BPTF因子在肺腺癌中的表達及臨床意義

代 萌，任麗娜，江 玲，王齊敏，劉 媛，劉春芳

(1.大連醫(yī)科大學附屬大連市中心醫(yī)院 呼吸內科, 遼寧 大連116000; 2. 大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院 病理科, 遼寧 大連 116027)

代 萌(1982-)，女，主治醫(yī)師。E-mail：446916982@qq.com

劉春芳，教授。E-mail：zxyylcf611@126.com

論著

10.11724/jdmu.2017.05.04

BPTF因子在肺腺癌中的表達及臨床意義

代 萌1，任麗娜1，江 玲1，王齊敏2，劉 媛1，劉春芳1

(1.大連醫(yī)科大學附屬大連市中心醫(yī)院 呼吸內科, 遼寧 大連116000; 2. 大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院 病理科, 遼寧 大連 116027)

目的探討溴區(qū)PHD結構域轉錄因子(bromodomain and PHD domain transcription factor, BPTF)在肺腺癌中的表達及其對預后的影響。方法收集來自大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院病理科及上海超芯公司的90例肺腺癌及其癌旁的組織標本, 通過免疫組化檢測BPTF因子表達情況,分析其與患者臨床病理資料的相互關系, 并對隨訪資料進行Kaplan-Meier生存分析和Cox回歸分析。結果BPTF因子在肺腺癌高表達率為68.9%，與癌旁組織(1.3%)比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。BPTF因子表達與腫瘤淋巴結轉移及TNM臨床分期有關(P均<0.05)。BPTF高表達5年總生存率為44.2%，低表達為70.77%，兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。多因素分析顯示臨床分期以及BPTF的表達水平為肺腺癌患者的預后影響因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。結論BPTF高表達對肺腺癌患者預示更差的預后。

BPTF；肺腺癌；預后

肺癌近年來其發(fā)病率和死亡率在全球范圍內呈持續(xù)明顯上升的趨勢[1]，BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) 是近年來發(fā)現(xiàn)的新的癌蛋白，作為NURF(nucleosome remodeling factor)的最大的一個亞基，在正常細胞中起到參與染色質重塑的作用。然而當其過度表達時，BPTF對黑色素細胞瘤及肺癌細胞起到重要的發(fā)生發(fā)展的作用。目前發(fā)現(xiàn)BPTF通過激活MAPK及PI3K通路同時抑制caspase-8細胞凋亡途徑來促進腫瘤細胞的生長。然而，在人類肺腺癌樣本的水平上研究BPTF對患者預后的影響目前報道很少，本研究旨在探討B(tài)PTF在肺腺癌中的表達情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 病例資料

共收集90例肺腺癌病例，其中75例來自于上海超芯公司，直接購買該公司組織微陣列芯片，另外15例來自于于大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院。90例樣本均有其癌旁正常肺組織作為對照。所有病例均為2004年1月至2010年12月手術治療的肺腺癌患者，且手術前未行放化療，患者均有較完整的臨床病理資料，包括年齡，性別，家族史，手術后病理信息等等。本研究已通過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2 隨 訪

大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院來源的病例，通過電話隨訪及門診復查兩個途徑進行隨訪跟蹤，隨訪內容主要為生存情況，術后輔助治療情況，復發(fā)，影像學檢查及腫瘤標志物水平。隨訪時間截止為患者發(fā)病后5年，最后截止時間為2016年12月。本研究的終點事件定義為任何原因導致的死亡。總生存時間為術后第1天到任何原因導致死亡的時間。上海超芯公司來源的的病例其隨訪資料由公司提供。

1.3 IHC檢測BPTF方法及評判標準

免疫組織化學染色(IHC)：經二甲苯脫蠟，梯度水化，除去內源性過氧化物酶(Peroxidase)活性，高壓抗原修復，PBS緩沖液洗滌，IHC油性筆繞切片周圍劃圈，圈好后滴加羊血清封閉30 min。一抗孵育：BPTF(購自Abcam公司)按1∶50進行稀釋，覆蓋整張切片，4 ℃孵育過夜。再PBS緩沖液洗滌4次，每次3 min。二抗孵育：滴加二抗，室溫孵育1 h。PBS緩沖液洗滌4次，每次3 min。DAB顯色2～3 min，清水沖洗終止反應。蘇木素復染1～2 min，鹽酸酒精分化1～3 s。脫水干燥，中性樹脂封片，觀察。

陽性結果判定標準：兩名資深病理醫(yī)師依據(jù)染色強弱的程度作出評分。依據(jù)染色深淺把“-”評為0分，“+”評為1分，“++”評為2分，“ +++”評為3分，4個等級。依據(jù)組織染色面積把<25%評為1分，25%～50%評為2分，50%～75%評為3分，超過75%評為4分?？偡譃槿旧顪\評分X 染色面積評分，最高分12分，我們定義7分以上為高表達，低于6分為低表達。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料比較及BPTF表達與臨床病理特征關聯(lián)性分析采用卡方檢驗。應用Kaplan-Meier法(組間生存率比較采用Log-rank檢驗)和Cox比例風險回歸模型進行生存分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 BPTF因子肺腺癌及癌旁組織的表達

