小偃6號 TaWRKY45基因在高溫抗條銹病中的功能研究

郭忠峰，陶 飛，田 瑋，楊家榮，胡小平

(西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室，陜西楊凌 712100)

小偃6號 TaWRKY45基因在高溫抗條銹病中的功能研究

郭忠峰，陶 飛，田 瑋，楊家榮，胡小平

(西北農(nóng)林科技大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院/旱區(qū)作物逆境生物學(xué)國家重點實驗室，陜西楊凌 712100)

小偃6號是一個具有全生育期高溫抗條銹性的小麥品種。在小麥抗病研究中發(fā)現(xiàn) TaWRKY45轉(zhuǎn)錄因子參與了對多種病害的調(diào)控。為了研究 TaWRKY45在小偃6號高溫抗條銹過程中的功能，以小偃6號為試驗材料，通過實時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative PCR，qRT-PCR)研究 TaWRKY45的表達(dá)模式，并利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默(VIGS)技術(shù)，研究了 TaWRKY45沉默后對小偃6號高溫抗條銹病的影響。結(jié)果表明， TaWRKY45在小麥根、莖、葉中均有表達(dá)，根中的表達(dá)量最高。當(dāng)小麥?zhǔn)艿剿畻钏?SA)、條銹菌、高溫(20 ℃)脅迫時， TaWRKY45表達(dá)量均上調(diào)。對小麥 TaWRKY45基因進(jìn)行沉默處理后，沉默葉片(BSMV:TaWRKY45-as)的條銹菌菌落增長，壞死細(xì)胞數(shù)目減少。 TaWRKY45正向參與了小偃6號的高溫抗條銹病過程。

小偃6號；高溫；條銹； TaWRKY45；VIGS

小麥條銹病是由條形柄銹菌(Pucciniastriiformisf. sp.tritici,Pst)引起的世界性病害，嚴(yán)重威脅著小麥的生產(chǎn)，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1]?，F(xiàn)有的抗條銹病小麥品種常因條銹菌生理小種毒性的變異而喪失抗性。大量實踐證明，選育非小種?；缘某志每共∑贩N是防治條銹病最有效的措施[2-3]。小麥品種的高溫抗條銹性是指在相對較高環(huán)境溫度下表達(dá)的一種低反應(yīng)型抗病性[4-8]。Qayoum和Line[4]提出小麥高溫抗條銹性具有持久性特征，并對高溫抗條銹性的遺傳規(guī)律進(jìn)行了研究。20世紀(jì)80年代以來，我國學(xué)者針對國內(nèi)小麥品種的高溫抗病性進(jìn)行了研究，系統(tǒng)鑒選出包括小偃6號在內(nèi)的一系列具有高溫抗條銹性的小麥品種[9-10],并且在高溫抗條銹性的生化機(jī)制[11]、超微結(jié)構(gòu)特征[12]、表達(dá)規(guī)律[6,13-14]等方面也進(jìn)行了深入研究，但對小偃6號高溫抗條銹性的分子機(jī)制方面缺乏研究。

WRKY45轉(zhuǎn)錄因子在抗病過程中起著重要的作用。在水稻中， OsWRKY45的過表達(dá)可以提高水稻對稻瘟病和白葉枯的抗病性[15-16]。在小麥中， TaWRKY45的過表達(dá)可以增強小麥對赤霉病、白粉病和葉銹病的抵抗力[17-19]，但 TaWRKY45在小麥高溫抗條銹性中的功能仍未見報道。為了深入了解 TaWRKY45在小偃6號高溫抗條銹性的功能，本試驗對條銹菌和高溫雙重脅迫后的 TaWRKY45表達(dá)水平進(jìn)行測定，并對 TaWRKY45沉默處理后的植株進(jìn)行組織病理研究，以明確 TaWRKY45在小偃6號高溫抗條銹性的作用，為進(jìn)一步解釋小偃6號受高溫誘導(dǎo)后由感病轉(zhuǎn)為抗病的分子調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試小麥品種：小偃6號(高溫誘導(dǎo)的抗條銹病品種)，由西北農(nóng)林科技大學(xué)小麥研究所提供。

供試菌株：小麥條形柄銹菌(Pucciniastriiformisf. sp.tritici,Pst)CYR(Chinese Yellow Rust)32號生理小種夏孢子，由甘肅省農(nóng)科院植物保護(hù)研究所提供。

