疏肝活血方對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

陳維+潘博希+馮妮+尹瑞

摘要：目的 研究疏肝活血方對血管性癡呆（VD）大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。方法 采用改進(jìn)的2VO法制備VD大鼠模型。雄性SD大鼠90只，隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、多奈哌齊組、疏肝活血方高、中、低劑量組，每組15只。于造模3 d后開始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4周。給藥后4周行水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測試。結(jié)果 疏肝活血方中劑量組大鼠學(xué)習(xí)記憶成績明顯高于模型組大鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）。結(jié)論 疏肝活血方能提高血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

關(guān)鍵詞：疏肝活血方；血管性癡呆大鼠；學(xué)習(xí)記憶；水迷宮

中圖分類號：R2855 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號：1007-2349（2017）10-0079-03

Effect of Shugan Huoxue Prescription on Learning and Memory in Vascular Dementia Rats

CHEN Wei1， PAN Bo-xi2， FENG Ni1， YIN Rui-wen2

（1 School of Clinical Medicine， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， China；

2 Yunnan Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650021， China）

【Abstract】Objective： To study the effect of Shugan Huoxue Prescription on learning and memory in vascular dementia （VD） rats Methods： VD rat model was prepared by modified 2VO method 90 male SD rats were randomly divided into a model group， a sham operation group， a donepezil group and Shugan Huoxue Decoction groups of high， medium and low dose， 15 rats each group Three days after modeling， the rats were given oral administration， once a day for 4 weeks Four weeks after administration， water maze test was conducted for behavioral testing Results： The learning and memory scores of Shugan Huoxue Decoction groups were significantly higher than those of the model group and the difference was statistically significant （P<005） Conclusion： Shugan Huoxue Prescription can improve the learning and memory ability of vascular dementia rats

【Key words】Shugan Huoxue Prescription， vascular dementia rat， learning and memory， water maze

血管性癡呆（（vascular dementia，VD）是因腦血管疾病所致的智能及認(rèn)知功能障礙的臨床綜合征。其發(fā)病率在所有癡呆類型中居第二位，僅次于阿爾茨海默（Alzheimer disease，AD）。在我國及日本等亞洲國家，由于腦血管?。ㄖ饕侨毖阅X血管?。┑母甙l(fā)，VD發(fā)病率較歐美其他國家為高。據(jù)流行病學(xué)調(diào)查，在歐美，VD僅占老年性癡呆的30%，而在我國其比例高達(dá)60%[1]。我國的一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查顯示，我國65歲及以上人群中VD的患病率為13%[2]，隨著世界人口老齡化的發(fā)展及卒中治療死亡率的降低，VD發(fā)病率有逐年上升趨勢?；颊叩膶W(xué)習(xí)，記憶能力受損，伴隨情感、性格的改變，嚴(yán)重影響其日常生活，給家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)。世界衛(wèi)生組織（WHO）已將VD列為21世紀(jì)的重點(diǎn)研究項(xiàng)目。有資料報(bào)道，VD比阿爾茨海默?。ˋD）更有預(yù)防和治療價值[3]。因此對血管性癡呆的腦損傷機(jī)制及其防治的研究，是我國以及世界醫(yī)學(xué)領(lǐng)域聯(lián)合公關(guān)、重點(diǎn)研究的項(xiàng)目。筆者在臨床實(shí)踐及對中醫(yī)理論探討中，認(rèn)識到血管性癡呆與肝郁血瘀有密切的關(guān)系[4]，認(rèn)為肝郁血瘀貫穿了VD的整個病程，是VD的核心病機(jī)。為了探討疏肝活血方治療VD的療效，本研究建立大鼠VD模型，利用水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察疏肝活血方對VD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響。

1 材料和方法

11 實(shí)驗(yàn)動物分組及造模 雄性SD大鼠90只，體重為（250±50）g，由北京維通利華公司提供，許可證號：SCXK（京）2014-0003和SCXK（京）2014-0010。購回后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周左右。隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、多奈哌齊組、疏肝活血方高、中、低劑量組，每組15只。采用改進(jìn)的2VO法制備VD大鼠模型，具體手術(shù)方法如下：大鼠手術(shù)前12 h禁食，4 h禁水，用10%水合氯醛（35 mL/kg）腹腔注射麻醉，保證其手術(shù)期間有自主呼吸，將其仰臥固定于手術(shù)臺上，頸部去毛，碘伏常規(guī)消毒，頸正中切口，鈍性分離頸部肌肉組織，分離出一側(cè)頸總動脈，避免損傷頸部交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)，用l號手術(shù)線分別從近端和遠(yuǎn)端雙重結(jié)扎頸總動脈，以確保阻斷頸總動脈血流。該側(cè)結(jié)扎后間隔1周，行第2次手術(shù)結(jié)扎另一側(cè)頸總動脈。假手術(shù)組動物手術(shù)過程同模型制備組，但不結(jié)扎頸總動脈。注意保溫，術(shù)后傷口涂以復(fù)方新諾明粉，送至有通風(fēng)和空調(diào)設(shè)備的動物房飼養(yǎng)。每次手術(shù)后肌注青霉素，每只每日20萬U，連續(xù)3 d，以預(yù)防感染，對出現(xiàn)感染者延長用藥至1周。endprint