BPTF因子在肺腺癌高表達率為68.9%，癌旁組織中僅為1.3%，兩者比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1。

2.2 BPTF因子表達與臨床病理特征之間的關系

BPTF因子表達與腫瘤淋巴結轉移及TNM臨床分期有關(P均<0.05)，而與性別、年齡、浸潤深度無關。見表1。

2.3 BPTF因子表達與患者術后生存期的關系

對90例患者進行隨訪，BPTF因子高表達者5年總生存率為44.2%，低表達者為70.77%，兩組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖 2。

2.4 BPTF表達對肺腺癌患者預后的影響

Cox回歸單因素分析顯示腫瘤浸潤、淋巴結轉移、臨床分期及BPTF的表達為肺腺癌患者的預后影響因素。多因素分析顯示臨床分期以及BPTF的表達水平為肺腺癌患者的預后影響因素(RR=1.890，95%CI 1.405-2.900，P<0.01； RR=7.967，95%CI 2.251-28.73，P<0.01)。見表2。

3 討 論

BPTF是NURF(核小體重塑因子，nucleosome remodelling factor)的最大的一個亞基，染色質重塑是基因表達調控的基本的也是最重要的環(huán)節(jié)。目前發(fā)現(xiàn)BPTF在參與染色體重塑中起到識別組蛋白甲基化和乙酰化位點的作用，PHD鋅指結構域可以特異性識別并結合二甲基或是三甲基H3K4(H3K4me2/3)，其臨近的溴區(qū)結構域可以特異性結合在H4在K12、K16或是K20乙酰化肽段。通過與這些甲基化和乙?；稽c結合后，基因轉錄活性可以被大大增強[3]。BPTF在生物學功能上可以調控真核細胞的發(fā)育。研究表明BPTF突變后，小鼠的外胚層發(fā)育受到抑制，胚胎在晚期出現(xiàn)流產[4]，胸腺的發(fā)育也會受到抑制[5]。另外，還發(fā)現(xiàn)當BPTF表達失控時與肺癌，膀胱癌，肝癌及黑色素細胞瘤也有一定的關系。Balbs-Martínez等[7]通過外顯子測序的方法揭示了BPTF基因在膀胱癌中出現(xiàn)頻繁突變。Buganim等[8]檢測了17 q24.3即BPTF基因所在位置，發(fā)現(xiàn)BPTF與肺的癌前病變有關，并且有27%的肺癌中檢測到17q24.3基因突變。進一步研究顯示BPTF在黑色素細胞瘤及非小細胞肺癌[9-10]，通過激活MAPK及PI3K-AKT通路，并抑制caspase-8及BCL-2凋亡通路來促進腫瘤細胞的生長。進一步研究表明BPTF通過與c-Myc啟動子結合從而調控c-Mcy蛋白的表達。

A～B: BPTF因子在肺腺癌高表達; C～D: BPTF因子在肺腺癌低表達; E～F: BPTF因子在癌旁低表達。A、C、E(×50); B、D、F(×200)圖1 BPTF因子在肺腺癌及癌旁組織中的表達Fig 1 Expression of BPTF in adenocarcinoma and in normal lung tissue

Tab 1 Association among BPTF and clinicopathological features in 90 cases with lung adenocarcinoma n (%)

總數(shù)(n=90)BPTF高表達(n=62)BPTF低表達(n=28)P性別0.120 男性4929(59.18)20(40.82) 女性4133(80.49)8(19.51)年齡(歲)0.823 <604229(69.05)13(30.95) ≥604833(68.75)15(31.25)腫瘤分期0.436 T1+T27146(64.79)25(35.21) T3+T41916(84.21)3(15.79)淋巴結轉移0.025 N0+N16033(55.00)27(45.00) N2+N31919(100.00)0(0) Nx11臨床分期0.016 I4726(55.32)21(44.68) II1812(66.67)6(33.33) III2120(95.24)1(4.76) IV44(100.00)0(0)

圖2 90例肺腺癌患者BPTF低表達與BPTF高表達總生存分析Fig 2 Overall survival analysis with high and low expression of BPTF in 90 lung adenocarcinoma

RR95%CI兩組數(shù)據(jù)比較P單因素分析 腫瘤分期2.1351.706-4.787T1+T2/T3+T40.045 淋巴結轉移5.4232.483-11.579N0+N1/N2+N30.000 臨床分期1.7831.331-2.473I/II期/III/IV期0.000 BPTF8.4932.591-28.220高表達/低表達0.000多因素分析 臨床分期1.8901.405-2.900I/II期/III/IV期0.000 BPTF7.9672.251-28.732高表達/低表達0.001

