紫外分光光度法測(cè)定銀杏葉中總黃酮的含量

王衛(wèi)華，彭婷婷，晁建敏＊，安蕓,苗方

（菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校 山東菏澤274000;?菏澤市牡丹大藥房連鎖公司）

銀杏（Ginkgo biloba L）又名白果,是我國(guó)的特種植物,食用、綠化環(huán)境。特別在醫(yī)藥上有很高的利用價(jià)值。銀杏葉中黃酮類化合物可分為黃酮、雙黃酮和兒茶素等類化合物，共有36種，主要以苷的形式存在。銀杏黃酮的元有7種，即槲皮素、山柰素、異鼠李素、楊梅素、芹菜素、木草素、三粒小麥黃酮等，前3種是其主要成分［1］。在銀杏葉及提物（GBE）的質(zhì)量控制中主要檢測(cè)這3種黃酮苷元的含量。銀杏葉中黃酮類化合物具有捕獲游離基和抑制血小板活化因子、擴(kuò)張腦血管、促進(jìn)血液循環(huán)、抗過氧化等功能，從而廣泛用于治療冠心病、心絞痛，治療老年癡呆癥和增強(qiáng)記憶功能，防治皮膚病、脫發(fā)等疾病［2］。銀杏所特有的值逐步為我們所重視。對(duì)銀杏中黃酮的總含量測(cè)定的方法較多，為了更好地開展銀杏葉的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究，擬建立了分光光度法檢測(cè)銀杏葉總黃酮含量的方法，從而為銀杏葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供一種新的依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 UV-2401分 光光度計(jì)（島津）。

1.2 試劑 蘆丁對(duì)照品（北京藥品生物制品檢定所）其余試劑均為分析純銀杏葉：采收于菏澤郊區(qū)，采后沖洗并將其在烘箱60℃烘至手捏碎，粉碎（60目 ）碎片貯于干燥器中置暗處保存。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取蘆丁對(duì)照品0.025 g（120℃干燥至恒重）置50 ml容量瓶中，加70%乙醇適量，水浴加熱，溶解，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.5 mg／ml的對(duì)照品溶液。

2.2.供試品溶液的配制 精密稱取銀杏葉5.1004 g至100 ml的錐形瓶中，加70%乙醇75 ml，超聲45 min［3］，冷卻，過濾，濾液蒸干 ，用 70%乙醇定容于100 ml容量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 精密移取對(duì)照品溶液2.00 ml置10 ml容量瓶中，按順序依次加入5%NaNO2溶液 0.4 ml混勻 ，放置6 min，加10%AlCl3溶液 0.4 ml搖勻，放置6 min，再加入4%NaOH溶液4 ml，并加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻放置15min［4］。同法以對(duì)照品溶液吸取0 ml配制的10 ml溶液作為空白，在400～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定它們的最大吸收波長(zhǎng)為510 nm。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密吸取對(duì)照品貯備液0.50、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 ml分別置于 10 ml容量瓶中，按方法配制，以試劑作空白，于510 nm處分別測(cè)其吸收度。以對(duì)照品濃度C（mg/ml）為橫坐標(biāo)，吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程：A=26.208C+0.0318（ r=0.9993），線性范圍為（0.025 mg～0.250 mg）/ml。

2.5 樣品的測(cè)定 取供試品溶液3 ml 3份，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，制備待測(cè)溶液，以試劑為空白，在510 nm處測(cè)定其吸光度，代入回歸方程中得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，平均百分含量為1.56%。（見表1。）

表1 樣品中總黃酮的含量測(cè)定

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取對(duì)照品試液1份每隔10 min測(cè) 1次吸光度，顯示在 60 min內(nèi)穩(wěn)定，RSD為0.43% 。

2.7 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一樣品供試液2 ml，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制”中的方法測(cè)定吸收度，RSD為1.08% ，表明儀器精密度良好。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（mg,%）

2.8 樣品加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.10 ml、0.20 ml、0.30 ml各1份，分別加入已知含量的供試品溶液3.00 ml，結(jié)果見表2。由表中可以看出，分光光度法測(cè)定銀杏葉總黃酮中蘆丁平均回收率為99.4%，RSD為0.44% ，回收率良好。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)所提取的黃酮類化合物溶液用顯色法測(cè)定時(shí)會(huì)產(chǎn)生渾濁現(xiàn)象，因此該法不能準(zhǔn)確地測(cè)定總黃酮的含量。高相液相色譜法無疑是使用最多，也是準(zhǔn)確度最為可靠的分析方法，但是分析時(shí)間相對(duì)長(zhǎng)、分離效率低、即使采用梯度洗脫技術(shù)也難使某些成分完全分離，且儀器比較昂貴，色譜柱易被污染，而且污染后難于清洗，使柱的使用壽命縮短，在工業(yè)中不易推廣［5］。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，以蘆丁為對(duì)照品，采用紫外分光光度法測(cè)定其總黃酮含量，操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確。從紫外掃描圖譜上發(fā)現(xiàn)的510 nm波長(zhǎng)總黃酮含量測(cè)定的方法經(jīng)檢驗(yàn)是可行的，是一種簡(jiǎn)便快捷的方法。

針對(duì)含量測(cè)定配制供試品溶液的不同提取方法，不同提取溶劑，不同溶劑體積及不同提取時(shí)間分別考察，結(jié)果以75 ml 70%乙醇超聲提取45 min含量最高，雜質(zhì)較少。

［1］ 王飛娟.銀杏葉中黃酮類化合物的研究進(jìn)展[J].西北藥學(xué)雜志，2010 ，25（2）：155-156

［2］ 于華忠，李國(guó)章，曹庸，等.銀杏黃酮的含量測(cè)定［J］.中國(guó)林副特產(chǎn)，2005，4（2）：22-22.

［3］ 李春紅，潘宏，田吉.香椿嫩葉中總黃酮的含量測(cè)定［J］.瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 2010，33（4）：380-382.

［4］ 王浩江，孫體健，曹曉峰.月季花中總黃酮含量測(cè)定［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38（4）：318-319.

［5］ 王新雯，海洪，金文英等.黃酮類化合物含量測(cè)定方法的研究進(jìn)展［J］.遼寧化工，2008，37（12）：857-860.