12 實(shí)驗(yàn)藥品及動物給藥 復(fù)方疏肝活血方，由柴胡15 g，白芍20 g，郁金15 g，川芎10 g，丹參30 g，當(dāng)歸10 g，三七10 g，炙遠(yuǎn)志10 g，石菖蒲10 g組成，所有藥材購于云南省中醫(yī)醫(yī)院。鹽酸多奈哌齊片（貴州圣濟(jì)堂制藥有限公司，規(guī)格為5 mg×12片，批號20130905）。于造模3d后開始用灌胃針灌胃給藥，每天1次，連續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)每日給藥量按人與實(shí)驗(yàn)動物的體表面積折算，其中疏肝活血方以成人每日劑量的10倍、15倍和20倍為低、中、高劑量，即中藥低、中、高劑量組分別灌胃給予疏肝活血方26 g/（kg·d）、39 g/（kg·d）、52 g/（kg·d）；多奈哌齊組給予多奈哌齊2 mg/（kg·d）；模型組和假手術(shù)組每次給予等量的生理鹽水灌胃，灌胃時溫服。

13 各組大鼠行為學(xué)檢測（Morris水迷宮） Morris水迷宮：采用不銹鋼的圓形水池，直徑130 cm，深50 cm，水深30 cm，水溫（26±2）℃，人為在池壁上取四個等距離點(diǎn)，分水池為四個象限，任選一象限在其中央放置平臺。平臺無色透明，直徑6 cm，高28 cm，平臺沒于水面下1 cm，在水池壁內(nèi)和池外分別做明顯固定標(biāo)記參照物。水溫控制在23-26℃之間。于造模后3天，及給藥后4周行水迷宮實(shí)驗(yàn)，包括4天的定位航行試驗(yàn)（place navigation）和最后一天的空間探索試驗(yàn)（escape latency）。實(shí)驗(yàn)過程中要在每只大鼠下水一次后清理水中的糞便，每兩天更換一次迷宮中的水，保持實(shí)驗(yàn)過程中水的清潔，避免給動物一些其他的提示和干擾。實(shí)驗(yàn)開始前一天，將實(shí)驗(yàn)動物分別單獨(dú)放入無平臺的水池中自由游泳2 min，以使其熟悉環(huán)境。定位航行試驗(yàn)：試驗(yàn)歷時5 d，每日4次。均在上午進(jìn)行，操作者將大鼠面向池壁隨機(jī)從一象限起始點(diǎn)放入水中，記錄120 s內(nèi)大鼠找到平臺的時間（逃避潛伏期），如果120 s內(nèi)找不到平臺（逃避潛伏期記為120 s），則由操作者將其引上平臺。大鼠站立于平臺上10 s后，將大鼠從平臺拿上下來休息30 s，再按順時針方向由下一象限起始點(diǎn)入水進(jìn)行試驗(yàn)。將4次所得值平均作為當(dāng)天的逃避潛伏期?？臻g探索試驗(yàn)：在行為學(xué)測試第5 d下午，定位航行試驗(yàn)結(jié)束后，撤除平臺，然后從原始平臺對側(cè)象限入水點(diǎn)將大鼠放入水中，測其60 s內(nèi)經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)。

14 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 170軟件進(jìn)行系統(tǒng)分析。觀察指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，單因素方差分析（one way ANOVA）進(jìn)行組間比較，有顯著差異者進(jìn)行兩兩比較。錯誤次數(shù)比較應(yīng)用秩和檢驗(yàn)。以P<005為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

21 定位航行實(shí)驗(yàn) 給藥4周以后，行定位航行實(shí)驗(yàn)，顯示：與模型組比較，各組大鼠的逃避潛伏期均明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；并且除假手術(shù)組以外，以多奈哌齊組和疏肝活血方中劑量組縮短最為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而多奈哌齊組和疏肝活血方中劑量組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表1。

22 空間探索試驗(yàn) 治療4周以后，行空間探索試驗(yàn)，比較各組大鼠經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)顯示：與模型組比較，各組大鼠經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)均多于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；并且除假手術(shù)組以外，以多奈哌齊組和疏肝活血方中劑量組經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)最多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而多奈哌齊組和疏肝活血方中劑量組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>005）。見表2。

3 討論

血管性癡呆是老年期癡呆的主要類型之一，僅次于阿爾茨海默病。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對VD的預(yù)防與治療有較大進(jìn)展，但因其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，存在多種學(xué)說，國內(nèi)外學(xué)者正在試圖從治療AD和腦血管疾病的藥物中篩選出對VD有療效的藥物。從近年來的臨床報(bào)道看，中醫(yī)藥治療VD可改善癥狀及緩解病程進(jìn)展，近期療效和與同類西藥接近或優(yōu)于西藥，遠(yuǎn)期療效更好[5]。相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究也顯示，中醫(yī)中藥能從多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)改善血管性癡呆動物模型的學(xué)習(xí)記憶能力[6]。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為VD屬“呆病”、“健忘”等范疇。目前大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為VD的中醫(yī)病因病機(jī)與老年癡呆（AD）的中醫(yī)病因病機(jī)相同，然而筆者在臨床中發(fā)現(xiàn)VD與肝郁血瘀的關(guān)系密切，認(rèn)為其始于肝氣郁結(jié)，終致瘀血阻竅、腦失所養(yǎng)，從而出現(xiàn)健忘、癡呆等癥狀[4]。

本研究采用改進(jìn)的2VO法制備VD大鼠模型，利用水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察疏肝活血方對VD大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響，結(jié)果顯示疏肝活血方中劑量組與模型組比較，大鼠的逃避潛伏期均明顯縮短，經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005）；而疏肝活血方中劑量組與多奈哌齊組比較，大鼠的逃避潛伏期與經(jīng)過原始平臺位置的次數(shù)均無明顯差異（P>005）。從而證明疏肝活血方能提高血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，且療效和多奈哌齊相當(dāng)。從肝郁血瘀論治血管性癡呆切實(shí)可行，在今后的研究中，需進(jìn)一步揭示其作用機(jī)制。

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