硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶?jìng)€(gè)體化檢測(cè)在慢性光化性皮炎患者中的意義和應(yīng)用

江雪 韓曉鳳 錢思宇 史丙俊 刁慶春

400011重慶市第一人民醫(yī)院 重慶市中醫(yī)院皮膚科

硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶?jìng)€(gè)體化檢測(cè)在慢性光化性皮炎患者中的意義和應(yīng)用

江雪 韓曉鳳 錢思宇 史丙俊 刁慶春

400011重慶市第一人民醫(yī)院 重慶市中醫(yī)院皮膚科

目的研究慢性光化性皮炎患者口服硫唑嘌呤后不良反應(yīng)的發(fā)生與硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶（TPMT）活性及基因型的關(guān)系，探討慢性光化性皮炎患者硫唑嘌呤優(yōu)化用藥方案。方法70例口服硫唑嘌呤治療的慢性光化性皮炎患者納入病例組，其中12例出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)（不良反應(yīng)組），58例未出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)（無不良反應(yīng)組）。同時(shí)，50例健康體檢者作為對(duì)照組。取EDTA抗凝血2 ml，制備紅細(xì)胞裂解液，采用高效液相色譜法測(cè)定TPMT活性。從全血中提取全基因組DNA，采用等位基因特異性PCR（AS-PCR）和限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）技術(shù)檢測(cè)TPMT基因型。結(jié)果慢性光化性皮炎患者TPMT活性為（25.80±8.34）U/ml，對(duì)照組為（23.58±5.70）U/ml，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.782，P＞0.05）。不良反應(yīng)組TPMT活性為（18.86±9.22）U/ml，無不良反應(yīng)組為（27.27±6.72）U/ml，不良反應(yīng)組TPMT活性明顯低于無不良反應(yīng)組（t=3.437，P＜0.05）。測(cè)定2組共120份樣本TPMT基因型，發(fā)現(xiàn)基因突變7例（患者5例，健康對(duì)照2例），均為TPMT*3C（A719G）型雜合突變，基因型突變頻率為5.8%，等位基因突變頻率為2.9%。病例組與對(duì)照組TPMT*3C突變頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.108，P=0.742）。12例有不良反應(yīng)者中發(fā)現(xiàn)TPMT*3C型突變3例，58例無不良反應(yīng)者中2例，有不良反應(yīng)組基因突變頻率顯著高于無不良反應(yīng)組（χ2=40.093，P＜0.05）。結(jié)論慢性光化性皮炎患者口服硫唑嘌呤出現(xiàn)的不良反應(yīng)與TPMT基因突變及低TPMT活性有關(guān)，積極調(diào)整低活性、突變型TPMT患者的藥物劑量能實(shí)現(xiàn)更安全的治療。

皮炎，光變態(tài)反應(yīng)；硫唑嘌呤；藥物毒性；DNA突變分析；硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶

硫嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶（thiopurine methyltransgerase，TPMT）是存在于人體內(nèi)的一種非金屬依賴性酶，能利用S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）作為甲基的供體與底物結(jié)合，特異地催化雜環(huán)類和芳香類化合物苯環(huán)6-位硫原子的甲基化。TPMT活性由基因多態(tài)性調(diào)控，符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。89%的人帶有高活性TPMT等位基因純合子（TPMTH），11%具有中等活性的雜合子，1/300的人表現(xiàn)出酶活性完全缺失，即低活性TPMT等位基因純合子（TPMTL）；中等活性者及活性完全缺失者在使用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量的硫嘌呤類藥物時(shí)出現(xiàn)不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)更高［1］。TPMT活性受多因素影響，導(dǎo)致酶活性基因型和表現(xiàn)型不能完全統(tǒng)一。TPMT遺傳具有單基因共顯性遺傳特征，目前發(fā)現(xiàn)的突變類型超過35種，由專門的TPMT命名委員會(huì)命名［2］。常見類型為TPMT*2（G238C）、TPMT*3A（G460A 和 A719G）、TPMT*3B（G460A）和TPMT*3C（A719G），占總突變的95%以上［3］。我們通過研究慢性光化性皮炎患者服用硫唑嘌呤后不良反應(yīng)發(fā)生情況，分析TPMT活性和TPMT基因型與硫唑嘌呤不良反應(yīng)的關(guān)系，以降低患者在服用過程中不良反應(yīng)發(fā)生的概率，提高治療安全性。

