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    復發(fā)性流產(chǎn)患者血清維生素D水平與自身免疫抗體、淋巴細胞亞群的關系研究

    2017-11-02 06:28:33賈新轉(zhuǎn)郭麗娜李玉琢王葉魏蘭
    中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志 2017年24期
    關鍵詞:水平

    賈新轉(zhuǎn) ,郭麗娜 ,李玉琢 ,王葉 ,魏蘭

    (1.河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院,河北 石家莊 050011;2.河北省胸科醫(yī)院,河北 石家莊 050041)

    復發(fā)性流產(chǎn)患者血清維生素D水平與自身免疫抗體、淋巴細胞亞群的關系研究

    賈新轉(zhuǎn)1,郭麗娜1,李玉琢2,王葉1,魏蘭2

    (1.河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院,河北 石家莊 050011;2.河北省胸科醫(yī)院,河北 石家莊 050041)

    目的探討復發(fā)性流產(chǎn)(RSA)患者血清維生素D水平與自身免疫抗體、淋巴細胞亞群的關系。方法回顧性分析RSA患者125例,根據(jù)血清25羥維生素D[25(OH)D]水平,分為25(OH)D正常水平組50例、25(OH)D低水平組75例,分析兩組自身免疫抗體陽性率及淋巴細胞亞群水平。結(jié)果25(OH)D低水平組抗心磷脂抗體(ACA)、抗核抗體(ANA)的陽性率及甲狀腺過氧化物酶(TPO)抗體陽性率均高于25(OH)D正常水平組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);25(OH)D 低水平組外周血 CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD19+及 CD56+百分率均高于25(OH)D正常水平組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論RSA患者中維生素D缺乏的比例較高,維生素D缺乏的RSA患者ACA、ANA及TPO抗體陽性率較高,RSA維生素D水平與CD4+T細胞、B細胞及NK細胞免疫平衡有關。

    復發(fā)性流產(chǎn);維生素D;T淋巴細胞;B淋巴細胞;NK細胞

    復發(fā)性流產(chǎn)(recurrent spontaneous abortion,RSA)是指連續(xù)≥3次的自然流產(chǎn),在孕齡女性中的發(fā)病率為1%~3%[1],目前證實免疫失衡與RSA有關。近年來研究發(fā)現(xiàn)維生素D作為胚胎種植中免疫調(diào)節(jié)因子,在生殖中發(fā)揮重要作用[2],維生素D充足與體外受精(in vitro fertilization,IVF)妊娠率提高相關[3]。但關于維生素D在RSA中作用的研究較少。本研究旨在探討RSA患者血清維生素D水平與自身免疫抗體、淋巴細胞亞群的關系。

    1 資料與方法

    1.1 研究對象

    選取2016年6月-2016年9月在本院生殖中心就診的RSA患者125例作為研究對象,年齡25~32歲。入組標準:①夫妻雙方染色體核型均正常;②盆腔彩超除外生殖道器質(zhì)性病變;③宮頸分泌物檢查除外生殖道感染;④生殖內(nèi)分泌激素檢查無異常,且無內(nèi)分泌疾病史;⑤無血栓形成傾向或高凝狀態(tài);⑥月經(jīng)周期規(guī)律,最近3個月內(nèi)未應用內(nèi)分泌或免疫調(diào)制劑及維生素D;⑦男方精液常規(guī)檢查無異常。根據(jù)血清25(OH)D水平將研究對象分為維生素D正常水平組(25(OH)D≥30 ng/ml)、維生素 D 低水平組(25(OH)D<30 ng/ml)。兩組研究對象既往流產(chǎn)次數(shù)[25(OH)D低水平組既往流產(chǎn)3次49例(65.33%),既往流產(chǎn)≥4次 26例(34.67%),25(OH)D 正常水平組既往流產(chǎn)3次29例(58.00%),既往流產(chǎn)≥4次21 例(42.00%)(χ2=0.69,P=0.41)]差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。兩組研究對象年齡、體重指數(shù)(body mass index,BMI)、月經(jīng)周期及末次自然流產(chǎn)后的時間間隔差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

    1.2 研究方法

    研究對象均于月經(jīng)周期第3天,抽取晨空腹靜脈血3 ml(檢測標本均為外周血)。

    1.2.1 血清25(OH)D水平測定 應用JC028酶標儀(瑞士澳斯邦公司)酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測 25(OH)D 水平,按照 25(OH)D 試劑盒(英國IDS公司)說明進行操作。