1.2 溫度處理

以小麥接種條銹菌0 h為計時點，待條銹菌侵染葉片至潛育后期(192 h，初顯花斑)，將接菌植株和對照植株各分為兩組：一組常溫(15 ℃，光照周期為16 h，光照強度為8 000～10 000 lx，相對濕度為60%～80%)培養(yǎng)；另一組高溫(20 ℃，光照周期為16 h，光照強度為8 000～10 000 lx，相對濕度為60%～80%)處理24 h后，轉(zhuǎn)到常溫條件培養(yǎng)，于培養(yǎng)0、48、96、192、204、216、240、264和312 h時對不同處理的植株進(jìn)行采樣，液氮速凍并于-80 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 激素處理及組織特異性檢測材料的采集

選10～15粒飽滿的小偃6號種子均勻播種于營養(yǎng)缽中，置光照培養(yǎng)箱(15 ℃，光照周期為16 h，光照強度為8 000～10 000 lx，相對濕度為60%～80%)中培養(yǎng)。待植株生長到二葉期，參照Wang等[20]的方法，對麥苗噴灑水楊酸(SA)(100 μmol·L-1)，并于處理0、0.5、2、6、12和24 h時進(jìn)行采樣，液氮速凍并于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

以同樣的栽培方法進(jìn)行栽培，待植株生長到二葉期，采集麥苗的根、莖、葉，液氮速凍并于-80 ℃保存，作為基因表達(dá)的組織特異性檢測材料。

1.4大麥條紋花葉病毒(Barleystripemosaicvirus,BSMV)介導(dǎo)的TaWRKY45基因沉默

依據(jù)小偃6號苗期高溫誘導(dǎo)抗條銹病的轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果(數(shù)據(jù)尚未發(fā)表)，獲得 TaWRKY45 CDS序列。采用3′-Full RACE Core Set with PrimeScriptTM RTase(TaKaRa)試劑盒獲得 TaWRKY45 3′端完整序列。在3′端序列設(shè)計引物(表1)，并通過PCR擴(kuò)增，獲得140 bp的 TaWRKY45片段。參照Wang等[20]的方法，將該目的片段連接到BSMV γ載體質(zhì)粒上，并在二葉期麥苗的第二葉上接種病毒，然后放置人工培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；接種病毒后第9天，對產(chǎn)生花斑癥狀的葉片接種CYR32的新鮮夏孢子。未沉默基因的植株(BSMV:00)作為陰性對照，沉默TaPDS的植株(BSMV:TaPDS)作為陽性對照。

1.5 組織學(xué)觀察

接種病毒的小麥植株接種條銹菌后，黑暗保濕(10 ℃～13 ℃，相對濕度為80%～100%)24 h，然后放置在常溫下培養(yǎng)，并在接菌后的48 h和120 h時采樣。接菌后第8天，按照1.2中的方法對植株進(jìn)行不同溫度處理。將植株轉(zhuǎn)至20 ℃培養(yǎng)那一刻記為高溫處理0 h，并開始對常溫和高溫條件下的沉默植株、未沉默植株進(jìn)行采樣。采樣的時間點依次為高溫處理0、48、72、120 h。每個時間點隨機(jī)選取6～8株植株，隨機(jī)采集8～10段葉片。參照Wang等[20]的方法，用Calcofluor M2R White New染色液進(jìn)行染色，并在顯微鏡(Olympus BX-51 microscope)下觀察潛育前期的菌絲長度、吸氣母細(xì)胞數(shù)目、壞死細(xì)胞數(shù)目以及潛育后期的菌落線性長度、夏孢子堆線性長度、壞死細(xì)胞數(shù)目。每個處理選取30～50個侵染點進(jìn)行統(tǒng)計。

1.6 實時定量PCR

對1.5中的沉默植株、未沉默植株在不同溫度處理0、48、72、120 h進(jìn)行采樣。依照SV Total RNA Isolation System試劑盒和Prime Script RT reagent Kit試劑盒操作步驟進(jìn)行RNA提取和反轉(zhuǎn)錄。擴(kuò)增體系25 μL：12.5 μL Ultra SYBR Mixture，上、下游引物各1 μL，9.5 μL Nuclease-Free Water，1 μL cDNA。 Ta26s 作為內(nèi)參基因。在實時檢測擴(kuò)增定量儀(Thermal Cycler iQ5)上進(jìn)行擴(kuò)增。引物用軟件Primer Premier 5設(shè)計。試驗所用引物如表1。

表1 本研究所用的引物Table 1 Primers used in this study

下劃線序列分別為PacI、NotI的酶切位點。

The underlined sequences arePacI andNotI enzyme loci,respectively.