對(duì)象與方法

一、臨床資料

2015年2-12月在重慶市第一人民醫(yī)院（重慶市中醫(yī)院）皮膚科門診確診的70例慢性光化性皮炎患者納入病例組，其中男54例，女16例，年齡14～83（47.37± 1.82）歲。2016年7-9月在同院體檢中心體檢的50例健康人作為對(duì)照組。所選病例均符合慢性光化性皮炎診斷，2個(gè)月內(nèi)未接受輸血，1個(gè)月內(nèi)未接受任何免疫抑制劑治療，無其他免疫性皮膚病及系統(tǒng)疾病。70例患者口服硫唑嘌呤后，12例出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)（不良反應(yīng)組），58例未出現(xiàn)（無不良反應(yīng)組）。不良反應(yīng)包括頭暈、嘔吐、腹瀉和骨髓抑制（白細(xì)胞計(jì)數(shù)＜3.0×109/L或中性粒細(xì)胞＜1.5×109/L）等，其中，中性粒細(xì)胞＜0.5×109/L且持續(xù)2周以上為嚴(yán)重骨髓抑制。本研究通過重慶市中醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者簽署知情同意書。

二、儀器和試劑

1260系列高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），DU800紫外/可見光分光光度儀（美國(guó)Beackman公司），MJ mini PCR擴(kuò)增儀、凝膠成像儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；D3010全血全基因組提取試劑盒（廣州美基生物科技有限公司），Taq酶擴(kuò)增混合液［天根生化科技（北京）有限公司］，限制性內(nèi)切酶ACCⅠ和MwoⅠ（美國(guó)New England Biolabs公司）。

三、紅細(xì)胞TPMT活性檢測(cè)

采用高效液相色譜法測(cè)定TPMT的活性，以37℃每小時(shí)每毫升紅細(xì)胞催化生成1 nmol 6-甲基巰基嘌呤來表示TPMT的活性單位。

1.紅細(xì)胞裂解液的制備：用真空EDTA抗凝管采集患者全血2 ml。取1 ml全血至1.5 ml微量離心管（EP）中，2 800×g4℃離心10 min，去血清，留沉淀細(xì)胞。加入1 ml生理氯化鈉溶液重懸，同上述步驟離心，去上清液，留沉淀細(xì)胞。重復(fù)3次。加入與沉淀等體積的生理氯化鈉溶液重懸細(xì)胞，取100 μl重懸細(xì)胞液至1.5 ml EP管中。最后加入2倍體積的滅菌超純水，槍頭吹打混勻。4℃11 000×g離心1 min，將上清液（紅細(xì)胞裂解液）移至新1.5 ml EP管中，如不能及時(shí)檢測(cè)，可于-80℃凍存待用。

2.TPMT活性的檢測(cè)：在300 μl紅細(xì)胞裂解液中快速加入新鮮配制的3 mmol/L巰基嘌呤100 μl和1.2 mmol/L SAM 50 μl的混合液，渦旋 30 s，置于38℃恒溫?fù)u床中精確孵育1 h。取出EP管后，向每管快速加入50 μl 72%高氯酸溶液，渦旋混勻，終止反應(yīng)。將EP管11 000×g離心15 min。吸取上清液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過濾，注入高效液相色譜柱中測(cè)定。

3.高效液相色譜測(cè)定條件：色譜柱為Sepax Bio-C18柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm，大連依利特公司）；流動(dòng)相：乙晴∶超純水（10∶90，v/v），加入二硫蘇糖醇（DDT），終濃度為0.5 mmol/L；流速為1 ml/min；紫外線波長(zhǎng)310 nm；發(fā)射波長(zhǎng)390 nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量50 μl。

四、TPMT基因型檢測(cè)

1.引物設(shè)計(jì)：采用在線Primer3軟件設(shè)計(jì)引物序列，分別在第5、7、10號(hào)外顯子上設(shè)計(jì)G238C、G460A和A719G突變位點(diǎn)。設(shè)計(jì)引物序列見表1。