    1.2.2 自身免疫抗體檢測 應用ELISA測定抗心磷脂抗體(anti cardiolipin antibody,ACA)、ACA-IgG及ACA-IgM。采用間接免疫熒光法測定抗核抗體(antinuclear antibody,ANA)和免疫印跡法測定ANA譜(抗-dsDNA抗體、抗-ssDNA抗體、抗-組蛋白抗體及抗Scl70抗體);應用化學發(fā)光免疫分析法測定甲狀腺過氧化物酶抗體(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)。TPOAb試劑盒購自美國Beckman公司,其余試劑盒購自德國歐蒙公司,所用儀器分別為JC028酶標儀,Eurolinescan自動判別軟件(德國歐蒙公司),EUROBlotMaster分析儀熒光顯微鏡(德國歐蒙公司),DXI800型全自動化學發(fā)光免疫分析儀(美國Beckman公司)。

    1.2.3 淋巴細胞亞群檢測 采用流式細胞術測定淋巴 細 胞 亞 群 [CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+、CD19+、CD56+]。所用試劑盒購自美國eBiascience公司,F(xiàn)ACSCalibur流式細胞儀購自美國BD公司。

    1.3 統(tǒng)計學方法

    數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件,計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,用t檢驗或秩和檢驗,計數(shù)資料以率(%)表示,用χ2檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 RSA女性25(OH)D水平分組情況

    125例 RSA 患者中,50例(40.00%)為 25(OH)D 正常水平(≥30 ng/ml),75例(60.00%)是 25(OH)D 低水平(<30 ng/ml)。

    2.2 兩組自身免疫抗體陽性率的比較

    25(OH)D低水平組ACA、ANA的陽性率及TPOAb陽性率均高于25(OH)D正常水平組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩組 ACA-IgG、ACA-IgM、抗-dsDNA、抗-ssDNA、抗-組蛋白及抗Scl70陽性率差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

    2.3 兩組淋巴細胞亞群的比較

    25(OH)D 低水平組外周血 CD3+CD4+、CD4+/CD8+、CD19+及 CD56+百分率均高于 25(OH)D 正常水平組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。兩組CD3+及CD3+CD8+差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表3。

    表1 兩組基本情況的比較 (±s)

    表1 兩組基本情況的比較 (±s)

    組別例數(shù)年齡/歲BMI/(kg/m2)月經(jīng)周期/d末次自然流產(chǎn)后的時間間隔/月25(OH)D 低水平組 75 27.75±1.71 21.42±1.72 27.52±2.12 4.13±0.82 25(OH)D 正常水平組 50 27.46±1.97 21.16±1.75 26.68±2.30 4.12±0.79 t值 0.861 0.819 0.789 0.091 P值 0.391 0.414 0.481 0.928

    表2 兩組自身免疫抗體陽性率的比較 %

    表3 兩組淋巴細胞亞群的比較 (±s)

    表3 兩組淋巴細胞亞群的比較 (±s)

    組別 例數(shù) CD3+T/% CD3+CD4+T/% CD3+CD8+T/% CD4+/CD8+ CD19+/% CD56+/%25(OH)D 低水平組 75 74.48±3.02 42.12±3.79 25.52±2.34 1.65±0.04 10.65±1.60 13.23±3.07 25(OH)D 正常水平組 50 74.86±2.83 36.30±3.47 25.16±1.87 1.44±0.05 6.55±0.48 10.44±1.48 t/u值 0.706 8.687 1645.000 15.000 273.000 777.000 P值 0.481 0.000 0.243 0.000 0.000 0.000

    3 討論

    近年來研究發(fā)現(xiàn),維生素D參與鈣磷代謝、機體免疫及生殖等生理過程[4],維生素D是生殖成功過程中的一個關鍵因素[5]。大量流行病學調(diào)查發(fā)現(xiàn)維生素D缺乏在世界范圍內(nèi)普遍存在[6]。最近研究中顯示,妊娠期女性同樣普遍存在維生素D缺乏[7]。本研究發(fā)現(xiàn)在RSA患者中維生素D缺乏的比例較高。

    本研究同時發(fā)現(xiàn),RSA患者中25(OH)D低水平組ACA、ANA及TPO抗體的陽性率高于25(OH)D正常水平組,而兩組IgG、IgM、抗-dsDNA、抗-ss-DNA、抗-組蛋白及抗Scl70抗體陽性率均無差異。本研究組前期研究提示TPOAb陽性與維生素D低水平密切相關,維生素D低水平、TPOAb陽性相互作用增加自然流產(chǎn)風險[8],另有學者報道,維生素D水平與TPOAb定量負相關[9]。ROUSSEV等[10]報道抗磷脂抗體綜合征的患者維生素D缺乏普遍性增加,維生素D缺乏與ACA、ANA及TPOAb增加相關。本研究結(jié)果與之相似,推測維生素D水平可影響RSA自身免疫抗體。有學者對維生素D水平如何影響自身抗體進行研究,證實維生素D缺乏與經(jīng)B細胞活化的自身抗體增加相關[11],維生素D通過抑制活化的B細胞增殖、誘導其凋亡,在自身抗體產(chǎn)生中起調(diào)節(jié)作用。在本研究中RSA患者25(OH)D低水平組外周血CD19+百分比高于25(OH)D正常水平組,推測維生素D通過調(diào)節(jié)B淋巴細胞增殖及功能影響自身免疫抗體,進而影響妊娠過程,其具體機制仍需進一步探討。

