金烏骨通膠囊中姜黃薄層色譜鑒別方法改進(jìn)

萬紅才，段萍，徐作剛，任永奇

(貴州省黔南州食品藥品檢驗所，都勻 558000)

金烏骨通膠囊中姜黃薄層色譜鑒別方法改進(jìn)

萬紅才，段萍，徐作剛，任永奇

(貴州省黔南州食品藥品檢驗所，都勻 558000)

目的 對金烏骨通膠囊中姜黃薄層色譜(TLC)鑒別方法進(jìn)行改進(jìn)。方法 采用 TLC法對處方中姜黃進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果 改進(jìn)的TLC法可檢出姜黃，且專屬性強(qiáng)，斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。結(jié)論 該方法可用于金烏骨通膠囊姜黃TLC鑒別。

金烏骨通膠囊；姜黃素；色譜法，薄層

金烏骨通膠囊由金毛狗脊、烏梢蛇、姜黃、淫羊藿、葛根、補(bǔ)骨脂等多味藥組成，具有滋補(bǔ)肝腎、祛風(fēng)除濕、活血通絡(luò)的功效。用于肝腎不足、風(fēng)寒濕痹、骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)增生引起的腰腿酸痛、肢體麻木等[1]。處方中姜黃有破血行氣、通經(jīng)鎮(zhèn)痛之功效[2]，為控制該制劑質(zhì)量，選擇姜黃進(jìn)行薄層色譜(thin-layer chromatography，TLC)鑒別。原標(biāo)準(zhǔn)中該項TLC鑒別方法展開劑中含苯，按照國家藥典委員會《中藥分析方法驗證指導(dǎo)原則實施細(xì)則》的相關(guān)要求，苯是強(qiáng)毒性試劑，需進(jìn)行苯的替換。經(jīng)改進(jìn)方法后，采用低毒或無毒的展開劑，展開效果良好，斑點(diǎn)清晰，陰性無干擾。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SK250LHC超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)儀器有限公司)。梅特勒AG135電子天平。

1.2 試藥 姜黃對照藥材(批號：121188-200502)，購于中國食品藥品檢定研究院；金烏骨通膠囊(批號：120203，120202，120201)及陰性樣品(批號：120506)均由貴州盛世龍方制藥有限公司提供；硅膠G預(yù)制板(批號：20110712)，青島海洋化工廠分廠；硅膠G(青島海洋化工有限公司生產(chǎn)，批號：0110916)；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 姜黃的鑒別研究 (原標(biāo)準(zhǔn)鑒別方法)取本品內(nèi)容物1.8 g，加無水乙醇10 mL，浸漬過夜，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液。另取姜黃對照藥材0.1 g，加無水乙醇10 mL，同法制成對照藥材溶液。照TLC法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)實驗，吸取上述兩種溶液各4～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-三氯甲烷-乙醇(49：49：4)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(圖1)。

2.2 提取方法的考察 分別精密稱取金烏骨通膠囊內(nèi)容物細(xì)粉1.0 g，按下述方法處理：①加甲醇20 mL，超聲30 min，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液；②加乙醇20 mL，超聲30 min，濾過，取濾液揮干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液；③加無水乙醇10 mL，浸泡過夜，濾過，濾液濃縮至1 mL，作為供試品溶液；④加甲醇10 mL，水浴回流30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液；取缺姜黃的陰性樣品0.5 g，照方法①提取，作為陰性對照溶液；取姜黃對照藥材0.1 g，照方法①提取，制成對照藥材溶液。取上述各供試品溶液、陰性對照溶液、對照藥材溶液各4 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長365 nm)下檢視。所顯的熒光斑點(diǎn)清晰[2]。結(jié)果：方法①主斑點(diǎn)清晰，方法②③主斑點(diǎn)較淺而且背景較深，方法④主斑點(diǎn)清晰但背景較深；陰性對照無干擾。取方法①為姜黃薄層鑒別的提取方法；此方法操作簡便，可縮短原標(biāo)準(zhǔn)的提取時間，提高工作效率。

1.姜黃對照藥材(批號：121188-200502)；2.金烏骨通膠囊(批號：120203)；3.金烏骨通膠囊(批號：120202)；4.金烏骨通膠囊(批號：120101)；5.缺姜黃的陰性樣品

圖1 姜黃TLC鑒別圖

2.3 展開系統(tǒng)的考察 原展開劑中使用強(qiáng)毒性試劑苯，改進(jìn)后替換為低毒性試劑。①環(huán)已烷-乙酸乙酯-甲酸(20：5：0.1)；②三氯甲烷-甲醇-甲酸(20：1：0.2)；③三氯甲烷-甲醇-甲酸(15：5：0.2)；④三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)；結(jié)果：①主要斑點(diǎn)的分離效果較差；②主要斑點(diǎn)的Rf值太?。虎壑饕唿c(diǎn)的Rf值太大，有拖尾；④主要斑點(diǎn)的Rf值適中，斑點(diǎn)清晰，分離完全；陰性對照無干擾(圖2)。故選取展開系統(tǒng)④列入正文。

2.4 耐用性考察 按照國家藥典委員會《中藥分析方法驗證指導(dǎo)原則實施細(xì)則》的相關(guān)要求，分別進(jìn)行耐用性考察。①溫度的考察：進(jìn)行低溫(4 ℃)、室溫(25 ℃)、高溫(40 ℃)考察，分離結(jié)果均較好。②相對濕度考察：進(jìn)行低濕度(25%)、中等濕度(50%)和高濕度(75%)的考察，結(jié)果表明在上述條件下都能較好分離。③薄層板的考察：選用硅膠G預(yù)制板(青島海洋化工廠分廠，批號：20110712)、自制硅膠G板(青島海洋化工有限公司生產(chǎn)的硅膠G，批號：0110916)兩種薄層板，結(jié)果表明均較好。

1.姜黃對照藥材(批號：121188-200502)；2.金烏骨通膠囊(批號：120203)；3.金烏骨通膠囊(批號：120202)；4.金烏骨通膠囊(批號：120101)；5.缺姜黃的陰性樣品

圖2 姜黃采用展開系統(tǒng)④的TLC鑒別圖

2.5 改進(jìn)結(jié)果 金烏骨通膠囊中姜黃的TLC鑒別方法：取本品內(nèi)容物1.0 g，加甲醇10 mL，超聲提取30 min，放冷，濾過，濾液置水浴上濃縮至2 mL，作為供試品溶液；取姜黃對照藥材0.1 g，同法提取，制成對照藥材溶液；照TLC法實驗，吸取上述溶液各4 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(24：1：0.2)展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈(波長365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

3 討論

缺姜黃陰性對照溶液在此薄層色譜系統(tǒng)中無干擾，故可采用姜黃作為對照藥材對藥品中的姜黃進(jìn)行定性鑒別；色譜中主斑點(diǎn)清晰明顯，位置居中，溫濕度或薄層板厚度對色譜效應(yīng)的影響較小，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性較好，此方法可作為金烏骨通膠囊中姜黃藥材的薄層色譜定性鑒別。

[1] 國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)(試行)頒布件[S].WS-10140(ZD-0140)-2002.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：247-248.

2014-01-18

2014-03-12

萬紅才(1977-)，男，貴州甕安人，主管藥師，研究方向：藥品檢驗。電話：(0)15086173108，E-mail：397879050@qq.com。

R286；R927.1

B

1004-0781(2015)02-0261-02

DOI 10.3870/yydb.2015.02.033