1.7 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)分析采用SAS v8.01統(tǒng)計軟件。在假設(shè)方差同質(zhì)性的前提下，常溫處理的空載(BSMV:00)和目的基因載體(BSMV: TaWRKY45-as)轉(zhuǎn)染葉片中的壞死細(xì)胞數(shù)目、吸氣母細(xì)胞數(shù)目以及菌絲長度的比較采用Student’s t-test。其他統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用Duncan’s進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 TaWRKY45序列分析

序列分析表明， TaWRKY45基因具有完整的開放閱讀框(ORF)，編碼293個氨基酸。通過鄰近法建樹分析發(fā)現(xiàn)該蛋白與位于WRKY第三家族的水稻(Oryzasativa) OsWRKY45達(dá)到99%的相似性(圖1A)。蛋白結(jié)構(gòu)域分析表明，TaWRKY45在N端含有一個保守的WRKYGQK，在C端含有一個C2-HC(C-X7-C-X23-H-X1-C)型的鋅指結(jié)構(gòu)，具有WRKY第三家族成員的典型結(jié)構(gòu)特征(圖1B)。

2.2TaWRKY45基因表達(dá)的組織特異性

利用實時定量PCR對小麥根、莖、葉中的 TaWRKY45表達(dá)量進(jìn)行測定。結(jié)果(圖2)顯示， TaWRKY45在小偃6號根、莖、葉中的表達(dá)量依次為0.038、0.024和0.022。根中的表達(dá)量顯著高于莖、葉中表達(dá)量(P<0.05)。

2.3 TaWRKY45的時序表達(dá)特征

由圖3可以看出，在條銹菌侵染小偃6號的早期，從48 h到192 h，常溫下接菌處理的 TaWRKY45表達(dá)水平為不接菌處理的5～10倍，存在顯著差異(P<0.05)。在192 h進(jìn)行高溫處理，從204 h到264 h，高溫接菌處理的 TaWRKY45表達(dá)量顯著高于高溫對照(P<0.05)，尤其在接種后的216 h(高溫處理24 h)， TaWRKY45的相對表達(dá)量為0.431，顯著高于其他處理(P<0.05)(圖3)。

水稻和擬南芥來自于NCBI數(shù)據(jù)庫。序列號分別為DAA05075(OsWRKY10)、DAA05078(OsWRKY13)、DAA05084(OsWRKY19)、DAA05110(OsWRKY45)、DAA05111(OsWRKY46)、DAA05118(OsWRKY53)、DAA05133(OsWRKY68)、DAA05136(OsWRKY71)、DAA05137(OsWRKY72)、DAA05139(OsWRKY74)、Q9SV15(AtWRKY11)、AAM34736(AtWRKY33)、Q9SAH7(AtWRKY40)、Q8H0Y8(AtWRKY41)、Q9SUP6(AtWRKY53)、Q8VWQ5(AtWRKY50)、Q9SHB5(AtWRKY55)、Q9LP56(AtWRKY65)、AAL13046(AtWRKY70)、AAL50784(AtWRKY75)。標(biāo)亮部分表示保守氨基酸。

Rice andArabidopsissequences are from NCBI database. Accession No.:DAA05075(OsWRKY10),DAA05078(OsWRKY13),DAA05084(OsWRKY19),DAA05110(OsWRKY45),DAA05111(OsWRKY46),DAA05118(OsWRKY53),DAA05133(OsWRKY68),DAA05136(OsWRKY71),DAA05137(OsWRKY72),DAA05139(OsWRKY74),Q9SV15(AtWRKY11),AAM34736(AtWRKY33),Q9SAH7(AtWRKY40),Q8H0Y8(AtWRKY41),Q9SUP6(AtWRKY53),Q8VWQ5(AtWRKY50),Q9SHB5(AtWRKY55),Q9LP56(AtWRKY65),AAL13046(AtWRKY70),AAL50784(AtWRKY75). The conserved amino acids are marked by different colors.