2.全血全基因組DNA提?。喊凑誐agen全血全基因組DNA提取試劑盒說明書，提取基因組DNA。最后加入55 μl TE緩沖液溶解DNA。經(jīng)分光光度儀測(cè)定，A260/A280值在1.8～2.0間。DNA在-20℃保存用于TPMT基因型鑒定。

3.G238C突變位點(diǎn)的檢測(cè)：采用等位基因特異性 PCR（AS-PCR）檢測(cè) G238C位點(diǎn)的突變。TPMT238F1/TPMT238R和TPMT238F2/TPMT238R兩對(duì)引物分別擴(kuò)增同一DNA樣本。PCR反應(yīng)體系：2 × Taq酶PCR Mixture緩沖液5 μl，上下游引物各0.2 μl，DNA 模板 0.5 μl，去離子雙蒸水補(bǔ)足至10 μl。擴(kuò)增條件采用降落PCR（Touchdown PCR），初始解鏈溫度54℃，每1個(gè)循環(huán)降低1℃。連續(xù)10個(gè)循環(huán)后，再以解鏈溫度50℃擴(kuò)增26個(gè)循環(huán)。PCR產(chǎn)物用1%瓊脂糖凝膠分析。野生型基因純合子可被TPMT238F1/TPMT238R引物擴(kuò)增得到245 bp產(chǎn)物；突變型基因純合子可被TPMT238F2/TPMT238R引物擴(kuò)增得到245 bp產(chǎn)物；突變型基因雜合子可同時(shí)被上述2對(duì)引物擴(kuò)增出245 bp產(chǎn)物。

4.G460A突變位點(diǎn)的檢測(cè)：采用限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）技術(shù)檢測(cè)G460C位點(diǎn)的突變。采用TPMT460F/TPMT460R配對(duì)引物擴(kuò)增DNA樣本，反應(yīng)體系和條件均同前。擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為711 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶MwoⅠ60℃消化3 h，酶切產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠分析。野生型基因純合子被切割為282 bp和429 bp片段；突變型基因純合子因酶切位點(diǎn)被破壞不能被切割，仍為711 bp片段；突變型基因雜合子則有分別為711、429和282 bp 3條片段。

表1 PCR引物

5.A719G突變位點(diǎn)的檢測(cè)：采用TPMT719F/TPMT719R配對(duì)引物擴(kuò)增DNA樣本，反應(yīng)體系和條件同前。擴(kuò)增產(chǎn)物片段大小為373 bp。擴(kuò)增產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶ACCⅠ37℃消化3 h，酶切產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠分析。野生型基因純合子不被切割，片段長(zhǎng)度仍為373 bp；突變型基因純合子因突變產(chǎn)生酶切位點(diǎn)，被切割成283 bp和90 bp 2條片段；突變型基因雜合子則有分別為373、283和90 bp 3條片段。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)（Kolmogorov-Smimov法和Shapiro-Wilk法），TPMT活性數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，用x±s描述數(shù)據(jù)，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、紅細(xì)胞TPMT活性與硫唑嘌呤不良反應(yīng)

經(jīng)高效液相色譜測(cè)定，對(duì)照組TPMT活性為11.67～ 48.93（23.58± 5.70）U/ml，慢性光化性皮炎患者為4.28～ 53.62（25.80± 8.34）U/ml，兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.782，P=0.439）。120例研究對(duì)象中，女性TPMT活性為（24.73±5.22）U/ml，男性為（25.62±6.78）U/ml，男女差異亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.027，P=0.566）。