本研究檢測90例肺腺癌BPTF的蛋白表達，發(fā)現(xiàn)68.9%高表達。BPTF蛋白陽性表達率與所報道的bptf基因突變陽性表達率不一致，很多的因素影響B(tài)PTF的轉錄以及翻譯，基因組畸變僅僅是其中一個主要的因素。本研究90例臨床組織樣本中，發(fā)現(xiàn)BPTF高表達與淋巴結轉移數(shù)和臨床分期有關，淋巴結轉移數(shù)越多、越是晚期病人BPTF的表達越高。肺腺癌病人的生存期與BPTF蛋白表達以及臨床分期有關。越是晚期病人、BPTF表達越高則生存期越短。最后，通過Kaplan-Meier分析結果顯示，BPTF高表達的病人生存期比BPTF低表達的病人生存期短。綜上所述，BPTF在人類肺腺癌標本中是一個關鍵的因子，為肺腺癌提供了潛在的治療靶點。

[1] Smith OK,Aladjem MI. Chromatin structure and replication origins: determinants of chromosome replication and nuclear organization[J].J Mol Biol, 2014, 426(20): 3330-3341.

[2] Nikolaos T, Maria T, Ioannis KD et al. Dermatomyositis as an early manifestation and a significant clinical precursor of lung cancer: report of a rare case and review of the current literature[J].Int J Clin Exp Med， 2013， 6(2):105-109.

[3] Ruthenburg A, Li H, Milne T, et al. Recognition of a Mononucleosomal Histone Modification Pattern by BPTF via Multivalent Interactions[J]. Cell, 2011, 145(5): 692-706.

[4] Landry J, Sharov AA, Piao Y, et al. Essential role of chromatin remodeling protein Bptf in early mouse embryos and embryonic stem cells[J]. PLoS Genet, 2008, 4(10): e1000241.

[5] Landry J W, Banerjee S, Taylor B, et al. Chromatin remodeling complex NURF regulates thymocyte maturation[J]. Genes Dev, 2011, 25(3): 275-286.

[6] Mulder KW, Wang X, Escriu C, et al. Diverse epigenetic strategies interact to control epidermal differentiation[J].Nat Cell Biol,2012, 14(7): 753-763.

[7] Balbás-Martínez C, Sagrera A, Carrillo-de-Santa-Pau E, et al. Recurrent inactivation of STAG2 in bladder cancer is not associated with aneuploidy[J].Nat Genet,2013,45(12):1464-1469.

[8] Buganim Y, Goldstein I, Lipson D, et al. A novel translocation breakpoint within the BPTF gene is associated with a pre-malignant phenotype[J].PLoS ONE, 2010, 5(3):e9657.

[9] Dai M, Lu JJ, Guo W, et al. BPTF promotes tumor growth and predicts poor prognosis in lung adenocarcinomas[J]. Oncotarget,2015,6(32): 33878-33892.

[10] Dar AA, Nosrati M, Bezrookove V, et al. The Role of BPTF in Melanoma Progression and in Response toBRAF-Targeted Therapy[J]. JNCI, 2015, 107(5).

EffectofBPTFexpressionontheprogressoflungadenocarcinoma

DAI Meng1, REN Lina1, JIANG Ling1,WANG Qimin2, LIU Yuan1, LIU Chunfang1

(1.RespiratoryDepartment,DalianCentralHospitalAffiliatedtoDalianMedicalUniversity,Dalian116000,China；2.DepartmentofPathology,theSecondAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity,Dalian116027,China)

ObjectiveTo research the effect of BPTF (bromodomain and PHD domain transcription factor) on human lung adenocarcinoma.MethodsNinety lung adenocarcinoma tissue samples from affiliated 2nd hospital, Dalian medical university and Shanghai Xinchao Company were collected and analized about the relationship between BPTF and clinical phathological characteristics. Further, Kaplan-Meier and Cox regression analysis were carried out.ResultsBPTF positive expression rate was 68.9%, comparing to the adjacent normal lung tissue (1.3%), the difference was significant (P<0.05). BPTF high expression was related with lymph node metastasis and TNM clinical phases (P<0.05). The five-year overall survival was 44.2% in BPTF high expressed group, but it was 70.77% in BPTF low expressed group. The difference in the two groups was signifecant(P<0.05). Multipal factor analisis showed the clinical phrase and the expression of BPTF was the important effective factors to the lung adenocarcinoma prognosis(RR=1.890, 95%CI 1.405-2.900,P<0.01, RR=7.967, 95% CI 2.251-28.73,P<0.01).ConclusionThe high expressed BPTF predicted a poor prognosis in lung adenocarcinoma.

BPTF; lung adenocarcinoma; prognosis

R734.2

A

1671-7295(2017)05-0433-04

代萌，任麗娜，江玲，等.BPTF因子在肺腺癌中的表達及臨床意義[J].大連醫(yī)科大學學報，2017,39(5)：433-436，445.

2017-09-10；

2017-10-03)