圖1TaWRKY45蛋白與不同家族WRKY蛋白的系統(tǒng)發(fā)育樹(A)及與同源序列的比較(B)

Fig.1 Dendrogram(A) of TaWRKY45 with other WRKYs from various plant species and alignment (B) of TaWRKY45 with its homologues

誤差線上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

Different letters above bars mean significant difference of TaWRKY45 expression among tissues(P<0.05).

圖2TaWRKY45基因在不同組織的表達(dá)

Fig.2ExpressionprofilesofTaWRKY45indifferentwheattissues

2.4TaWRKY45在激素SA誘導(dǎo)下的表達(dá)

小麥葉片經(jīng)水楊酸(SA)處理后， TaWRKY45相對表達(dá)量從0.5 h開始迅速上調(diào)，2 h達(dá)到最大值，隨后恢復(fù)到初始水平。0.5 h和2 h的表達(dá)量與初始的表達(dá)量存在顯著差異(P<0.05)(圖4A)。對SA信號通路相關(guān)防御基因 TaGlu2在條銹菌侵染后期的轉(zhuǎn)錄水平測定結(jié)果顯示，高溫處理后 TaGlu2相對表達(dá)量遞增，72 h后高溫處理葉片的表達(dá)量高于常溫處理葉片，在120 h高溫未沉默葉片的表達(dá)量是同處理下沉默葉片的1.5倍(圖4B)。

2.5TaWRKY45沉默效果及高溫誘導(dǎo)表達(dá)

NT mock:常溫不接菌；HT mock:高溫不接菌。誤差線上不同字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。表4、表5同。

NT mock:Normal temperature without inoculation of Pst; HT mock:High temperature without inoculation of Pst.Different letters above each error bar mean significant difference among treatments(P<0.05).The same in table 4 and table 5.

圖3TaWRKY45在條銹菌侵染潛育后期高溫(HT)和常溫(NH)處理下的表達(dá)水平

Fig.3 Expression levels of TaWRKY45 in response to normal temperature(NT) and high temperature (HT) treatment after inoculation with Pst

小偃6號第二葉接種大麥條紋花葉病毒(BSMV)9 d后，小麥葉片出現(xiàn)花葉條紋癥狀；同時沉默八氫番茄紅素脫氫酶基因(PDS)的葉片呈現(xiàn)光漂白癥狀(圖5A)，表明病毒誘導(dǎo)的基因沉默體系工作良好。 TaWRKY45的沉默結(jié)果顯示，與對照(BSMV:00)相比，接菌后0、24、48、120 h， TaWRKY45在沉默葉片(BSMV:WRKY45-as)中的相對表達(dá)量下降了50%～70%，表明 TaWRKY45沉默效果較好(圖5D)。高溫處理條件下，相較于BSMV:00，BSMV:WRKY45-as中的孢子堆數(shù)目增多，抗病性下降，但與常溫處理條件下的BSMV:WRKY45-as相比，孢子堆數(shù)量減少，抗病性增強(圖5B、C)。這與沉默葉片在常溫處理下 TaWRKY45表達(dá)量較低的結(jié)果一致(圖5E)。

2.6TaWRKY45沉默后的病原菌侵染和寄主反應(yīng)

接菌后第8天，將沉默和未沉默植株進(jìn)行高溫處理，此時標(biāo)記為高溫處理0 h。從0 h開始對病原菌的擴(kuò)展和寄主壞死反應(yīng)進(jìn)行觀察。從0 h至24 h，沉默葉片的菌落長度比未沉默葉片的長，其中，24 h未沉默葉片的菌落長度最短，為1 065.48 μm，與其他處理間存在顯著差異(圖6A)。高溫處理后24 h至72 h，高溫處理的壞死細(xì)胞數(shù)目約為常溫處理的2倍；特別是72 h未沉默葉片的壞死數(shù)目顯著高于沉默葉片的(圖6B)。

圖4 TaWRKY45在水楊酸處理下(A)的表達(dá)水平和水楊酸途徑相關(guān)基因 TaGlu2(B)的轉(zhuǎn)錄變化

Fig.4 Expression levels of TaWRKY45 in response to SA temperature(A) and the transcriptional changes in the SA pathway-related gene TaGtU2(B)

