与动物交配| 国产又色又爽无遮挡免费看| 国产av一区在线观看免费| 亚洲男人天堂网一区| 国产激情欧美一区二区| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲av五月六月丁香网| 男插女下体视频免费在线播放| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲人成电影免费在线| 日韩成人在线观看一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美日本视频| 欧美黑人巨大hd| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 午夜精品在线福利| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产精品,欧美在线| 免费在线观看日本一区| 嫩草影院精品99| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久亚洲真实| 国产一区二区三区视频了| 欧美日韩精品网址| 日韩高清综合在线| 12—13女人毛片做爰片一| 免费在线观看亚洲国产| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 亚洲美女视频黄频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品 国内视频| 日本黄大片高清| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品久久久久久久久久久久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 91在线观看av| 中亚洲国语对白在线视频| 妹子高潮喷水视频| 成年免费大片在线观看| 两个人免费观看高清视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久中文字幕一级| 色综合婷婷激情| 99在线人妻在线中文字幕| 国产亚洲精品一区二区www| 免费搜索国产男女视频| 免费在线观看影片大全网站| 性欧美人与动物交配| 色综合亚洲欧美另类图片| 最新美女视频免费是黄的| 色综合站精品国产| 激情在线观看视频在线高清| 欧美成狂野欧美在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产成+人综合+亚洲专区| 1024视频免费在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 人妻久久中文字幕网| 99热只有精品国产| 久久久久免费精品人妻一区二区| 免费看十八禁软件| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久伊人香网站| 麻豆国产97在线/欧美 | 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 天天一区二区日本电影三级| 香蕉国产在线看| 精品人妻1区二区| 欧美中文日本在线观看视频| 久久久久久久久久黄片| 国产精品亚洲美女久久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产三级中文精品| 成人18禁在线播放| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美乱色亚洲激情| 久久性视频一级片| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产在线精品亚洲第一网站| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 色播亚洲综合网| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 欧美黄色淫秽网站| 岛国视频午夜一区免费看| 中文资源天堂在线| 十八禁人妻一区二区| 国产av在哪里看| 国产高清videossex| 天堂动漫精品| 国产免费男女视频| tocl精华| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久人妻av系列| 叶爱在线成人免费视频播放| 中文亚洲av片在线观看爽| av片东京热男人的天堂| 亚洲激情在线av| 看黄色毛片网站| 免费人成视频x8x8入口观看| 成人av一区二区三区在线看| 成人亚洲精品av一区二区| 哪里可以看免费的av片| 亚洲欧美日韩东京热| 国产欧美日韩一区二区精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产探花在线观看一区二区| 欧美zozozo另类| ponron亚洲| 欧美中文综合在线视频| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲中文av在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 黄色片一级片一级黄色片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 久久久久久久精品吃奶| 91字幕亚洲| 在线播放国产精品三级| 99国产综合亚洲精品| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲一区高清亚洲精品| www.999成人在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| av国产免费在线观看| 国产激情欧美一区二区| 国产精品 国内视频| 波多野结衣高清无吗| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲电影在线观看av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 不卡av一区二区三区| 成人av在线播放网站| 男女下面进入的视频免费午夜| 可以在线观看毛片的网站| 一级片免费观看大全| 999久久久国产精品视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲中文av在线| 小说图片视频综合网站| 女人被狂操c到高潮| 国产av不卡久久| 手机成人av网站| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲av美国av| 日韩精品中文字幕看吧| 操出白浆在线播放| 欧美午夜高清在线| 特级一级黄色大片| 欧美日韩一级在线毛片| 草草在线视频免费看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜福利在线观看吧| 男女午夜视频在线观看| 怎么达到女性高潮| a级毛片在线看网站| 国产野战对白在线观看| 国产99久久九九免费精品| 啪啪无遮挡十八禁网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲黑人精品在线| 男人舔奶头视频| 亚洲人成网站高清观看| cao死你这个sao货| 欧美又色又爽又黄视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 两个人视频免费观看高清| 亚洲 国产 在线| 久久热在线av| 大型av网站在线播放| 精品人妻1区二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲五月天丁香| 久久人人精品亚洲av| 看免费av毛片| 免费看十八禁软件| 五月伊人婷婷丁香| 看黄色毛片网站| 后天国语完整版免费观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 亚洲av成人一区二区三| 日本一二三区视频观看|