慢性光化性皮炎患者中，有不良反應(yīng)組TPMT活性為（18.86±9.22）U/ml，無不良反應(yīng)組為（27.27±6.72）U/ml，不良反應(yīng)組明顯低于無不良反應(yīng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.437，P＜0.05）。高活性TPMT者（＞40 U/ml）3例，均未出現(xiàn)不良反應(yīng)，而中等活性者（10～40 U/ml）及低活性者（＜10 U/ml）共67例，其中12例出現(xiàn)不良反應(yīng)，55例未出現(xiàn)不良反應(yīng)。不同TPMT活性患者不良反應(yīng)發(fā)生率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.074，P=0.369）。不良反應(yīng)中，多為頭暈、惡心等輕度不良反應(yīng)，2例在服藥2周后出現(xiàn)輕度血液系統(tǒng)危象：1例白細(xì)胞計(jì)數(shù)＜3.0×109/L，1例中性粒細(xì)胞＜1.5×109/L，這2例患者均為TPMT*3C雜合子基因型突變，平均TPMT活性為12.41 U/ml。

圖1 G238C、G460A和A719G基因型突變檢測(cè)瓊脂糖凝膠電泳圖 1A：G238C基因型突變檢測(cè)，1、3：TPMT238F1/TPMT238R引物擴(kuò)增產(chǎn)物，均為245 bp，2、4：未擴(kuò)增出TPMT238F2/TPMT238R引物擴(kuò)增產(chǎn)物，5：標(biāo)準(zhǔn)參照物；1B：G460A基因型突變檢測(cè)的瓊脂糖凝膠電泳圖，1：標(biāo)準(zhǔn)參照物，2、4：擴(kuò)增產(chǎn)物，均為711 bp，3、5：MwoⅠ60℃消化3 h后的產(chǎn)物片段，可見429和282 bp片段；1C：A719G基因型突變檢測(cè)的瓊脂糖凝膠電泳圖，1、3：擴(kuò)增產(chǎn)物，373 bp，2、4：ACCⅠ37℃消化3 h后的產(chǎn)物片段，可見泳道2中有373、283和90 bp片段（90 bp片段過小，在凝膠中分辨率較低），而泳道4中仍為373 bp產(chǎn)物，5：標(biāo)準(zhǔn)參照物

二、TPMT基因型與硫唑嘌呤不良反應(yīng)

測(cè)定2組共120份樣本TPMT基因型，部分凝膠電泳結(jié)果如圖1所示。共發(fā)現(xiàn)基因突變7例，其中患者5例（7.1%），健康對(duì)照2例（4.0%），均為TPMT*3C（A719G）型雜合突變，基因型突變頻率為5.8%，等位基因突變頻率為2.9%。病例組與對(duì)照組TPMT*3C突變頻率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.108，P=0.742）。

病例組12例有不良反應(yīng)者中，發(fā)現(xiàn)TPMT*3C型突變3例，基因型突變頻率為25%，等位基因突變頻率為12.5%；58例無不良反應(yīng)者中，TPMT*3C型突變2例，基因型突變頻率為3.4%，等位基因突變頻率為1.7%，有不良反應(yīng)組基因突變頻率顯著高于無不良反應(yīng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=40.093，P=0.043）?；蛲蛔冃停═PMT*3C）低活性率為20.0%，野生型（TPMT*1）為1.5%，基因突變型人群TPMT低活性發(fā)生率明顯低于野生型人群，因例數(shù)太少，未做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

討 論

近年來藥物遺傳學(xué)和藥物基因組學(xué)研究迅速發(fā)展，使臨床醫(yī)師更加重視個(gè)體化用藥方案。TPMT活性和遺傳多態(tài)性與硫嘌呤類藥物療效及不良反應(yīng)間的密切聯(lián)系已被證實(shí)。TPMT活性和基因型的檢測(cè)在國(guó)外已逐漸作為硫嘌呤類藥物使用前的常規(guī)檢查，尤其在皮膚科醫(yī)生中使用率更高［4-5］。英國(guó)的一份調(diào)查顯示［6］，67%英國(guó)臨床醫(yī)生會(huì)在患者服用硫唑嘌呤前進(jìn)行TPMT檢測(cè)。而在2005年，F(xiàn)DA將給藥前的TPMT基因型檢測(cè)列入硫唑嘌呤/巰基嘌呤的藥品說明書中［7］，英國(guó)國(guó)家藥典也建議在使用巰基嘌呤類藥物前應(yīng)進(jìn)行TPMT檢測(cè)。但目前該項(xiàng)檢測(cè)僅在國(guó)內(nèi)少部分三甲醫(yī)院開展，且并未得到皮膚科醫(yī)生的重視。