3 討 論

WRKY轉(zhuǎn)錄因子不僅在植物生長發(fā)育中發(fā)揮作用[21]，而且在植物抗病反應(yīng)中，處于重要的地位[15-20]。研究表明，WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物抗病中發(fā)揮的作用不盡相同。正向或負(fù)向調(diào)控植物和病原菌互作的現(xiàn)象都存在。例如，在水稻中，OsWRKY53和OsWRKY22正向參與水稻抵抗稻瘟病[22]。而OsWRKY62是Xa21(類受體激酶)介導(dǎo)的抗水稻白葉枯病過程中的負(fù)調(diào)控子[23]。在小麥中，王軍娟等[21]研究發(fā)現(xiàn)，TaWRKY70正向參與小偃6號高溫抗條銹病過程，而TaWRKY49、TaWRKY62負(fù)向參與該過程。本研究中， TaWRKY45在條銹菌侵染潛育后期經(jīng)高溫處理后，其表達(dá)量被誘導(dǎo)上調(diào)，表明 TaWRKY45正向參與到高溫和條銹菌雙脅迫過程中。

大多數(shù)WRKY轉(zhuǎn)錄因子是通過SA信號通路進(jìn)行防御反應(yīng)[16]。在水稻中，OsWRKY45參與到水楊酸(SA)信號通路中，抵抗稻瘟病菌和白葉枯病菌的侵染[15-17]。在擬南芥中，AtWRKY70充當(dāng)SA介導(dǎo)的信號通路的激活子，抵抗活體寄生菌白粉菌[24]。本研究中，小麥噴施SA后 TaWRKY45表達(dá)量上調(diào)(圖4-A)，與前人研究結(jié)果[18-19]相一致。同時發(fā)現(xiàn)SA通路相關(guān)基因 TaGlu2受條銹菌和高溫雙脅迫后表達(dá)上調(diào)，并且在高溫處理的 TaWRKY45沉默葉片的表達(dá)量低于未沉默葉片的表達(dá)量。表明 TaWRKY45涉及的SA信號通路可能在小麥高溫抗條銹病中起到重要作用。

A：在接毒后第9天，大麥條紋花葉病毒產(chǎn)生變黃的花葉癥狀。Mock：植株接種FES buffer；Ⅰ:BSMV:00；Ⅱ:BSMV：TaPDS；Ⅲ:BSMV：TaWRKY45-as；B、C：產(chǎn)生花斑的葉片接種條銹菌后經(jīng)常溫(NT,15 ℃)和高溫(HT，20 ℃)處理。Mock1和Mock2：小麥葉片預(yù)先進(jìn)行FES buffer涂抹處理，接種條銹菌后分別進(jìn)行常溫和高溫處理；D：接種條銹菌后在常溫下， TaWRKY45沉默效率的檢測；**： TaWRKY45表達(dá)水平在沉默植株和未沉默植株差異顯著(P<0.01)；E： TaWRKY45在沉默植株和未沉默植株高溫或常溫后的誘導(dǎo)表達(dá)。

A：Mild chlorotic mosaic symptoms of BSMV at 9 days post-inoculation(dpi). Mock:Plant treated with FES buffer;Ⅰ:BSMV:00；Ⅱ:BSMV：TaPDS；Ⅲ:BSMV：TaWRKY45-as.B,C:Disease symptoms on the leaves challenged with Pst race CYR32 and then subjected to normal-temperature(NT,15 ℃，B) and high-temperature(HT,20 ℃,C) treatment.Mock1 and Mock2 represent wheat plants were pre-inoculation with FES,and then inoculated with CYR32 and subjected to NT and HT treatments,respectively；D：Efficiency of silencing of TaWRKY45 by VIGS under NT treatment after Pst inoculation；**：Significant differences in the mean TaWRKY45 expression level between the BSMV:TaWRKY45-as-inoculated plants and BSMV:00-inoculated plants with Student’st-test(P<0.01)；E：Induction of TaWRKY45 in the plant pre-inoculated with BSMV:00 or BSMV:TaWRKY45-as under HT or NT treatments.