    在本研究中同時對RSA女性維生素D水平與T淋巴細胞、NK細胞的關系進行分析,結(jié)果顯示,維生素D低水平組CD4+較維生素D正常水平組增多,CD4+/CD8+增高,但T細胞總數(shù)、CD8+均無差異。T淋巴細胞是機體內(nèi)主要的免疫細胞,主要包括CD4+、CD8+。CD4+介導細胞免疫,其數(shù)量增多可使母體對胚胎發(fā)生較強的免疫排斥,引起流產(chǎn)。CD8+可抑制CD4+介導的免疫排斥,正常情況下兩者達到平衡狀態(tài)。反復流產(chǎn)患者外周血CD4+增多,而CD8+無變化[12]。體外試驗證實維生素D可調(diào)控活化T細胞,促進其分化及免疫耐受[13],維生素D可抑制Th1細胞增殖并限制其產(chǎn)生細胞因子(如IFN-r、IL-2及TNF-α),誘導 Th2細胞因子(如 IL-4,IL-5,IL-6,IL-9,IL-10及 IL-13)[14]。而維生素 D 在RSA 患者體內(nèi)如何調(diào)控T淋巴細胞有待于進一步研究。

    NK細胞數(shù)量、功能異常是引起RSA的重要因素[15],外周血NK細胞高水平能夠預測下次妊娠仍有可能發(fā)生自然流產(chǎn)[16]。有研究報道,維生素D與NK細胞毒性呈負相關,體外實驗進一步發(fā)現(xiàn)缺乏維生素D可抑制穿孔素分泌,進而影響對靶細胞的殺傷[7]。本研究結(jié)果顯示,25(OH)D低水平組外周血CD56+百分比高于25(OH)D正常組,推測維生素D同時參與NK細胞數(shù)量和細胞毒性的調(diào)控。

    綜上所述,RSA患者中維生素D缺乏的比例較高,維生素D缺乏可影響RSA患者的免疫狀態(tài)。維生素D低水平的RSA患者有ACA、ANA及TPOAb陽性的傾向,而ACA、ANA及TPOAb陽性與生殖失敗相關。RSA患者維生素D水平與CD4+、B細胞及NK細胞免疫平衡有關。對于維生素D缺乏的RSA患者添加維生素D治療是否可改善生殖狀況有待于進一步研究。

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    Study on relationship between serum vitamin D level and autoantibodies or lymphocyte subsets in patients with RSA

    Xin-zhuan Jia1,Li-na Guo1,Yu-zhuo Li2,Ye Wang1,Lan Wei2
    (1.Fourth Hospital of Hebei Medical University,Shijiazhuang,Hebei 050011,China;2.Hebei Chest Hospital,Shijiazhuang,Hebei 050041,China)

    ObjectiveTo investigate the relationship between serum vitamin D level and autoantibodies or lymphocyte subsets in patients with recurrent spontaneous abortion (RSA).MethodsA total of 125 patients with RSA were included in a retrospective analysis.According to the serum levels of 25-hydroxy vitamin D[25-(OH)-D],the patients were divided into[25-(OH)-D]normal group including 50 cases and[25-(OH)-D]low level group including 75 cases.The positive rate of autoantibodies and the level of lymphocyte subsets in the two groups were analyzed.ResultsCompared with the [25-(OH)-D]normal group,the positive rates of anticardiolipin antibody(ACA),antinuclear antibody(ANA)and thyroid peroxidase(TPO)antibody were higher in the [25-(OH)-D]low level group,the difference was statistically significant(P<0.05);the percentages of(CD3+/CD4+)T,CD4+/CD8+,CD19+B cells and CD56+natural killer(NK)cells were higher in the[25-(OH)-D]low level group,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionsThe rate of vitamin D deficiency is higher in women with RSA.The positive rates of ACA,ANA and TPO are higher in RSA women with vitamin D deficiency.The vitamin D level in women with RSA is related to CD4+T cells,B lymphocytes and the balance of NK cells.

    recurrent spontaneous abortion;vitamin D;T lymphocyte;B lymphocyte;NK cell

    R71

    A

    10.3969/j.issn.1005-8982.2017.24.014

    1005-8982(2017)24-0066-04

    2017-03-16

    魏蘭,E-mail:1134979643@qq.com

    (唐勇 編輯)

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