硫嘌呤類藥物在臨床中的使用存在個(gè)體差異，其原因最早于1970年代末Weinshiboum等［8］在人紅細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)TPMT的差異而被人所熟知。隨后他們展開了一系列研究，同樣也在淋巴細(xì)胞、肝組織、腎組織中發(fā)現(xiàn)了TPMT活性水平的差異。用藥后的藥物監(jiān)測(cè)存在滯后性，不能從根本上解決TPMT缺乏導(dǎo)致的一系列不良反應(yīng)。因此，首次給藥前的TPMT檢測(cè)能夠幫助臨床制訂更為安全有效的給藥方案。

本研究顯示，發(fā)生不良反應(yīng)的患者TPMT基因型突變率明顯高于未發(fā)生不良反應(yīng)者，提示患者服用硫唑嘌呤后出現(xiàn)的不良反應(yīng)可能與TPMT基因突變有關(guān)。硫嘌呤類藥物在體內(nèi)有3條代謝途徑，其中TPMT代謝途徑最為重要。TPMT是硫嘌呤類藥物體內(nèi)代謝的關(guān)鍵酶，當(dāng)TPMT發(fā)生突變時(shí)，酶活性受到影響（酶活性降低或丟失），直接導(dǎo)致機(jī)體對(duì)硫嘌呤類藥物的代謝，導(dǎo)致鳥嘌呤核苷酸（TGNs）產(chǎn)物堆積過剩，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)引發(fā)DNA和RNA損傷、細(xì)胞凋亡，最終導(dǎo)致不良反應(yīng)的發(fā)生。鑒于口服硫唑嘌呤個(gè)體差異較大，并與TPMT基因突變有關(guān)，為降低不良反應(yīng)發(fā)生率，指導(dǎo)臨床醫(yī)生用藥，2011年美國(guó)臨床遺傳藥物學(xué)行業(yè)協(xié)會(huì)在Nature上發(fā)布了TPMT基因型檢測(cè)和巰基嘌呤用量的指南［9］。

但在研究中我們也發(fā)現(xiàn)，有小部分明確基因型突變的慢性光化性皮炎患者對(duì)口服硫唑嘌呤有良好的耐受性，且治療效果顯著，而有一些患者雖沒有明確的基因型突變，但卻出現(xiàn)一定程度的不良反應(yīng)，提示TPMT基因型與表現(xiàn)型不完全一致。本研究顯示，采用TPMT基因突變預(yù)測(cè)口服硫唑嘌呤不良反應(yīng)的發(fā)生準(zhǔn)確性達(dá)84.3%（59/70）。有研究發(fā)現(xiàn)［10］，健康志愿者TPMT活性和基因型的一致性達(dá)到98.4%，而在中等活性人群中兩者的一致性降至86%。研究表明［11］，TPMT基因型較紅細(xì)胞TPMT活性在預(yù)測(cè)藥物不良反應(yīng)上更準(zhǔn)確，更適用于藥物前的初始篩查，而兩者聯(lián)合檢測(cè)，能有效降低TPMT缺失的漏檢率［12］，從而更好地降低藥物使用風(fēng)險(xiǎn)，為患者進(jìn)行更優(yōu)化的個(gè)體化治療。因此，研究人員更推薦將基因型作為用藥前的初始檢測(cè)，基因型檢測(cè)能夠降低將TPMT缺失誤檢為TPMT中等活性的風(fēng)險(xiǎn)［11］。因TPMT活性過高需要增加用藥劑量以達(dá)到療效的患者，及部分基因型正常但酶中等活性的人群則需要進(jìn)行表型檢測(cè)。

近年已有文獻(xiàn)報(bào)道除TPMT外，ITPA、HPRT、XO、IMPDH等酶均與硫嘌呤類藥物代謝相關(guān)，但本研究?jī)H分析了TPMT代謝酶。此外，還有一些TPMT未知突變位點(diǎn)也未考慮。因此，今后還需進(jìn)行大樣本前瞻性研究，進(jìn)一步優(yōu)化硫嘌呤類藥物的個(gè)體化應(yīng)用。