圖5TaWRKY45在小麥中全生育抗條銹菌的功能分析

Fig.5 Function analyses of TaWRKY45 during all-stage plant resistance to Puccinia striiformis f.sp.tritici (Pst)using a barley stripe mosaic virus (BSMV)-induced gene silencing (VIGS) system

圖6 溫度對條銹菌菌落長度(A)和寄主壞死細(xì)胞數(shù)目(B)的影響

常溫下BSMV:TaWRKY45-as的孢子堆數(shù)量比BSMV:00多；BSMV:TaWRKY45-as的菌落線性長度顯著大于BSMV:00。表明沉默TaWRKY45后，植株的抗病能力減弱。由此推測 TaWRKY45在常溫下也有一定的抗條銹作用。這可能是由于常溫下 TaWRKY45受條銹菌誘導(dǎo)后表達(dá)上調(diào)(圖3)，從而誘導(dǎo)相關(guān)防御基因表達(dá)，增強植物的抗病能力，抑制菌絲的生長。而沉默 TaWRKY45基因的植株，由于 TaWRKY45的表達(dá)量減少，相關(guān)防御基因表達(dá)受抑，植株抗病能力減弱，對菌絲生長的抑制減弱。

在水稻中，SA通過激活分裂原蛋白激酶(OsMAP6)將WRKY45蛋白磷酸化從而具有活性[25]。磷酸化的WRKY45通過結(jié)合W-boxes來激活基因的轉(zhuǎn)錄[15]。Inoue等[26]研究發(fā)現(xiàn)，抗病基因 Pb1(Panicle blast 1)是通過與 WRKY45互作來提高水稻抗葉枯病的能力，敲除 WRKY45后水稻的抗病能力下降。程洪濤等[27]發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)錄因子WRKY45-2、WRKY13、WRKY42共同調(diào)控水稻對稻瘟病的抗性。本研究發(fā)現(xiàn)，SA可誘導(dǎo) TaWRKY45上調(diào)表達(dá)(圖4A)，而植株經(jīng)接菌和高溫處理后，SA信號通路相關(guān)基因 TaGlu2表達(dá)上調(diào)(圖4B)， TaWRKY45正向參與小偃6號高溫抗條銹過程，但對 TaWRKY45的分子調(diào)控機(jī)制還不清楚。結(jié)合前人和本研究結(jié)果，推測小偃6號受到條銹菌和高溫雙重脅迫后引發(fā)SA信號通路，SA通過激活某個激酶將WRKY45磷酸化，進(jìn)而通過W-boxes結(jié)合到病程相關(guān)蛋白引發(fā)抗病反應(yīng)。也有可能磷酸化的WRKY45與其他轉(zhuǎn)錄因子形成復(fù)合體共同調(diào)控小偃6號對條銹菌的抗性。

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FunctionsofTaWRKY45ontheHigh-TemperatureResistancetoStripeRustinXiaoyan6

GUOZhongfeng,TAOFei,TIANWei,YANGJiarong,HUXiaoping

(College of Plant Protection/State Key Laboratory of Crop Stress Biology for Arid Area,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China)

Xiaoyan 6 is a wheat cultivar with all-stage high temperature resistance to stripe rust. It was reported that TaWRKY45 as a transcriptional factor confers resistance to multiple diseases in wheat. In order to explore the functions of TaWRKY45 on high temperature resistance to stripe rust in Xiaoyan 6,this study characterized its expression pattern by real-time RT-PCR and analyzed its resistance by virus-induced gene silencing(VIGS) technology. The results showed that TaWRKY45 expressed in roots,stems and leaves. And the expression of TaWRKY45 in roots was the highest among the three tissues. TaWRKY45 was upregulated in response to salicylic acid(SA),high temperature(20 ℃) and infection ofPucciniastriiformisf. sp.tritici(Pst). The length of colony in BSMV: TaWRKY45-as seedlings was longer than that in BSMV:00 seedlings,and the number of necrotic cell in BSMV: TaWRKY45-as seedlings was less than that in BSMV:00 seedlings. It can be concluded that TaWRKY45 positively involved in high temperature resistance to stripe rust in Xiaoyan 6.

Xiaoyan 6;High temperature;Stripe rust; TaWRKY45; VIGS

2017-03-24

2017-04-16

國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃項目(2013CB127700)；國家自然科學(xué)基金項目(31071640)

E-mail：1264623062@qq.com

胡小平(E-mail:xphu@nwsuaf.edu.cn)；楊家榮(E-mail:yljryang@tom.com)

時間：2017-10-11

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://kns.cnki.net/kcms/detail/61.1359.S.20171011.1601.014.html

S512.1；S332

A

1009-1041(2017)10-1318-09