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·讀者·作者·編者·

論文中有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的描述

目前，使用各種動(dòng)物進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)性研究越來越多，但我們發(fā)現(xiàn)，作者對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所作的描述很不完整。根據(jù)1988年頒布的中華人民共和國(guó)國(guó)家科學(xué)技術(shù)委員會(huì)令第2號(hào)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》和衛(wèi)生部1998年頒布的《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理實(shí)施細(xì)則》，論文中有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的描述，要求寫清楚以下事項(xiàng)：①品種、品系及亞系的確切名稱；②遺傳背景或其來源；③性別、年齡、體重；④質(zhì)量等級(jí)及合格證編號(hào)；⑤飼養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)環(huán)境；⑥健康狀況；⑦對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處理方式。醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四級(jí)：一級(jí)為普通級(jí)，二級(jí)為清潔級(jí)，三級(jí)為無特定病原體（SPF）級(jí)，四級(jí)為無菌級(jí)。衛(wèi)生部級(jí)課題及研究生畢業(yè)論文等科研實(shí)驗(yàn)必須應(yīng)用二級(jí)以上的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

Significance and application of individualized detection of thiopurine S-methyltransferase in patients with chronic actinic dermatitis

Jiang Xue,Han Xiaofeng,Qian Siyu,Shi Bingjun,Diao Qingchun
Department of Dermatology,Chongqing First People′s Hospital and Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital,Chongqing 400011,China

Diao Qingchun,Email:qchundiao@vip.sina.com

ObjectiveTo investigate correlations of thiopurine S-methyltransferase（TPMT）activity（phenotype）and genotype with adverse reactions after oral azathioprine treatment in patients with chronic actinic dermatitis,and to explore optimal azathioprine dose for the treatment of chronic actinic dermatitis.MethodsTotally,70 patients with chronic actinic dermatitis treated with oral azathioprine were enrolled into this study and served as patient group,of whom,12 had adverse reactions to azathioprine.In addition,50 health checkup examinees were enrolled as the control group.EDTA-anticoagulated blood samples were collected from the patients and controls,and erythrocytes lysates were prepared.High performance liquid chromatography（HPLC）was performed to evaluate the activity of TPMT.Genome-wide DNA was extracted from the blood samples,and TPMT genotypes were detected by allele-specific PCR and PCR-restriction fragment length polymorphism（RFLP）analysis.ResultsThere was no significant difference in the TPMT activity between the patient group and control group（［25.80 ± 8.34］U/mlvs.［23.58±5.70］U/ml,t=0.782,P＞0.05）.However,the TPMT activity was significantly lower in patients with adverse reactions than those without（［18.86 ± 9.22］U/mlvs.［27.27 ± 6.72］U/ml,t=3.437,P＜0.05）.TPMT genotypes were detected among 120 samples,and a heterozygous mutation TPMT*3C（A719G）was found in the TPMT gene in 7 samples,including 5 in the patient group and 2 in the control group.The frequencies of the mutant genotype and allele were 5.8%（7/120）and 2.9%respectively.No significant difference in the frequency of TPMT*3C mutation was observed between the patient group and control group（χ2=0.108,P=0.742）.The TPMT*3C mutation was found in 3 of the 12 patients with adverse reactions,as well as in 2 of 58 patients without adverse reactions.Additionally,the frequency of TPMT*3C mutation was significantly higher in patients with adverse reactions than in those without（χ2=40.093,P＜ 0.05）.ConclusionAdverse reactions after oral azathioprine treatment are associated with TPMT mutations and decreased TPMT activity in patients with chronic actinic dermatitis,so appropriately adjusting the azathioprine dose in patients with low-activity and mutant-type TPMT can facilitate safe treatment.

Dermatitis,photoallergic;Azathioprine;Drug toxicity;DNA mutational analysis;Thiopurine methyltransferase

刁慶春，Email：qchudiao@vip.sina.com

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2017.03.009

重慶市中醫(yī)院院內(nèi)培育課題（2209014313）

Fund program:The intramural research program of Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital（2209014313）

2016-06-22）

（本文編輯：周良佳 顏艷）